一种液体型纤维蛋白原检测试剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及体外诊断试剂技术领域，具体设及一种稳定的液体型纤维蛋白原检测 试剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 纤维蛋白原（Fibrinogen, FIB)是肝脏合成的一种血浆球蛋白，是体内重要的凝 血因子，其主要的生理功能是作为凝血因子I参与体内凝血过程。血浆中的纤维蛋白原在 过量纤维蛋白原的作用下，它会由可溶的蛋白转变为不可溶的聚合物，从而形成纤维蛋白 凝块。血浆的凝集时间和纤维蛋白质量分数成反比，在纤维蛋白原过量的情况下，测定的血 浆的凝集时间，通过纤维蛋白原标准曲线计算公式便可得到待测纤维蛋白原质量分数。
[0003] 随着血栓与止血检测在临床上的广泛应用，纤维蛋白原（FIB)检测已成为出血和 血栓检验的常规检测项目，具有重要的临床诊断意义。
[0004] 纤维蛋白原的测定过程受多种因素的影响，其中试剂的质量是最关键因素，由于 目前国产的纤维蛋白原检测试剂普遍存在产品质量不稳定、敏感性差的问题，致使检测结 果不稳定，不同的临床检验实验室之间测得的结果难W比较，因此目前临床实验室所使用 的试剂绝大部分为进口产品，价格昂贵。另一方面，由于试剂的稳定性问题，目前国内外的 纤维蛋白原检测试剂几乎均为冻干粉剂型，使用前需要进行复溶，操作麻烦、瓶间差异大， 且试剂复溶后质量稳定性差。
【发明内容】
[0005] 基于此，为了克服上述现有技术的缺陷，本发明提供了一种液体型纤维蛋白原检 测试剂及其制备方法。
[0006] 为了实现上述发明目的，本发明采取了 W下技术方案：
[0007] 一种液体型纤维蛋白原检测试剂，包括：
[000引凝血酶试剂，其包括凝血酶、氨基酸、表面活性剂、牛血清白蛋白、明胶、甘露醇和 水；
[0009] 样本稀释液，其包括咪挫、氯化钢和水。
[0010] 所述凝血酶试剂的抑值为6. 0~8. 0。
[0011] 所述凝血酶试剂的凝血酶酶活力2000~35000lU/mL。
[0012] 所述氨基酸的质量分数为3%~10% ;
[0013] 所述表面活性剂的体积分数为0. 1 %~0. 5% ;
[0014] 所述牛血清白蛋白的质量分数为6%~15% ;
[0015] 所述明胶的质量分数为0. 1 %~0. 5% ;
[0016] 所述甘露醇的质量分数为3%~10%。
[0017] 还包括缓冲盐，且其浓度为40~500mmol/L。
[001引还包括防腐剂，且其质量分数为0. 1%。
[0019] 所述样本稀释溶液的抑值为6. 0~8. 0。
[0020] 所述咪挫质量分数为0. 15%~0. 5% ;
[0021] 所述氯化钢质量分数为0. 5%~2% ;
[0022] 所述氨基酸为甘氨酸；
[0023] 所述表面活性剂为吐温60或吐温80。
[0024] 一种液体型纤维蛋白原检测试剂的制备方法，包括：
[0025] 保护液配制；将甘氨酸、吐温60或吐温80、牛血清白蛋白、明胶、甘露醇溶解于水 中揽拌溶解，并调节抑值为6. 0~8. 0 ;
[0026] 凝血酶试剂配制；用保护液溶解凝血酶冻干粉得到凝血酶试剂。
[0027] 样本稀释液配制；称取咪挫和氯化钢，加入纯化水，揽拌进行溶解，调节抑值为 6.0~8.0,得到样本稀释液。
[002引与现有技术相比，本发明具有W下有益效果：
[0029] 1)试剂生产过程简化，生产设备简单，无冻干过程，生产成本低；
[0030] 。使用为即开即用型，不需复溶，操作方便；
[0031] 3)不存在因所用水的质量或体积差异造成的差异，瓶间差异在3% W内；
[0032] 试剂稳定性高，瓶间一致性好，37°C热稳定在30天W上，2~8°C密封储存可稳定 18个月W上。
