沙门氏菌的高专一性检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及沙门氏菌的高专一性检测方法。
【背景技术】
[0002] 沙门氏菌由于其很强的致病性而被关注，沙门氏菌能引起腹泻，腹痛，发烧，呕吐， 甚至死亡。而预防食品中生物性污染的关键在于对食源性致病菌的监测能力和水平。近十 年来，研发了一种实时检测沙门氏菌的磁致伸缩生物传感器。其检测机理是当沙门氏菌吸 附在磁致伸缩生物传感器上时，生物传感器重量增加，导致其共振频率发生改变，从而根据 检测的共振频率改变量确认待测物质中沙门氏菌的浓度。
[0003] 然而，当其他细菌或杂质吸附到生物传感器上时，也会同样引起生物传感器重量 增加，使其共振频率发生改变，由此产生检测误差，导致生物传感器检测精确度降低。因此， 有效降低磁致伸缩生物传感器非专一性吸附沙门氏菌是十分必要的。
【发明内容】
[0004] 本发明要解决的技术问题是：基于上述问题，本发明提供沙门氏菌的高专一性检 测方法。
[0005] 本发明解决其技术问题所采用的一个技术方案是：沙门氏菌的高专一性检测方 法，包括以下步骤：
[0006] (1)制备生物传感器：合金切割，清洗，真空退火，合金表面依次涂覆防腐蚀层和 生物活性层，制得磁弹性共振生物传感器；
[0007] (2)生物传感器表面沉积E2噬菌体：把生物传感器浸入E2噬菌体菌悬液中lh，使 噬菌体均匀地吸附在生物传感器表面；
[0008] (3)生物传感器表面沉积阻滞剂：把附有噬菌体的生物传感器浸入糖蛋白缓冲液 中2h，获得测试生物传感器；
[0009] (4)检测待测样品中沙门氏菌的浓度：把测试生物传感器浸泡在含有沙门氏菌的 待测样品溶液中30min，取出后用去离子水清洗测试生物传感器2次，检测测试生物传感器 表面沙门氏菌吸附情况。
[0010] 进一步地，步骤（2)中E2噬菌体菌悬液的E2噬菌体浓度为1X103~1X10 9vir/ mL〇
[0011] 进一步地，步骤（3)中糖蛋白缓冲液的溶剂为TBS。
[0012] 本发明的有益效果是：使用糖蛋白缓冲液作为阻滞剂来有效降低生物传感器非专 一性吸附沙门氏菌；采用的技术方法是将由蛋白质大分子构成的阻滞剂覆盖在传感器表面 中没有固定噬菌体的局部，从而阻止其他细菌产生的非专一性吸附，由此避免因非专一性 结合导致的检测误差，保障生物传感器的检测精度。
【附图说明】
[0013] 下面结合附图对本发明进一步说明。
[0014] 图1是在浓度1.OX106CFU/mL的沙门氏菌溶液中浸泡30分钟后，没有使用糖蛋 白阻滞剂的测试生物传感器表面吸附细菌情况；
[0015] 图2是在浓度1. 0X106CFU/mL的沙门氏菌溶液中浸泡30分钟后，使用糖蛋白阻 滞剂的测试生物传感器表面吸附细菌情况；
[0016] 图3是在浓度1.OX106CFU/mL的沙门氏菌溶液中浸泡30分钟后，没有使用糖蛋 白阻滞剂的控制生物传感器表面吸附细菌情况；
[0017] 图4是在浓度1.OX106CFU/mL的沙门氏菌溶液中浸泡30分钟后，使用糖蛋白阻 滞剂的控制生物传感器表面吸附细菌情况。
【具体实施方式】
[0018] 现在结合具体实施例对本发明作进一步说明，以下实施例旨在说明本发明而不是 对本发明的进一步限定。
[0019] 实施例
[0020] (1)使用METGLAS? 2826MB合金作为磁致伸缩生物传感器平台，使用微切割锯把 合金制成ImmXO. 2mmX0. 028mm大小，使用丙酮进行超声清洗，风干。在220°C下真空退火 2h，以消除抛光和切割过程中的残余应力及缺陷。在合金表面依次溅射涂覆厚度90nm的Cr 层和厚度150nm的Au层，以得到防腐蚀层和生物活性层。
[0021] (2)把磁弹性共振传感器浸入5X10nvir/mLE2噬菌体菌悬液中lh，菌悬液溶剂 为TBS，噬菌体均匀地物理吸附在生物传感器表面。
