一种治疗光化性角化病的原料药物巨大戟醇甲基丁烯酸酯的制备方法
【技术领域】：
[0001] 本发明属于药物制备方法技术领域，具体地，设及一种治疗光化性角化病原料药 物巨大戟醇的制备方法。
【背景技术】
[000引 2012年1月23日美国FDA批准了巨大戟醇甲基了締酸醋（Ingenol Mebutate)， 作为用于治疗光化性角化病（Actinic Keratosis, AK，对阳光敏感的一种皮肤病）药物上 市。该药物的商品名Picato,由LEO化arma AS研发成功。
[000引巨大戟醇甲基了締酸醋（Ingenol Mebutate)，可W从大戟属植物巧uphorbia) 中提取分离纯化，如化地orbia peplus, Euphorbia hirta, Euphorbia 化ummondi，及中药 Euphorbia lathyris(千金子），Euphorbia kansui (甘遂）等同属植物都含有该原料药 物。但该原料药物含量很低，而其Ingenol Mebutate的母核骨架化合物Ingenol,同属植 物中也分布很广，可供提取分离纯化。母核Ingenol为四环二祗天然产物，其中B环、C环 是由环张力非常大的bicyclic[4, 4, l]undecane构成，由于其桥头上的inside-outside stereochemistry,即构成C环的C-11到C-14在桥头异侧，使其张力大增。合成化学家对 此特殊立体化学现象特别感兴趣，也使得Ingenol的全合成研究成为热点，Wood, Tanino/ Kuwajima, Winkler,化nk, Rigby等研究团队都完成了 Ingenol的全合成研究。最便捷的 Ingenol 全合成仅需^;：步反应。使得原料药物巨大戟醇甲基了締酸醋（Ingenol Mebutate) 可W从合成和半合成途径得到。
[0004] 南欧大戟巧uphorbia P巧lus Linn)，原产地中海沿岸（南欧至北非），归化于亚 洲、美洲和澳大利亚；我国的台湾（台北、台中）、广东、香港、福建（厦口、福州）、广西（南 宁）和云南（昆明）相继发现归化植株或种群，作为大戟属植物的一种，南欧大戟在云南省 已经广泛分布，田边地头，园林绿化区域，随处可见，因其乳汁具有毒性，不能作为牧草，资 源极大，是巨大戟醇甲基了締酸醋的原料资源基础。
[0005] 迄今为止，现有技术中未见有从南欧大戟中提取巨大戟醇甲基了締酸醋工业药物 原料的工艺方法的报道。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种从广布云南地区的外来植物南欧大戟巧uphorbia P巧lus)中提取分离纯化天然原料药物巨大戟醇甲基了締酸醋（Ingenol Mebutate)的方 法。该工艺方法具备分离纯化快捷简单，高效高纯，成本较低等优点。
[0007] 为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：
[000引巨大戟醇甲基了締酸醋的制备方法，包括下述步骤：原料提取、石油離萃取、大孔 树脂D101吸附干法拌样划段、硅胶分离、Sephadex凝胶纯化、DI化硅胶纯化；
[0009] 所述的原料提取为；采集各地的南欧大戟或同属植物全草，在自然阳光下惊晒干 燥，切碎后w甲醇浸泡，加热回流提取=次，过滤除去残渣，滤液浓缩后得总浸膏；
[0010] 所述的石油離萃取为：总浸膏水混悬分散后，W体积比1:1石油離萃取3次，分液 浓缩石油離部分，得石油離总浸膏；
[0011] 所述的大孔树脂D101吸附干法拌样划段是用石油離总浸膏，用适量氯仿溶解，与 大孔树脂D101干法拌样，然后用大孔树脂柱粗分离，W甲醇/水溶液作为流动相，按40 %、 60%、80%、100%洗脱，收集80%甲醇水溶液洗脱洗脱流份，减压浓缩回收溶液，得到浸膏 为总二祗部位；
[0012] 所述硅胶分离为；W适量氯仿溶解后硅胶拌样，装硅胶柱粗分离，用石油離/己酸 己醋作为洗脱液进行梯度洗脱，得到8个主要部位化I-VIII，其中化VII WC18柱分离， 再得10个亚部位sub化1-10 ;
