从苹果皮中提取原花青素的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及从植物中提取原花青素的方法，具体涉及一种从苹果皮重提取原花青 素的方法，属于生物化工领域。
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【背景技术】
[0003] 原花青素 （Oligomer Procyanidoic Complexes)，简称 0PC，是一种有着特殊分子 结构的生物类黄酮，是目前国际上公认的清除人体内自由基最有效的天然抗氧化剂。一般 为红棕色粉末，气微、味涩，溶于水和大多有机溶剂。
[0004] 原花青素在生活中应用很广泛，例如在皮肤方面，原花青素具有独特的化学和生 理活性，在护肤品中起到多重作用，如抗衰老、抗紫外线、抗辐射、增白、保湿等。原花青素对 多种因素造成的皮肤老化都有独特的功效；原花青素对毛囊细胞有增殖和再生功能，从而 能促进毛发生长和再生等。所以对于原花青素的研宄是很有意义和前景的。
[0005] 原花青素在葡萄籽等植物中均有分布，目前研宄较多的是如何从葡萄籽中分离提 取原花青素。
[0006] 随着植物研宄范围的扩大，目前越来越多的基础研宄显示苹果皮中也存在原花青 素。苹果为我国产量最大的水果，资源十分丰富，有着很好的营养价值和特殊的保健作用， 苹果中的多酚能够抑制癌细胞的增殖。其中，原花青素为苹果中的主要酚类成分，具有多种 生物活性，有很强的抗氧化效果。由于苹果幼果富含原花青素，苹果成熟后，原花青素主要 存在于果皮中。因此，用苹果皮提取原花青素具有深远的经济效益和社会效益。
[0007] 但是，现有技术中对于苹果皮中原花青素的研宄还是空白，而目前较为成熟的原 花青素提取工艺又是以葡萄籽这类种子为研宄基础，因此对从苹果皮中提取原花青素的方 法指导参考意义较弱。
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【发明内容】
[0009] 本发明的目的在于填补目前技术中的空白，创造性的公开一种从苹果皮中提取原 花青素的方法，所述提取方法是以微波联合酶法来提取苹果皮中的原花青素，所述提取方 法是将苹果皮在复合酶的酶解作用后，再以微波萃取的方式提取其中的原花青素，所述的 酶是由纤维素酶、半纤维素酶以及果胶酶组成的复合酶。
[0010] 作为一种优选的方式，我们公开了所述酶是由等质量的纤维素酶、半纤维素酶以 及果胶酶组成的复合酶。
[0011] 同时，我们还公开了所述酶解的优选条件为pH 4. 5~5. 0,酶解时间40~50分钟，酶 解温度40~60°C。
[0012] 进一步地，最为优选地条件是pH 5. 0,酶解时间50分钟，酶解温度50°C。
[0013] 另外，我们还优选所述复合酶的添加量为每100g苹果中添加复合酶3mg。其中特 别优选的方式是所述复合酶是由纤维素酶lmg、半纤维素酶lmg、果胶酶Img组成。
[0014] 另外，在微波萃取中，我们还优选了所述微波功率为300W。
[0015] 最后，我们公开了这一微波联合酶法从苹果皮中提取原花青素的具体工艺，包括 以下步骤： (1) 将苹果皮粉碎、制成粉末后过筛，加入PH为4. 5~5. 0的缓冲溶液； (2) 向苹果皮的缓冲溶液中，加入纤维素酶、半纤维素、果胶酶形成的复合酶液，在 40~60°C的条件下，酶解40~50分钟； (3 )将酶解后的混合液在微波功率300W，频率2450MHz，温度60~80 °C的条件下萃取2~5 分钟； (4)将萃取液趁热过滤，并将滤液在3000r/min的条件下离心，取上层清液，即为原花 青素溶液。
[0016] 优选地，萃取时间为3分钟；缓冲溶液的加入量与苹果皮粉末的料液比为 lg/10mL〇
[0017] 采用本发明所公开的方法，填补了目前从苹果皮中提取原花青素的技术空白，同 时也为从果实皮中提取原花青素提供了重要的技术指引。利用这一方法可以高收率、无破 坏的从苹果皮中提取得到原花青素，具有重要的经济价值。
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【具体实施方式】
[0020] 实施例中所用的材料及试剂、仪器来源。
[0021] 苹果购自南京晓庄学院水果超市，自行处理得到苹果皮，粉碎，过40~60目筛，作 为苹果皮待测试样。
[0022] 试剂：无水乙醇，南京化学试剂有限公司； 甲醇，南京化学试剂有限公司； 正丁醇，南京化学试剂有限公司； 盐酸，上海中试化工总公司； 硫酸铁铵，国药集团化学试剂有限公司； 原花青素标样，中国药品生物制品检定所； 以上试剂均为分析纯。
[0023] 纤维素酶，酶活彡30000u/g ;果胶酶，酶活彡30000u/g ;半纤维素酶，酶活 多10000u/g ;蛋白酶，酶活多50000u/g，上海蓝季科技发展有限公司。
[0024] 仪器：电子天平，日本岛津公司； 7230G可见分光光度计，上海精密科学有限公司； 国华数显恒温水浴锅HH-4,国华电器有限公司； 台式离心机，上海安亭科技仪器厂；郑州长城科工贸有限公司； 微波合成萃取仪，上海新仪微波化学科技有限公司。
