甘油分解代谢缺陷型大肠杆菌菌株中的丝氨醇生产的制作方法
【专利说明】甘油分解代谢缺陷型大肠杆菌菌株中的丝氨醇生产
[0001] 本申请要求申请号EP 12184582. 0和US 61/700956的优先权，所述文献均通过引 用的方式完整并入作为参考。
[0002] 本发明涉及在大肠杆菌菌株中的丝氨醇生产。更具体地，用于此目的的大肠杆菌 菌株是甘油分解代谢缺陷的。
[0003] 丝氨醇（2-氨基-1，3-丙二醇；图1)属于氨基醇类并且是氨基酸丝氨酸的结构类 似物。
[0004] 图1:丝氨醇的结构式
【主权项】
1. 一种用于产生丝氨醇的方法，包括 i) 培养无磷酸丙糖异构酶活性和有磷酸二羟丙酮氨基转移酶活性的大肠杆菌宿主细 胞以将甘油转化成丝氨醇， ii) 通过向细胞培养物至少添加甘油，诱导从甘油转化成丝氨醇， iii) 从细胞培养物分离丝氨醇。
2. 根据权利要求1所述的方法，其中大肠杆菌宿主细胞额外地无甲基乙二醛合酶活 性。
3. 根据权利要求1和2所述的方法，其中在大肠杆菌宿主细胞中额外地失活glpDNA 结合转录阻遏蛋白。
4. 根据任一前述权利要求所述的方法，其中通过将表达载体导入包含转基因的宿主细 胞中实现活性磷酸二羟丙酮氨基转移酶的表达，所述转基因编码具有转化甘油成丝氨醇的 活性的磷酸二羟丙酮氨基转移酶。
5. 分离的重组表达载体，其包含转基因，所述转基因编码具有转化甘油成丝氨醇的活 性的磷酸二羟丙酮氨基转移酶并且其中磷酸二羟丙酮氨基转移酶的表达是可诱导的。
6. 根据权利要求4所述的分离的重组表达载体，其中载体是pCOLADuet-1。
7. 根据权利要求5和6所述的分离的重组表达载体，其中重组表达载体选自 a. pCOLADuet-1::rtxA、 b. pCOLADuet-1::rtxD::rtxA、 c. pCOLADuet-1::rtxEFG::rtxA和 d. pCOLADuet-1::rtxDEFG::rtxA? 其中rtxA编码具有转化甘油成丝氨醇的活性的磷酸二羟丙酮氨基转移酶。
8. 具有能够将甘油转化成丝氨醇的磷酸二羟丙酮氨基转移酶活性的重组大肠杆菌菌 株，其中在大肠杆菌宿主细胞中磷酸丙糖异构酶是失活的。
9. 根据权利要求8所述的重组大肠杆菌菌株，其中在大肠杆菌宿主细胞中甲基乙二醛 合酶是额外地失活的。
10. 根据权利要求8和9所述的重组大肠杆菌菌株，其中在大肠杆菌宿主细胞中glp DNA结合转录阻遏蛋白是额外地失活的。
11. 根据权利要求8至10所述的重组大肠杆菌菌株，其中通过使用权利要求5至7中 定义的表达载体，将活性磷酸二羟丙酮氨基转移酶导入所述菌株中。
12. 重组大肠杆菌菌株，其选自 a. 大肠杆菌菌株MG1655AtpiA、 b. 大肠杆菌菌株MG1655AtpiAAmgsA、 c. 大肠杆菌菌株MG1655AtpiAAglpR和 d. 大肠杆菌菌株MG1655AtpiAAmgsA， 其中rtxA受tpiA的天然启动子调节并且其中rtxA编码具有转化甘油成丝氨醇的活 性的磷酸二羟丙酮氨基转移酶。
13. 重组大肠杆菌菌株，其选自 a. 大肠杆菌菌株HMS174(DE3)AtpiA、 b. 大肠杆菌菌株HMS174(DE3)AtpiAAmgsA、 c. 大肠杆菌菌株HMS174(DE3)AtpiAAglpR、 d. 大肠杆菌菌株HMS174(DE3)AtpiAAmgsAAglpR，且 其中菌株用pCOLADuet-1: :rtxA转化并且其中rtxA编码具有转化甘油成丝氨醇的活 性的磷酸二羟丙酮氨基转移酶。
14. 根据权利要求13所述的重组大肠杆菌菌株，其中菌株用 pCOLADuet-1: :rtxD::rtxA转化。
15. 根据权利要求13所述的重组大肠杆菌菌株，其中菌株用 pCOLADuet-1: :rtxEFG::rtxA转化。
16. 根据权利要求13所述的重组大肠杆菌菌株，其中菌株用 pCOLADuet-1: :rtxDEFG::rtxA转化。
17. 根据权利要求8-16所述的任一大肠杆菌菌株的用途，用于将甘油转化成丝氨醇。
【专利摘要】本发明涉及能够将甘油转化成丝氨醇的大肠杆菌宿主细胞。另外，公开了一种用于产生丝氨醇的方法，所述方法包括培养无磷酸丙糖异构酶活性和有磷酸二羟丙酮氨基转移酶活性的大肠杆菌宿主细胞以将甘油转化成丝氨醇，通过向细胞培养物至少添加甘油诱导从甘油转化成丝氨醇，和从细胞培养物分离丝氨醇。DSM 2633520120817 DSM 2630320120817 DSM 2630220120817 DSM 2630120120817 DSM 2630020120817 DSM 2633620120817
【IPC分类】C12N15-52, C12N9-10, C12P7-02
【公开号】CN104769105
【申请号】CN201380047177
【发明人】L·马克西姆, A·施泰因比歇尔, B·安德森
【申请人】巴斯夫欧洲公司
【公开日】2015年7月8日
【申请日】2013年9月4日
【公告号】EP2708598A1, EP2895603A1, WO2014040888A1