转基因玉米mon88017品系特异定量pcr精准检测的引物和探针及方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，涉及基因的定量的分析方法。
【背景技术】
[0002] 国际上很多国家对转基因产品实施限量标识和进口，而我国尚无具体的转基因产 品标识阈值。为了打破欧盟等国家和地区设置的转基因产品贸易技术壁皇，同时弥补和完 善我国转基因生物及产品定量检测技术体系，更好地保护消费者对转基因产品的知情权和 选择权，建立一种新型转基因玉米M0N88017品系特异定量PCR精准检测方法已成为必要。
[0003] 目前关于转基因玉米M0N88017的检测技术，主要集中在普通定性PCR分析方法， 尚无关于扩增检测转基因玉米M0N88017及产品的品系特异性某特定位点（基因序列）的 高灵敏度定量PCR精准检测技术。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的主要是提供一种扩增效率高、准确度高和灵敏度高的检测转基因玉 米M0N88017及产品的品系特异性某特定位点的定量PCR精准检测技术。
[0005] 本发明通过下述技术方案实现：
[0006] 转基因玉米M0N88017品系特异定量PCR精准检测的引物和探针，
[0007]其中，
[0008]上游引物序列：EventM0N88017-Forward:5'-CGCTAGCAGCTCTCCTCCAA-3'；
[0009]下游引物序列：EventM0N88017-Reverse:5'-CCGGACATGAAGCCAITTACA-3'；
[0010] 荧光探针序列：
[0011]EventM0N88017-Probe:5' -FAM-CTTTTTTGCCGGAGTATGACGGTGACG-3' 〇
[0012] 转基因玉米M0N88017品系特异定量PCR精准检测方法，包括以下步骤：
[0013](1)合成以下引物及与引物配合使用的荧光探针，
[0014]上游引物序列：EventM0N88017-Forward:5'-CGCTAGCAGCTCTCCTCCAA-3'；
[0015]下游引物序列：EventM0N88017-Reverse:5,-CCGGACATGAAGCCAITTACA-3，；
[0016] 荧光探针序列：
[0017]EventM0N88017-Probe:5'-FAM-CTTTTTTGCCGGAGTATGACGGTGACG-3'；
[0018] (2)制备M0N88017品系的DNA稀释液；
[0019] (3)配制PCR反应体系；
[0020] (4)定量PCR检测。
[0021] 进一步地，步骤（1)所述合成的引物及荧光探针的浓度均为10ym〇l/l，步骤（2) 所述制备的DNA稀释液的浓度为50ng/y1。
[0022] 再进一步地，步骤（3)所述的配制PCR反应体系，即将3y 1的DNA稀释液加入到 反应体系中，所得的反应体系包括以下组分：
[0023]
【主权项】
1. 转基因玉米M0N88017品系特异定量PCR精准检测的引物和探针，其特征在于， 上游引物序列：Event M0N88017-Forward:5'-CGCTAGCAGCTCTCCTCCAA-3' ； 下游引物序列：Event M0N88017-Reverse:5'-CCGGACATGAAGCCATTTACA-3' ； 焚光探针序列： Event M0N88017-Probe :5'-FAM-CTTTTTTGCCGGAGTATGACGGTGACG-3' 。
2. 转基因玉米M0N88017品系特异定量PCR精准检测方法，其特征在于，包括以下步 骤： (1) 合成以下引物及与引物配合使用的荧光探针， 上游引物序列：Event M0N88017-Forward:5'-CGCTAGCAGCTCTCCTCCAA-3' ； 下游引物序列：Event M0N88017-Reverse:5'-CCGGACATGAAGCCATTTACA-3' ； 焚光探针序列： Event M〇N88〇17-Pr〇be ： 5'-Fam-Cttttttgccggagtatgacggtgacg-S'； (2) 制备M0N88017品系的DNA稀释液； (3) 配制PCR反应体系； (4) 定量PCR检测。
3. 根据权利要求2所述的转基因玉米M0N88017品系特异定量PCR精准检测方法，其 特征在于，步骤（1)所述合成的引物及荧光探针的浓度均为lOMfflol/l，步骤（2)所述制备的 DNA稀释液的浓度为50ng/^l。
4. 根据权利要求3所述的转基因玉米M0N88017品系特异定量PCR精准检测方法，其 特征在于，步骤（3)所述的配制PCR反应体系，即将3μ1的DNA稀释液加入到反应体系中， 所得的反应体系包括以下组分： 2. Taqman Master mix 12. 5M-1 上游引物 ιμL 下游引物 ιμL 荧光探针 0. 8μ1 DNA稀释液 3. 〇μ1 水 6· 7μ1。
5. 根据权利要求2或4所述的转基因玉米Μ0Ν88017品系特异定量PCR精准检测方 法，其特征在于，所述PCR反应条件为：95°C预变性10min，l个循环；95°C变性15s，60°C退 火60s，45个循环。
【专利摘要】本发明属于生物技术领域，涉及基因的定量分析方法，具体是指转基因玉米MON88017品系特异定量PCR精准检测方法。本发明采用设计的特异性上游引物序列Event MON88017-Forward、下游引物序列Event MON88017-Reverse、荧光探针序列Event MON88017-Probe、MON88017品系的DNA稀释液以及Taqman Master mix（2×）和水配制成PCR反应体系，进行定量PCR检测。本发明主要建立了一种高扩增效率、高准确度的Taqman定量PCR检测技术，适用于国内农业转基因生物及产品监督检验、进出境口岸转基因生物及产品检验、企业内部进口原材料含转基因MON88017品系生物成分检测。
【IPC分类】C12Q1-68, C12N15-11
【公开号】CN104830857
【申请号】CN201510280706
【发明人】王东, 宋君, 雷绍荣, 郭灵安, 刘勇, 常丽娟, 张富丽, 尹全, 刘文娟
【申请人】四川省农业科学院分析测试中心
【公开日】2015年8月12日
【申请日】2015年5月27日