[0022] (3)把附有噬菌体的生物传感器浸入作为阻滞剂的糖蛋白缓冲液中2h，获得测试 生物传感器。
[0023] (4)配制浓度为1X106CFU/mL沙门氏菌溶液lmL，把测试生物传感器浸泡在沙门 氏菌溶液中30min，取出后用去离子水清洗测试生物传感器2次。
[0024] 测试结果如图1、2示，图1是光学显微镜下没有使用阻滞剂的测试生物传感器表 面吸附沙门氏菌的情况，图2是光学显微镜下使用阻滞剂的测试生物传感器表面吸附沙门 氏菌的情况。由此可知，使用糖蛋白的测试生物传感器上的细菌明显比不使用糖蛋白的测 试生物传感器上的少，说明使用糖蛋白阻滞剂可有效得降低生物传感器的非专一性细菌吸 附。
[0025] 对比例
[0026] (1)使用METGLAS? 2826MB合金作为磁致伸缩生物传感器平台，使用微切割锯把 合金制成ImmXO. 2mmX0. 028mm大小，使用丙酮进行超声清洗，风干。在220°C下真空退火 2h，以消除抛光和切割过程中的残余应力及缺陷。在合金表面依次溅射涂覆厚度90nm的Cr 层和厚度150nm的Au层，以得到防腐蚀层和生物活性层。
[0027] (2)把生物传感器浸入作为阻滞剂的糖蛋白缓冲液中2h，获得控制生物传感器。
[0028] (3)配制浓度为1X106CFU/mL沙门氏菌溶液lmL，把控制生物传感器浸泡在沙门 氏菌溶液中30min，取出后用去离子水清洗控制生物传感器2次。
[0029] 测试结果如图3、4示，图3是光学显微镜下没有使用阻滞剂的控制生物传感器表 面吸附沙门氏菌的情况，图4是光学显微镜下使用阻滞剂的控制生物传感器表面吸附沙门 氏菌的情况。由此可知，使用糖蛋白的控制生物传感器上的细菌明显比不使用糖蛋白的控 制生物传感器上的少，说明使用糖蛋白阻滞剂可有效地降低生物传感器的非专一性细菌吸 附。
[0030] 以上述依据本发明的理想实施例为启示，通过上述的说明内容，相关工作人员完 全可以在不偏离本项发明技术思想的范围内，进行多样的变更以及修改。本项发明的技术 性范围并不局限于说明书上的内容，必须要根据权利要求范围来确定其技术性范围。
【主权项】
1. 沙门氏菌的高专一性检测方法，其特征是：包括以下步骤： (1) 制备生物传感器：合金切割，清洗，真空退火，合金表面依次涂覆防腐蚀层和生物 活性层，制得磁弹性共振生物传感器； (2) 生物传感器表面沉积E2噬菌体：把生物传感器浸入E2噬菌体菌悬液中lh，使噬菌 体均匀地吸附在生物传感器表面； (3) 生物传感器表面沉积阻滞剂：把附有噬菌体的生物传感器浸入糖蛋白缓冲液中 2h，获得测试生物传感器； (4) 检测待测样品中沙门氏菌的浓度：把测试生物传感器浸泡在含有沙门氏菌的待测 样品溶液中30min，取出后用去离子水清洗测试生物传感器2次，检测测试生物传感器表面 沙门氏菌吸附情况。
2. 根据权利要求1所述的沙门氏菌的高专一性检测方法，其特征是：所述的步骤（2) 中E2噬菌体菌悬液的E2噬菌体浓度为IXIO3~IX10 9vir/mL。
3. 根据权利要求1所述的沙门氏菌的高专一性检测方法，其特征是：所述的步骤（3) 中糖蛋白缓冲液的溶剂为TBS。
【专利摘要】本发明涉及沙门氏菌的高专一性检测方法，包括以下步骤：制备生物传感器、生物传感器表面沉积E2噬菌体、生物传感器表面沉积阻滞剂、检测待测样品中沙门氏菌的浓度。本发明的有益效果是：使用糖蛋白缓冲液作为阻滞剂来有效降低生物传感器非专一性吸附沙门氏菌；采用的技术方法是将由蛋白质大分子构成的阻滞剂覆盖在传感器表面中没有固定噬菌体的局部，从而阻止其他细菌产生的非专一性吸附，由此避免因非专一性结合导致的检测误差，保障生物传感器的检测精度。
【IPC分类】C12R1-92, C12Q1-10, C12R1-42, C12Q1-70
【公开号】CN104818343
【申请号】CN201510230811
【发明人】胡静, 胡佳佳
【申请人】常州大学
【公开日】2015年8月5日
【申请日】2015年5月7日