一种从发酵液中分离和纯化非达霉素的工艺的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于微生物制药领域，具体涉及一种从发酵液中分离和纯化非达霉素的工 艺。
【背景技术】
[0002] 台勾霉素是由放线菌桔橙指孢囊菌NRRL 18085产生的一系列18元大环内酯 类抗生素的总称；目前根据取代基的具体结构定义了 6种（台勾霉素A-F)。台勾霉素 B(Tiacumicin B)，也称为非达霉素（Fidaxomicin)，其分子式为 C52H74C12018。
[0003]
【主权项】
1. 一种从发酵液中分离和纯化非达霉素的工艺，包括以下步骤： a?将放线菌桔澄指抱囊菌 Dactylosporangium aurantiacum hamdenensis 亚种 NRRL18085菌株发酵，发酵结束后，用极性有机溶剂浸提菌丝体得浸提液； b. 步骤a得到的浸提液浓缩后上样至大孔吸附树脂柱，以有机溶剂和水的混合溶剂梯 度洗脱，收集含有非达霉素的解析液； c. 步骤b得到的解析液浓缩去除水后用有机溶剂萃取，萃取液用干燥剂干燥后，减压 浓缩得浓缩物； d. 步骤c得到的浓缩物过正相柱，梯度洗脱，收集含非达霉素的洗脱液，减压浓缩后得 到非达霉素粗品； e. 步骤d得到的粗品经高压制备液相色谱设备，用含水的极性溶剂作为流动相、并添 加酸或酸性盐调节pH，收集含有高纯度非达霉素的流出液； f. 步骤e得到的流出液加水降低有机溶剂含量、过聚苯乙烯微球树脂柱，先用水将步 骤e得到流出液中调节pH的酸或酸性盐冲洗去除后、再用极性溶剂洗脱，收集含高纯度的 非达霉素洗脱液，浓缩后、用乙酸乙酯萃取、萃取液干燥后浓缩，真空干燥，得白色粉末状非 达霉素纯品；其中： 在步骤a中，所用极性有机溶剂选自C1-C3醇或C3-C4酮； 在步骤b中，所述的大孔树脂为非极性、弱极性、中等极性大孔树脂；所用洗脱溶剂中 的有机溶剂选自C1-C3的醇或C3-C4的酮，含量为0-90% ; 在步骤c中，萃取用有机溶剂选自乙酸乙酯或氯仿； 在步骤d中，所述正向柱填料选自硅胶或氧化铝；所用洗脱溶剂为丙酮/非极性溶剂的 混合溶剂，其中所述非极性溶剂包括石油醚或C6-C12烷烃； 在步骤e中，所述高压制备液相色谱柱填料为非极性、弱极性或中等极性，所述洗脱用 的极性溶剂选自乙腈、甲醇或乙醇，所述酸或酸性盐选自H3P04、NaH2P0 4、NaHS04、CH3COOH或 CF3COOH ； 在步骤f?中，所得的非达霉素纯度在96%以上。
2. 根据权利要求1所述分离和纯化非达霉素的工艺，其中在步骤a中，所用极性有机溶 剂优选丙酮、甲醇、乙醇或丙醇；更优选丙酮或甲醇。
3. 根据权利要求1所述分离和纯化非达霉素的工艺，其中在步骤b中，所述的大孔树脂 的型号选自 X-5、AB-8、SP825、HP-20、D101 或 ADS-17 ;更优选 X-5、AB-8 或 D101。
4. 根据权利要求1所述分离和纯化非达霉素的工艺，其中在步骤b中，所用洗脱溶剂中 的有机溶剂选自丙酮或甲醇。
5. 根据权利要求1所述分离和纯化非达霉素的工艺，其中在步骤c中，所述萃取用有机 溶剂为乙酸乙酯。
6. 根据权利要求1所述分离和纯化非达霉素的工艺，其中在步骤d中，所述正向柱填料 为氧化错。
7. 根据权利要求1所述分离和纯化非达霉素的工艺，其中在步骤e中，所述高压制备 液相色谱柱填料优选硅胶键合碳十八硅烷，流动相优选乙腈和〇. 1%磷酸水溶液48:52至 57:43 ;流动相更优选乙腈和0. 1%磷酸水溶液53:47至57:43。
8. 根据权利要求1所述分离和纯化非达霉素的工艺，其中在步骤f?中，所述聚合物树脂
【专利摘要】本发明提供了一种从发酵液中分离和纯化非达霉素的工艺，包括：放线菌桔橙指孢囊菌Dactylosporangium aurantiacum hamdenensis亚种NRRL18085菌株发酵结束后，极性有机溶剂浸提菌丝体；浸提液浓缩后过大孔吸附树脂柱，收集含有非达霉素的解析液；解析液浓缩后用有机溶剂萃取；萃取液浓缩后经正向柱层析，得到非达霉素粗品；该粗品经高压制备液相色谱设备，用含水的极性溶剂作为流动相、并添加酸或酸性盐调节pH，收集含有高纯度非达霉素的流出液；该洗脱液过聚苯乙烯微球树脂柱；洗脱液浓缩、萃取、萃取液干燥后浓缩，真空干燥，得白色粉末状非达霉素纯品。通过本发明分离提纯工艺，非达霉素的提取纯度较高，收率高；因此既适用于实验室研发，又适用于工业化大生产。
【IPC分类】C07H17-08, C12R1-01, C07H1-06, C12P19-62
【公开号】CN104846043
【申请号】CN201410052361
【发明人】胡海峰, 詹阳
【申请人】上海医药工业研究院, 中国医药工业研究总院
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2014年2月17日