[0013] 所述Se地adex凝胶纯化为；对亚部位subRr8-9,再上Se地adex凝胶柱用甲醇洗 脱，收集流份浓缩，得到目标化合物单体；
[0014] 所述DI化硅胶纯化为：得到单体化合物，经DI化硅胶再次分离纯化，得到纯度 98% W上巨大戟醇甲基了締酸醋。
[0015] 如所述的巨大戟醇甲基了締酸醋的制备方法，其中所述的方法关键步骤为大孔树 脂D101吸附拌样划段得到总二祗部位；Se地adex凝胶柱层析纯化得到化合物单体；DIOL 硅胶柱层析纯化得到高纯目标原料单体。
[0016] 如所述的巨大戟醇甲基了締酸醋的制备方法，其中所述的方法为取南欧大戟全 草，干燥，切碎后W甲醇浸泡，加热回流提取=次，过滤除去残渣，滤液浓缩后得总浸膏，浸 膏W 2化水混悬分散后，体积比1:1石油離萃取5次，浓缩石油離部分，得石油離总浸膏，W 适量氯仿溶解浸膏，用大孔树脂D101干法拌样，然后用大孔树脂柱粗分离，W甲醇/水溶液 作为流动相，按40 %、60 %、80 %、100 %洗脱；对80 %甲醇洗脱液浓缩回收得总二祗部位， W适量氯仿溶解后硅胶200~300目拌样，装硅胶柱粗分离，W 20:1-0:1的石油離：己酸 己醋进行梯度洗脱，得到8个主要部位化I-VIII，其中化VII WC18柱分离，得10个亚部 位sub化1-10, sub化9再上se地adex凝胶柱用甲醇洗脱，得到纯度90% W上的目标化合物， 再次经DI化分离纯化，得到纯度98%W上的巨大戟醇甲基了締酸醋Ingenol Mebutate。
【具体实施方式】
[0017] 下面用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不W此来限定本 发明。
[001引实施例1
[0019] Ingenol Mebutate 的制备；
[0020] 1.原料甲醇提取：采集各地的南欧大戟巧uphorbia P巧lus Linn)或同属植物全 草，在自然阳光下惊晒干燥，切碎后W甲醇浸泡，加热回流提取=次，过滤除去残渣，滤液浓 缩后得总浸膏。
[0021] 2.石油離萃取；总浸膏水混悬分散后，W体积比1:1石油離萃取3次，分液浓缩石 油離部分，得石油離总浸膏。
[002引 3.大孔树脂D101吸附干法拌样划段巧油離总浸膏用适量氯仿溶解，与大孔树 脂D101干法拌样，然后用大孔树脂柱粗分离，W甲醇/水溶液作为流动相，按40%、60%、 80%、100%洗脱。收集80%甲醇水溶液洗脱洗脱流份，减压浓缩回收溶液，得到浸膏为总二 祗部化。
[0023] 4.硅胶分离；W适量氯仿溶解后硅胶拌样，装硅胶柱粗分离，用石油離/己酸己 醋作为洗脱液进行梯度洗脱，得到8个主要部位（化I-VIII)，其中化VII WC18(化ji Silysia化emical公司）柱分离，再得10个亚部位sub化1-10。目标化合物主要在 subRr8-9。
[0024] 5. Se地adex凝胶纯化；对亚部位subRr8-9,再上Se地adex凝胶柱用甲醇洗脱，收 集流份浓缩，得到目标化合物单体。
[0025] 6. DI化硅胶纯化；得到单体化合物，经DI化硅胶再次分离纯化，得到纯度98% W 上巨大戟醇甲基了締酸醋（Ingenol Mebutate)。
[0026] 上述方法的关键点在于：
[0027] 1.大孔树脂D101吸附拌样划段得到总二祗部位；
[002引 2. Se地adex凝胶纯化得到化合物单体；
[0029] 3. DI化硅胶纯化得到高纯目标原料单体。
[0030] 实施例2
[0031] 巨大戟醇甲基了締酸醋（Ingenol Mebutate)的制备；
[0032] 从南欧大戟全草植物分离原料药物巨大戟醇甲基了締酸醋：