[0025] 实施例1 称取原花青素标样I. 〇〇〇〇mg，溶解于70%乙醇溶液中，定容至50mL，得到原花青素标准 储备液，其中原花青素的浓度为〇. 〇2mg/ml。
[0026] 准确称取原花青素标样5mg，定容至25mL，制得浓度为0. 2mg/ml的标准液，分别吸 取 0· 2mg/ml 的标准液 0,0· 2ml，0. 4ml，0. 6ml，0. 8ml，I. 0ml，I. 2ml，并用 70% 的乙醇溶液稀 释定容至 l〇ml，制成浓度为 0,0. 004,0. 008,0. 012,0. 016,0. 02,0. 024mg/ml 的标准液。
[0027] 将不同浓度的标准液分别吸取0. 2ml，分别置于7支IOml具塞的比色管中，各加入 1.0 mL甲醇溶液，再加入6. Oml的正丁醇-盐酸溶液（95/5, V/V)和0. 2ml的2%硫酸铁铵溶 液，摇匀后，置沸水浴95°C加热40min，然后迅速冷却，以甲醇代替标准品溶液作空白对照， 于最大吸收波长550nm处测定吸光度，绘制标准曲线并计算，得到回归方程为A (吸光度） =3. 1705C (mg/ml) +0· 0023,相关系数 R2=0. 9992。
[0028] 实施例2 将苹果皮粉碎、过筛，准确称取l〇〇g，加入IOml的pH为5. 0的缓冲溶液，50°C水浴震 荡，加入Img纤维素酶、Img半纤维素、Img果胶酶形成的复合酶液，在50°C的条件下，酶解 40~50分钟； 将酶解液在微波功率200~400W，频率2450MHz，温度60~80°C，的条件下萃取2~5分钟； 将萃取液趁热过滤，并将滤液在3000r/min的条件下离心，取上层清液，得到原花青素 溶液。
[0029] 将所得原花青素溶液于最大吸收波长550nm处测定吸光度。并利用回归方程为A (吸光度）=3. 1705C (mg/ml) +0· 0023,计算得到原花青素的含量为12. 6mg。
[0030] 因此，采用本实施例中获得的原花青素的的得率为12. 6mg/100g。
[0031] 实施例3 按照实施例2中的方式进行操作。
[0032] 与实施例2不同的是，分别用不同的纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶组成复合酶。 [0033] 表1 :不同的复合酶配方列表
【主权项】
1. 一种从苹果皮中提取原花青素的方法，其特征是，所述提取方法是将苹果皮在复合 酶的酶解作用后，再以微波萃取的方式提取其中的原花青素，所述的酶是由纤维素酶、半纤 维素酶以及果胶酶组成的复合酶。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述酶是由等质量的纤维素酶、半纤维素 酶以及果胶酶组成的复合酶。
3. 根据权利要求1或2所述的方法，其特征是，所述酶解的条件为：pH条件4. 5~5. 0， 酶解时间40~50分钟，酶解温度40~60°C。
4. 根据权利要求3所述的方法，其特征是，所述酶解条件为：pH条件5. 0,酶解时间50 分钟，酶解温度50 °C。
5. 根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述复合酶的添加量为每100g苹果中添加 复合酶3mg。
6. 根据权利要求5所述的方法，其特征是，所述复合酶是由纤维素酶lmg、半纤维素酶 Img、果胶酶Img组成。
7. 根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述微波萃取中，微波功率为300W。
8. 根据权利要求1所述的方法，其特征是，包括以下步骤： (1) 将苹果皮粉碎、制成粉末后过筛，加入PH为4. 5~5. 0的缓冲溶液； (2) 向苹果皮的缓冲溶液中，加入纤维素酶、半纤维素、果胶酶形成的复合酶液，在 40~60°C的条件下，酶解40~50分钟； (3 )将酶解后的混合液在微波功率300W，频率2450MHz，温度60~80 °C的条件下萃取2~5 分钟； (4)将萃取液趁热过滤，并将滤液在3000r/min的条件下离心，取上层清液，即为原花 青素溶液。
9. 根据权利要求8所述的方法，其特征是，萃取时间为3分钟。
10. 根据权利要求8所述的方法，其特征是，缓冲溶液的加入量与苹果皮粉末的料液 比为 lg/l〇mL。
【专利摘要】本发明涉及从植物中提取原花青素的方法，具体涉及一种从苹果皮重提取原花青素的方法，属于生物化工领域。创造性的公开一种从苹果皮中提取原花青素的方法，所述提取方法是以微波联合酶法来提取苹果皮中的原花青素，所述提取方法是将苹果皮在复合酶的酶解作用后，再以微波萃取的方式提取其中的原花青素，所述的酶是由纤维素酶、半纤维素酶以及果胶酶组成的复合酶。填补了目前从苹果皮中提取原花青素的技术空白，同时也为从果实皮中提取原花青素提供了重要的技术指引。利用这一方法可以高收率、无破坏的从苹果皮中提取得到原花青素，具有重要的经济价值。
【IPC分类】C07D311-62
【公开号】CN104860916
【申请号】CN201510160139
【发明人】朱媛, 薛蒙伟, 张雪松, 陆国飞, 宋华菊, 张凤
【申请人】南京晓庄学院
【公开日】2015年8月26日
【申请日】2015年4月7日