【附图说明】
[0033] 图1为本发明一种液体型纤维蛋白原检测试剂的制备方法流程示意图。
【具体实施方式】
[0034] 为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结 合具体图示进一步阐述本发明。
[0035] 如图1所示，一种液体型纤维蛋白原检测试剂制备方法，包括凝血酶试剂的配制 包括：
[0036] 保护液配制；将缓冲剂、含氨基酸、表面活性剂、牛血清白蛋白、明胶、甘露醇、防腐 剂溶解于水中揽拌溶解，并调节抑值为6. 0~8. 0 ;
[0037] 凝血酶试剂配制；用保护液溶解凝血酶冻干粉得到凝血酶试剂。
[003引样本稀释液配制；称取咪挫和氯化钢，加入纯化水，揽拌进行溶解，调节抑值为 6.0~8.0,得到样本稀释液。
[0039] 缓冲剂为Tris，浓度为40~SOOmmol/l，氨基酸为甘氨酸，质量分数为3 %~ 10%，表面活性剂为 Tween-60 (吐温 60)或 Tween-80,用量（v/v)为 0. 1 %~0. 5% ;BSA 质量分数为6%~15%，明胶质量分数为0. 1 %~0. 5%，甘露醇质量分数为3%~10%，防 腐剂为叠氮钢，质量分数0. 1 %。
[0040] 凝血酶试剂配制；用保护液溶解凝血酶冻干粉得到凝血酶试剂；
[0041] 凝血酶为商品化的牛源凝血酶冻干粉，终浓度为2000IU~3500IU/mL。
[0042] 样本稀释液配制；称取咪挫和氯化钢，加入纯化水，揽拌进行溶解，抑值为6. 0~ 8. 0，
[0043] 得到样本稀释液；样本稀释液咪挫的质量分数为0. 15%~0. 5%，氯化钢的质量 分数为0. 5%~2%。
[0044] 凝血酶试剂的配制可先于或晚于样本稀释液配制进行，也可W同时进行。
[0045] 本申请还公开了一种液体型纤维蛋白原检测试剂，包括凝血酶试剂和样本稀释 液，该凝血酶试剂中含有凝血酶、氨基酸、表面活性剂、牛血清白蛋白、明胶和甘露醇，溶剂 为水，抑为6. 0-8.0。其中，氨基酸优选甘氨酸，表面活性剂优选吐温60或吐温80。该样 本稀释液含有咪挫和氯化钢，溶剂为水。
[0046] 本申请中甘氨酸、甘露醇与其他试剂组分配合能够很好地保持凝血酶在液体试剂 中的稳定性，制备的液体型试剂在2~8°C密封储存18个月后，用该试剂进行纤维蛋白原 检测，检测结果偏移在10% W内。另外，该凝血酶试剂还可W含有缓冲盐更好地维持试剂 的抑值，W更好地保持凝血酶的活性。该凝血酶试剂还可W含有防腐剂，W可W抑制试剂 中维生物的生长，有利于试剂长期保存。常用的诊断试剂的防腐剂均可使用，例如叠氮钢。
[0047] 下面W-个具体实施例具体介绍一个液体型纤维蛋白原检测试剂的组成、制备方 法，W及稳定性性能。
[0048] 实施例1液体型纤维蛋白原检测试剂的制备方法
[0049] 1保护液配制；称取Tris6. 06g(50mmol/L)、甘氨酸50g(质量分数为5% )、BSA lOOg (质量分数为10 % )、明胶2g (质量分数为0. 2 % )、甘露醇40g (质量分数为4 % )、 Tween - 60 2血(v/v为0. 2% )、叠氮钢Ig(质量分数为0. 1% )，加入1L纯化水，揽拌使其 充分溶解，用0.1mol/L的化0H调抑为7. 0。
[0化日]2过滤除菌：用水润湿0. 45 y m的=醋酸纤维素，紧贴放在抽滤过滤器砂巧上对保 护液进行抽滤，收集滤液得到滤清的保护液，去除配制过程中的少量不溶物。
[0化^ 3凝血酶试剂配制：取10支1血规格、200000IU/血的凝血酶冻干品，分别用1血 保护液溶解10分钟后，转移至盛保护液的容器中，清洗3次，也全部转移至盛保护液的容器 中，合并得到约1L凝血酶试剂。
