一种从贝壳类原料中提取麻痹性贝类毒素的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于有机化合物提取领域，尤其是涉及一种从贝壳类原料中提取麻痹性贝 类毒素的方法。
【背景技术】
[0002] 麻搏性贝类毒素 （paralytic shellfish poisoning toxins, PSP)是一类对人体 神经系统产生麻痹作用的海洋生物毒素，主要由有毒甲藻产生，可通过食物链在贝类，如： 翡翠贻贝、栉孔扇贝、嵌条扇贝、文蛤、青蛤、近江牡蛎和织纹螺等生物体内累积放大。当人 们误食这些染毒的海产品时，就会发生中毒或死亡。麻痹性贝类毒素的在全球分布越来越 广，频率越来越高，每年发生2000起中毒事件，其中死亡率达到15%。PSP毒素是以石房蛤 毒素（Saxitoxin，STX)为骨架而衍生出来的一类四氢嘌呤的衍生物如式I所示，现已发现 该类毒素有50余种结构组成成分，根据R4基团的不同可将该毒素分为氨基甲酸酯类、N-磺 酰氨甲酰基类、脱氨甲酰基类和脱氧脱氨甲酰基类。
【主权项】
1. 一种从贝壳类原料中提取麻痹性贝类毒素的方法，包括如下步骤： 1) 将贝壳类原料与醋酸水溶液混匀至混合物的pH值为2-4后，超声破碎，再置于沸水 中加热5-10min，冷却后过滤，收集滤液； 2) 将步骤1)所得滤液减压浓缩后冷冻离心，取上清液用三氯甲烷萃取，取上层萃取液 与乙醇混匀后于室温搅拌20-24小时后，进行第二次离心，收集上清液减压浓缩后干燥，再 用酸化甲醇溶解后过滤，收集滤液干燥后，溶于pH值为2-4的醋酸水溶液后，上样于凝胶柱 进行柱层析，收集保留时间为160min-250min的流分，得到含有所述麻痹性贝类毒素的提 取液； 所述酸化甲醇由体积比为2-5 :95-98的乙酸和甲醇组成。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述醋酸水溶液的浓度 为 0. 05-0. 2M，具体为 0.1 M ; 混合物的pH值为2-3 ; 超声破碎步骤中，功率为600-1500W，具体为600W，时间为8-30min，具体为8-10min。
3. 根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步骤2)冷冻离心步骤中，转速 为4000-6000rpm，具体为4000-5000rpm ;离心半径为4_6cm，具体为5cm ; 时间10_12min，具体为IOmin ; 温度为3-7°C，具体为4°C ; 所述第二次离心步骤中，转速为8000-10000rpm ;离心半径为4-6cm，具体为5cm ;时间 为 8-lOmin。
4. 根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述步骤2)柱层析步骤中，上样 量为所用凝胶柱体积的2-5%，具体为3-4% ; 洗脱剂为pH值为2-4的醋酸水溶液； 洗脱速度为〇. 4-0. 6mL/min，具体为0. 5mL/min ; 洗脱剂的用量为所用凝胶柱体积的3-5倍，具体为4倍； 所用凝胶柱中，凝胶的型号为SephadexG15或Bio-Gel-p-2 ; 长径比为30-40 :1，具体为30 :1 ; 凝胶柱的长度为60-lOOcm ;直径为l-5cm，具体为2cm。
5. 根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于：所述贝壳类原料为虾夷扇贝或华 贵柿孔扇贝。
【专利摘要】本发明公开了一种从贝类组织中提取麻痹性贝类毒素的方法。该方法，包括如下步骤：1）将贝壳类原料与醋酸混至混合物的pH值为2-4后，超声破碎，置于沸水中加热5-10min，冷却过滤收集滤液；2）将滤液减压浓缩冷冻离心，取上清液用三氯甲烷萃取，取上层萃取液与乙醇混匀后于室温搅拌20-24小时后二次离心，收集上清液减压浓缩后干燥，再用酸化甲醇溶解后过滤，收集滤液干燥后溶于pH值为2-4的醋酸水溶液，上样于凝胶柱进行柱层析，收集保留时间为160min-250min的流分即得。本发明最大限度地提高了麻痹性贝类毒素的提取率，能有效地去除组织内脂肪、蛋白质、糖类等杂质，并使毒素的生物活性损失减少到最低程度。
【IPC分类】C07D487-20
【公开号】CN104876939
【申请号】CN201410072059
【发明人】张松山, 哈益明, 靳静, 李庆鹏, 杨宝路, 李咏富, 李珍, 耿乙文
【申请人】中国农业科学院原子能利用研究所
【公开日】2015年9月2日
【申请日】2014年2月28日