4-(n-(4-氨基丁酰基))-氨基丁酸的制备方法及应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物制备技术领域，涉及4- (N- (4-氨基下醜基））-氨基下酸的制备方 法，还涉及其在氨酪酸及氨酪酸相关制剂(氨酪酸注射液、氨酪酸氯化轴注射液和注射用氨 酪酸）中对有关物质检测的应用。
【背景技术】
[0002] 氨酪酸化学名Y -氨基下酸，是一种氨基酸类药物，在体内与血氨结合生成尿素 排出体外，有降低血氨及促进大脑新陈代谢的作用，用于治疗各种类型的肝昏迷，也用于脑 卒后遗症、脑动脉硬化症、头部外伤后遗症及尿毒症、煤气中毒等所致的昏迷。在临床上主 要W注射剂的形式供病人使用。目前国内外质量标准对其有关物质的控制比较简单，对其 相关杂质研究的报道更是少之甚少。为了保证氨酪酸注射剂临床使用的安全性，我们对氨 酪酸及相关制剂的有关物质进行了系统的研究，发现4- (N- (4-氨基下醜基））-氨基下酸是 氨酪酸中最主要的杂质，与氨酪酸临床用药不良反应的发生有很大的关系。
[0003] 4- (N- (4-氨基了醜基））-氨基了酸又称氨酪酸杂质II，分子式为CsHieN2〇3,分子量 为188. 12,化学结构式如下：
【主权项】
1. 一种4-(N-(4-氨基丁酰基））-氨基丁酸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： 1) 合成中间体IA-I : 称取GABA，用碱溶液溶解后，冰浴下5min内滴加氯甲酸苄酯，滴毕，撤去冰浴，20~ 30°C反应1. 5~2. 5 h，用稀酸溶液调反应液pH至2,用乙酸乙酯萃取三次，合并酯层，酯层 用饱和氯化钠洗一次后，用无水硫酸钠干燥，柱层析得无色油状物，放置后析出白色固体， 即 IA-I ; 原料GABA :氯甲酸苄酯：碱的摩尔比为I :1. 2~1. 8 :2~3 ; 2) 合成中间体1A-2 : 将GABA、对甲苯磺酸、无水乙醇和甲苯混合均匀，加热至IKTC，回流18~22 h，反应完 成后，冷却至20~30°C，减压蒸除溶剂，得油状物，加入无水乙醚使溶解，于-18~-20°C放 置20~24h，趁冷过滤，得白色固体，即1A-2 ; 原料GABA :对甲苯磺酸：无水乙醇：甲苯的摩尔比为I :1. 1~1.3 :1. 4~1.8 :9~10 ; 3) 合成中间体2A : 将制得的IA-I和1A-2,溶解于乙腈中，然后加入Et3N和卡特缩合剂，搅拌，于25~ 35°C反应10~12h，然后加入反应液质量5~7倍的饱和碳酸氢钠水溶液，混合均匀，乙酸 乙酯萃取3次，合并酯层，酯层依次用5%(g/v)柠檬酸水溶液、水、饱和碳酸氢钠水溶液洗至 TLC检测无杂质点，干燥，过滤，减压蒸除溶剂，得无色油状物，静置0. 5~2h至固体完全析 出，过滤，得白色固体，即2A; IA-I :lA-2 =Et3N :卡特缩合剂的摩尔比为1 :1 :0. 8 :1 ;乙腈用量为IA-I和1A-2总质 量的3~5倍； 4) 合成中间体3A : 将步骤3)制得的2A，用体积比1: 1:1的甲醇、THF和H2O的混合溶剂溶解，然后加入 NaOH，搅拌，于25~35°C反应8~12h，反应完成后，减压蒸除有机溶剂后，用稀盐酸调pH 至6~7,析出固体，过滤，滤饼用蒸馏水洗涤，得白色固体，即3A ; 2A与NaOH的摩尔比为1 :1~2 ;混合溶剂用量为2A的质量10倍； 5 )合成产物4- (N- (4-氨基丁酰基））-氨基丁酸： 将步骤4)制得的3A用甲醇溶解后，加入Pd/C，然后用H2置换反应器内的空气，搅拌， 于25~35°C反应30~40 h，反应完成后，滤除Pd/C，滤液减压蒸除溶剂，析出白色固体，过 滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤，得白色固体，即本发明4-(N-(4-氨基丁酰基））-氨基丁酸； 3A与甲醇质量比为1:10。
2. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤1)所述的碱溶液为浓度1~ 4mol/L的NaOH或KOH的水溶液；所述的稀酸溶液浓度为4~8mol/L的盐酸、硫酸或磷酸。
3. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述的碱溶液为3mol/L的NaOH水 溶液；所述的稀酸溶液为6mol/L的盐酸。
4. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤1)所述的柱层析洗脱溶剂为石 油醚/乙酸乙酯混合液，石油醚与乙酸乙酯体积比为4:1。
5. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤1)所述的乙酸乙酯用量为反应 液体积的2倍，饱和氯化钠用量为酯层体积的1倍；步骤3)萃取时乙酸乙酯用量为反应液 质量的30~50%。
6. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤4)所述的稀盐酸浓度为lmol/ L0
7. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤5)滤除Pd/C时用装有硅藻土 的砂芯漏斗过滤。
8. 权利要求1所述的制备方法制备得到的4- (N- (4-氨基丁酰基））-氨基丁酸的应用， 其特征在于：用于氨酪酸原料及氨酪酸制剂中4- (N- (4-氨基丁酰基））-氨基丁酸含量的检 测。
9. 根据权利要求8所述的应用，其特征在于：用于氨酪酸原料及氨酪酸制剂中 4_ (N- (4-氨基丁酰基））-氨基丁酸含量的检测时，方法为： 1) 溶液的制备 对照品溶液：取4-(N-(4-氨基丁酰基））-氨基丁酸对照品采用水制备标准溶液，浓度 为每1ml溶液中含20 μ g的4-(N-(4-氨基丁酰基））-氨基丁酸对照品； 供试品溶液：取供试品采用水制备供试品溶液，浓度为每1ml溶液中含4mg氨酪酸供试 品； 流动相：包括A流动相和B流动相，A流动相与B流动相体积比为90 :10 ;A流动相：取 磷酸二氢钾10.0 g与己烷磺酸钠 I. lg，加水溶解并稀释至1000ml，用磷酸调节pH值至2. 1 ; B流动相：甲醇； 系统适用性溶液：取氨酪酸对照品、α-吡咯烷酮对照品和4-(N-(4-氨基丁酰 基））-氨基丁酸对照品，加水溶解并稀释制成每1ml溶液中含氨酪酸、α-吡咯烷酮和 4_ (Ν- (4-氨基丁酰基））-氨基丁酸分别为0. 4mg、4 μ g和20 μ g的溶液，作为系统适用性溶 液； 2) 色谱条件 仪器：Waters e2695高效液相色谱仪，PDA检测器，Alliance色谱工作站； 色谱柱：Venusil MP C18 柱，规格 Φ4·6_Χ250_，孔径 5μηι; 流动相：检测波长为210nm，柱温30°C，流速1.0 ml/min ; 3) 测定方法 取系统适用性溶液10 μ 1注入液相色谱仪，记录色谱图，再分别取供试品溶液和对照 品溶液各10 μ 1注入液相色谱仪，记录色谱图，以外标法计算4-(Ν-(4-氨基丁酰基））-氨 基丁酸的含量。
10. 根据权利要求9所述的应用，其特征在于：检测时配制的溶液中4-(Ν-(4-氨基丁 酰基））-氨基丁酸含量不超过〇· 5% ( wt)。
【专利摘要】本发明提供一种4-(N-(4-氨基丁酰基))-氨基丁酸的制备方法及应用。以氨酪酸（GABA）为起始原料，经酯化保护、卡特缩合、氢氧化钠及钯碳氢化还原脱保护等反应，制得4-(N-(4-氨基丁酰基))-氨基丁酸，制备得到的4-(N-(4-氨基丁酰基))-氨基丁酸主要用于氨酪酸原料及氨酪酸制剂中4-(N-(4-氨基丁酰基))-氨基丁酸含量的检测，氨酪酸制剂包括氨酪酸注射液、氨酪酸氯化钠注射液和注射用氨酪酸等。本发明制备方法原料易得，反应条件简单，操作方便，产率和纯度高，适合于4-(N-(4-氨基丁酰基))-氨基丁酸在实验室及中试规模的产业化生产，产品性质稳定，适合于氨酪酸及相关制剂检查使用。
【IPC分类】C07C231-12, G01N30-02, C07C237-12
【公开号】CN104649929
【申请号】CN201510077458
【发明人】史国生, 徐玉文, 谢元超, 王小兵, 郑静, 聂延君
【申请人】山东省食品药品检验研究院
【公开日】2015年5月27日
【申请日】2015年2月13日