基于实时荧光pcr的il28b基因多态性检测试剂盒的制作方法
【技术领域】
[000。 本发明设及基因表型的测定，特别设及一种基于实时巧光PCR的IL28BSNP检测 试剂盒。
【背景技术】
[0002] 我国是肝炎大国，其中丙型肝炎尚无有效疫苗预防感染。目前仅有一种治疗方案： 干扰素联合利己韦林抗病毒。我国丙型肝炎主要为基因1型，基因1型治疗有效率只有 39. 8~40. 9%左右（N化glJMed2009,361:580-593.)。标准的联合治疗方案价格昂贵、 疗程长、疗效难预测，临床上需要一个制定个体化治疗方案的可靠依据。
[0003] 研究表明，人体上位于19号染色体的IL28B基因参与对丙肝病毒的免疫反应， IL28(白细胞介素28B)基因的两个多态性位点（rsl2979860和rs8099917)与丙型肝炎病 毒患者的病毒清除有显著相关性，即与丙肝患者标准化治疗方案（聚己二醇干扰素联合利 己韦林）的抗病毒治疗效果密切相关。多态性rs8099917结果表明，患者T等位基因的纯 合子的（T/T基因型）的多态性比杂合的抗病毒治疗病人（T/G基因型）或病人G等位基因 的纯合子的（G/G基因型）有更好的疗效；多态性rsl2979860结果表明，纯合子的病人C等 位基因（C/C基因型）的多态性相比，杂合的病人（C/T基因型）或患者T等位基因的纯合 子的（T/T基因型）显著反应更好的抗病毒疗法。
[0004] 目前，IL28多态性检测技术方法有基因测序方法、基因巧片方法和实时PCR(染料 法），其中，基因测序法虽特异性、准确度和灵敏度高，但实验时间需要4~5小时，同时试剂 成本、仪器成本均比较高；基因巧片法特异性和灵敏度高，准确度一般，但试剂成本高、配套 仪器昂贵，测试耗时4~5小时；PCR(染料法）的试剂、仪器成本低，检测耗时1. 5~2小 时，灵敏度高，但是准确性和特异性一般。
[0005] 本发明采用实时巧光PCR(探针法）技术，通过设计特异性的引物及巧光探针来检 测IL28B(rs8099917)和IL28B(rsl2979860)的突变。
【发明内容】
[0006] 针对现有技术中的缺陷，本发明的目的是提供一种基于实时巧光PCR的IL28B SNP检测试剂盒，通过基于包含IL28B基因多态性的rs8099917和rsl2979860的特定区域 设计探针、使用该探针，通过检测基于与祀标核酸形成特异性扩增的信号检测突变，从而实 现本发明。
[0007] 本发明是通过W下技术方案实现的：
[0008] 第一方面，本发明提供一种IL28BSNP巧光检测探针，探针序列为SEQIDNO. 1和 沈QIDNO. 2、SEQIDNO. 3 和沈QIDNO. 4。
[0009] 第二方面，本发明提供一种IL28BSNP巧光检测探针的用途，所述用途具体指用于 检测IL28Brs8099917、IL28Brsl2979860 位点的突变。
[0010] 第S方面，本发明提供一种基于实时巧光PCR的IL28BSNP检测试剂盒，包括 IL28Brs8099917 型PCR反应液、IL28Brsl2979860 型PCR反应液；
[0011] 所述IL28Brs8099917型PCR反应液包括组分及含量如下；
[0012]
【主权项】
1. 一种IL28BSNP荧光检测探针，其特征在于，所述探针序列为SEQIDNO. 1和SEQID NO. 2、SEQIDNO. 3 和SEQIDNO. 4。
2. -种根据权利要求1所述的IL28BSNP荧光检测探针的用途，其特征在于，所述用途 具体指分别用于检测IL28Brs8099917、IL28Brsl2979860位点的突变。
3. -种基于实时荧光PCR的IL28BSNP检测试剂盒，其特征在于，包括IL28Brs8099917 型PCR反应液、IL28Brsl2979860型PCR反应液； 所述IL28Brs8099917型PCR反应液包括组分及含量如下：
所述IL28Brsl2979860型PCR反应液包括组分及含量如下：
4. 根据权利要求3所述的基于实时荧光PCR的IL28BSNP检测试剂盒，其特征在于， IL28Brs8099917型PCR反应液中，所述探针序列如SEQIDNO. 1和SEQIDNO. 2所示。
5. 根据权利要求3所述的基于实时荧光PCR的IL28BSNP检测试剂盒，其特征在于， IL28Brs8099917型PCR反应液中，引物序列如SEQIDNO. 5所示。
6. 根据权利要求3所述的基于实时荧光PCR的IL28BSNP检测试剂盒，其特征在于， IL28Brsl2979860型PCR反应液中，所述探针序列如SEQIDNO. 3和SEQIDNO. 4所示。
7. 根据权利要求3所述的基于实时荧光PCR的IL28BSNP检测试剂盒，其特征在于， IL28Brsl2979860型PCR反应液中，所述引物序列如SEQIDNO. 6所示。
8. 根据权利要求3所述的基于实时荧光PCR的IL28BSNP检测试剂盒，其特征在于，所 述IL28Brs8099917型PCR反应液、IL28Brs12979860型PCR反应液中缓冲液包括Tris-Cl 缓冲液。
9. 一种根据权利要求3所述的基于实时荧光PCR的IL28BSNP检测试剂盒的使用方 法，其特征在于，所述使用方法具体包括：提取DNA，加入到基于实时荧光PCR的IL28BSNP 检测试剂盒的反应液中，利用实时荧光PCR仪进行检测，通过荧光扩增曲线来判读位点突 变类型。
【专利摘要】本发明提供一种基于实时荧光PCR的IL28B基因多态性检测试剂盒，包括IL28B rs8099917型PCR反应液、IL28B rs12979860型PCR反应液；所述IL28Brs8099917型PCR反应液和IL28B rs12979860型PCR反应液包括组分及含量如下：DNA聚合酶0.5～1u，dNTPs 200～800umol/L，MgCl21～1.8mmol/L，引物10～100pmol，探针10～100pmol，缓冲液24ul。本发明采用实时荧光PCR-探针技术，通过设计特异性的引物及荧光探针来检测IL28B突变，更简单、更快捷、更精确。
【IPC分类】C12N15-11, C12Q1-68
【公开号】CN104774918
【申请号】CN201510007333
【发明人】冀俊峰, 谢青, 项晓刚
【申请人】上海孚清生物科技有限公司, 上海交通大学医学院附属瑞金医院
【公开日】2015年7月15日
【申请日】2015年1月7日