[0033] 南欧大戟巧uphorbia P巧lus Li皿）采集于昆明北郊，干燥全草20kg，切碎后W甲 醇浸泡，加热回流提取S次（3X 10化)，过滤除去残渣，滤液浓缩后得总浸膏约化g，浸膏W 2化水混悬分散后，体积比1:1石油離萃取5次，浓缩石油離部分，得石油離总浸膏4kg，W 适量氯仿溶解浸膏，用大孔树脂D101 (天津市海光化工有限公司）干法拌样，然后用大孔树 脂柱粗分离，W甲醇/水溶液作为流动相，按40 %、60 %、80 %、100 %洗脱。对80 %甲醇洗 脱液浓缩回收得总二祗部位300g，W适量氯仿溶解后硅胶（200~300目）拌样，装硅胶柱 粗分离，W石油離：己酸己醋（20:1-0:1)进行梯度洗脱，得到8个主要部位（化I-VIII)， 其中化 VIlWC18(F'uji Silysia Qiemical 公司）柱分离，得 10 个亚部位 subRrl-lO， sub化9再上se地adex凝胶柱用甲醇洗脱，得到目标化合物（106mg)，纯度90% W上。再次 经DI化(puji Silysia化emical公司）分离纯化，得到巨大戟醇甲基了締酸醋（Ingenol Mebutate) (95mg)，纯度98 % W上，得率百万分之4. 75%。
[0034]
【主权项】
1. 巨大戟醇甲基丁烯酸酯的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤：原料提取、 石油醚萃取、大孔树脂DlOl吸附干法拌样划段、硅胶分离、S印hadex凝胶纯化、DIOL硅胶纯 化， 所述的原料提取为：取南欧大戟或同属植物全草，干燥，切碎后以甲醇浸泡，加热回流 提取三次，过滤除去残渣，滤液浓缩后得总浸膏； 所述的石油醚萃取为：总浸膏水混悬分散后，以体积比1:1石油醚萃取3次，分液浓缩 石油醚部分，得石油醚总浸膏； 所述的大孔树脂DlOl吸附干法拌样划段是用石油醚总浸膏，用氯仿溶解，与大孔树 脂DlOl干法拌样，然后用大孔树脂柱粗分离，以甲醇/水溶液作为流动相，按40%、60%、 80%、100%洗脱，收集80%甲醇水溶液洗脱洗脱流份，减压浓缩回收溶液，得到浸膏总二萜 部位； 所述硅胶分离为：以氯仿溶解后硅胶拌样，装硅胶柱粗分离，用石油醚/乙酸乙酯作为 洗脱液进行梯度洗脱，得到8个主要部位Fr I - VIII，其中Fr VII以C18柱分离，再得10 个亚部位subFrl - 10 ; 所述Sephadex凝胶纯化为：对亚部位subFr8 - 9,再上Sephadex凝胶柱用甲醇洗脱， 收集流份浓缩，得到目标化合物单体； 所述DIOL硅胶纯化为：上一步骤得到的单体化合物，经DIOL硅胶再次分离纯化，得到 纯度98 %以上的巨大戟醇甲基丁烯酸酯。
2. 如权利要求1所述的巨大戟醇甲基丁烯酸酯的制备方法，其特征在于所述方法中大 孔树脂DlOl吸附拌样划段得到总二萜部位，S印hadex凝胶柱层析纯化得到化合物单体， DIOL硅胶柱层析纯化得到高纯目标原料单体为关键步骤。
3. 如权利要求1所述的巨大戟醇甲基丁烯酸酯的制备方法，其特征在于所述的方法为 取南欧大戟全草，干燥，切碎后以甲醇浸泡，加热回流提取三次，过滤除去残渣，滤液浓缩后 得总浸膏，浸膏以20L水混悬分散后，体积比1:1石油醚萃取5次，浓缩石油醚部分，得石油 醚总浸膏，以适量氯仿溶解浸膏，用大孔树脂DlOl干法拌样，然后用大孔树脂柱粗分离，以 甲醇/水溶液作为流动相，按40 %、60 %、80 %、100 %洗脱；对80 %甲醇洗脱液浓缩回收得 总二萜部位，以适量氯仿溶解后硅胶200~300目拌样，装硅胶柱粗分离，以20:1-0:1的石 油醚：乙酸乙酯进行梯度洗脱，得到8个主要部位Fr I-VIII，其中Fr VII以C18柱分离， 得10个亚部位subFrl-10, subFr9再上sephadex凝胶柱用甲醇洗脱，得到纯度90%以上的 目标化合物，再次经DIOL分离纯化，得到纯度98 %以上的巨大戟醇甲基丁烯酸酯Ingenol Mebutate0
【专利摘要】一种治疗光化性角化病的原料药物巨大戟醇甲基丁烯酸酯的制备方法，包括下述步骤：原料提取、石油醚萃取、大孔树脂D101吸附干法拌样划段、硅胶分离、Sephadex凝胶纯化、DIOL硅胶纯化。该方法从南欧大戟全草植物分离原料药物巨大戟醇甲基丁烯酸酯，具备分离纯化快捷简单，高效高纯，成本较低等优点。
【IPC分类】C07C67-56, C07C69-533, C07C67-48
【公开号】CN104649901
【申请号】CN201510066743
【发明人】邱明华, 万落生, 彭惺蓉, 李忠荣, 周琳, 于慕湲
【申请人】中国科学院昆明植物研究所
【公开日】2015年5月27日
【申请日】2015年2月9日