[005引 4样本稀释液配制；称取2g咪挫、lOg氯化钢，用1L纯化水进行溶解，用0.1 mo 1/ L的盐酸调整抑值为7. 4,得到样本稀释液。
[005引 5纤维蛋白原（FIB)检测试剂性能检测：
[0化4] 检测方法为；待测血浆或质控品用样本稀释液先W 1:10稀释，然后取200 y L作为 样本，37°C育温3分钟后加入100 y L凝血酶试剂，W Sysmex CA-1500血凝仪凝固法进行检 测。
[00巧]1)准确性检测
[0化6] 上述凝血酶试剂及样本稀释液按上述检测方法在Sysmex CA-1500血凝仪上 用Siemens FI B试剂校准按说明书操作进行校准，检测W册纤维蛋白原标准物Blood Coagulat ion Fibrinogen Plasma (09/264)，结果如下表 1 ;
[0057] 表1试剂的校准及准确性检测结果（单位；mg/化）
[005引
【主权项】
1. 一种液体型纤维蛋白原检测试剂，其特征在于，包括： 凝血酶试剂，其包括凝血酶、氨基酸、表面活性剂、牛血清白蛋白、明胶、甘露醇，溶剂为 水； 样本稀释液，其包括咪唑、氯化钠，溶剂为水。
2. 根据权利要求1所述的液体型纤维蛋白原检测试剂，其特征在于，所述凝血酶试剂 的pH值为6. O~8.0。
3. 根据权利要求2所述的液体型纤维蛋白原检测试剂，其特征在于，所述凝血酶试剂 的凝血酶酶活力2000~35000IU/mL。
4. 根据权利要求1至3中任意一项所述的液体型纤维蛋白原检测试剂，其特征在于，所 述氨基酸的质量分数为3%~10% ; 所述表面活性剂的体积分数为〇. 1 %~〇. 5% ; 所述牛血清白蛋白的质量分数为6%~15% ; 所述明胶的质量分数为〇. 1 %~〇. 5% ; 所述甘露醇的质量分数为3%~10%。
5. 根据权利要求4所述的液体型纤维蛋白原检测试剂，其特征在于，所述氨基酸为甘 氨酸。
6. 根据权利要求5所述的液体型纤维蛋白原检测试剂，其特征在于，所述表面活性剂 为吐温60或吐温80。
7. 根据权利要求1所述的液体型纤维蛋白原检测试剂，其特征在于，所述样本稀释溶 液的pH值为6.0~8.0。
8. 根据权利要求1或7所述的液体型纤维蛋白原检测试剂，其特征在于， 所述咪唑质量分数为0. 15%~0. 5% ; 所述氯化钠质量分数为〇. 5%~2%。
9. 一种液体型纤维蛋白原检测试剂的制备方法，其特征在于，包括： 保护液配制：将甘氨酸、吐温60或吐温80、牛血清白蛋白、明胶、甘露醇溶解于水中搅 拌溶解，并调节PH值为6. 0~8. 0 ; 凝血酶试剂配制：用保护液溶解凝血酶冻干粉得到凝血酶试剂。
10. 根据权利要求9所述的液体型纤维蛋白原检测试剂制备方法，其特征在于，样本稀 释液配制：称取咪唑和氯化钠，加入纯化水，搅拌进行溶解，调节PH值为6. 0~8. 0,得到样 本稀释液。
【专利摘要】本发明公开一种液体型纤维蛋白原检测试剂及其制备方法，制备方法包括1)保护液配制：将缓冲剂、含氨基酸、表面活性剂、牛血清白蛋白、明胶、甘露醇、防腐剂溶解于水中搅拌溶解，并调节pH值为6.0～8.0；2)凝血酶试剂配制：用步骤2)得到的保护液溶解凝血酶冻干粉得到凝血酶试剂。一种液体型纤维蛋白原检测试剂,包括：凝血酶试剂，其包括凝血酶、缓冲剂、氨基酸、表面活性剂、牛血清白蛋白、明胶、甘露醇、防腐剂和水。本发明试剂生产过程简化，生产设备简单，生产成本低；即开即用型，瓶间差异小；试剂稳定性高。
【IPC分类】C12Q1-56
【公开号】CN104630325
【申请号】CN201510058314
【发明人】艾峰, 肖国伟, 潘仁斌
【申请人】上海长岛生物技术有限公司
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2015年2月4日