一种冬虫夏草分子身份证及鉴定方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药材来源品种鉴定技术领域，具体涉及一种冬虫夏草分子身份证及 鉴定方法。
【背景技术】
[0002] 冬虫夏草（OphiocordycepsSinensis)为麦角菌科真菌冬虫夏草菌寄生在蝙蝠 蛾科昆虫幼虫上的子座和幼虫尸体的干燥复合体。是我国珍稀名贵中药材。由于冬虫夏 草本身的生境特殊，生长缓慢，天然产量有限，加上生态环境的破坏和长期过度采挖，其 自然资源逐渐枯竭。目前冬虫夏草价格比黄金还贵，市场上常出现其混伪品。如：古尼 虫草C.gunnii，蝴花C.cicadae，蛹虫草C.militaris，下垂虫草0?nutans,罗伯茨虫草 O.robertsii等。由于冬虫夏草与其近缘种、混伪品外形类似，传统的性状鉴别对冬虫夏草 与其近缘种的鉴定有一定困难。这就需要寻找到一种稳定可靠的方法将冬虫夏草药材加以 鉴定区分。
[0003] 现有的对冬虫夏草的传统鉴别方法在实际运用中要进行准确鉴别难度极大，且存 在主观性大，通用性差，且对观察者经验要求高等缺陷。而分子鉴别手段比较准确可靠，但 都需要测序或是大量PCR和电泳及后期数据处理，也不利于规模化标准化建立。
[0004] 因此有必要开发一种结果准确且鉴定过程简便快速的冬虫夏草分子鉴定方法。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于克服传统鉴别技术中存在的上述缺陷，提供一种结果准确灵 敏，鉴定过程简便快速的冬虫夏草鉴定方法。
[0006] 为达到以上目的，本发明的发明人在对大量的样品的筛选过程中，寻找出能够将 正品冬虫夏草与混伪品进行精确区分的正品冬虫夏草的特异分子身份证序列，并提供了对 冬虫夏草鉴别较为快速，简便，廉价的方法。
[0007] 具体的，本发明提供了一种冬虫夏草分子身份证，所述分子身份证中含有如SEQ IDNo.1和/或SEQIDNo. 2所示的核苷酸序列。
[0008] 可选的，所述分子身份证为SEQIDNo.1和/或SEQIDNo. 2所示的核苷酸序列。
[0009] 在本发明的一种实施方式中，所述分子身份证为SEQIDNo.1所不的序列。
[0010] 在本发明的另一种实施方式中，所述分子身份证为SEQIDNo. 2所不的序列。
[0011] 本发明提供了一种冬虫夏草的鉴定方法，其中，所述方法包括检测样品基因组DNA 中是否存在本发明所述的分子身份证。
[0012] 可选的，所述方法包括如下步骤：
[0013]1)以待测样品基因组DNA为模板，对所述分子身份证进行PCR扩增，获得扩增产 物；
[0014] 2)对扩增产物进行测序，拼接后去除引物区获得扩增片段，检测扩增片段中是否 存在所述分子身份证。
[0015]当存在SEQIDNo. 1和/或SEQIDNo. 2所示的片段时可以判定被测样品中存在 冬虫夏草成分或为冬虫夏草。相反，如果既不存在SEQIDNo. 1所示的片段也不存在SEQ IDNo. 2所示的片段时，判定被测样品为伪品。
[0016]本发明对于PCR所使用的引物无特别的限制，只要能够对所述分子身份证进行扩 增即可，为了获得最佳的鉴定效果，所述PCR扩增使用的引物为：
[0017]ITSF5' -GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3，（SEQIDNo. 3 所示的核苷酸序列），
[0018] ITSR 5' -TCCTCCGCTTAITGATATGC-3' （SEQ IDNo. 4 所示的核苷酸序列）。
[0019]可选的，所述PCR扩增的反应程序为：
[0020]
【主权项】
1. 冬虫夏草分子身份证，其特征在于，所述分子身份证中含有如SEQ ID No. 1和/或 SEQ ID No. 2所示的核苷酸序列。
2. 根据权利要求1所述的分子身份证，其特征在于，所述分子身份证为SEQ ID No. 1和 /或SEQ ID No. 2所示的核苷酸序列。
3. -种冬虫夏草鉴定方法，其特征在于，所述方法包括检测样品基因组DNA中是否存 在权利要求1-2中任意一项所述的分子身份证。
4. 根据权利要求3所述的鉴定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤： 1) 以待测样品基因组DNA为模板，对所述分子身份证进行PCR扩增，获得扩增产物； 2) 对扩增产物进行测序，拼接后去除引物区获得扩增片段，检测扩增片段中是否存在 所述分子身份证。
5. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，检测扩增片段中是否存在SEQ ID No. 1和 /或SEQ ID No. 2所示的核苷酸序列。
6. 权利要求1-2所述的分子身份证序列或权利要求3-5中任意一项所述的鉴定方法在 冬虫夏草鉴定中的应用。
【专利摘要】本发明涉及一种冬虫夏草子身份证，所述分子身份证中含有如SEQ ID No.1和/或SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。利用本发明所提供的分子身份证和方法可以准确的将冬虫夏草与形态特征相似的伪品区分开，本发明所提供的方法适用性更广，能检测所有能提取出DNA的任何样品。因此，能够实现冬虫夏草原药材及菌丝体的快速、准确鉴定。
【IPC分类】C12N15-11, C12Q1-68
【公开号】CN104830970
【申请号】CN201510117046
【发明人】韩建萍, 向丽, 廖保生, 陈士林
【申请人】中国医学科学院药用植物研究所
【公开日】2015年8月12日
【申请日】2015年3月17日