一种圆瓣姜花素a的制备方法及抗肿瘤应用
【技术领域】
[0001] 本发明公开了一种植物提取物的制备方法及应用，特别涉及一种圆瓣姜花素A的 制备方法及抗肿瘤应用。
【背景技术】
[0002] 圆瓣姜花素A(ForrestiinA)，分子式为C2tlH26O4，分子量为330. 42,来源于姜科 (Zingiberaceae)圆瓣姜花Zfe办/brreWiiDiels根，是一种二猫类化合物。圆瓣 姜花素A具有细胞毒活性，对KB细胞的IC5tl为18. 96yg/ml，现代医学上用于抗肿瘤、人体 鼻咽癌等。
[0003] 目前，国内对圆瓣姜花素A的研宄较少，尚处于起步阶段。因此，研宄出一种制备 圆瓣姜花素A的方法是非常必要的，对于扩大药源以及圆瓣姜花的干燥根的综合利用具有 很重要的意义。
【发明内容】
[0004] 为满足临床需要，扩大用药品种，更好地治疗癌症，，提供一种圆瓣姜花素A的制 备方法及抗肿瘤应用。
[0005] 为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案： 一种圆瓣姜花素A的制备方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 取圆瓣姜花的干燥根，经粉碎处理，置于萃取釜中，以乙醇作为夹带剂，进行超临界 CO2萃取，解析，收集圆瓣姜花的干燥根萃取物； (2) 萃取物与DlOl大孔树脂按重量比1:1-2. 5充分混匀，装入层析柱，然后用30-90% 乙醇洗脱，流速为〇. 8-2BV/h，收集洗脱液，浓缩，得粗品； (3) 采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的圆瓣姜花素A，其两相溶剂系统为石油 醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动 相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集圆瓣姜花素A组分； (4) 将圆瓣姜花素A组分进行真空浓缩，析出结晶，过滤、洗涤干燥即得圆瓣姜花素A。
[0006] 所述步骤（1)中超临界萃取温度为45-55°C，萃取压力为30-43MPa，解析温度为 25-42°C，解析压力为 6-10MPa，CO2流量为 15-20L/h。
[0007] 所述步骤（3)中石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统的体积比为 5-8:3-5:4-6:2-3，取上相做固定相，下相为流动相，主机转速700-1000rpm，流速为l-3ml/ min〇
[0008] 所述制备的圆瓣姜花素A，在其口服配方中添加肠吸收促进剂，包含中链脂肪酸 盐、胆酸盐、鹅去氧胆酸盐、壳聚糖及其衍生物中的一种或几种。
[0009] (1)采用超临界提取技术对环境无污染；（2)通过DlOl大孔树脂对乙酰精宁类化 合物的吸附和洗脱，操作简单、分离效果好；（3)采用高速逆流色谱制备工艺，较制备液相 色谱制备工艺而言，克服了样品吸附、损失和峰形拖尾等缺点，且具有制备量大、易于工业 推广等优点；（4)添加肠吸收促进剂，有利于提高生物利用度。
[0010] 下面将结合【具体实施方式】进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0011] 实施例1 : 圆瓣姜花素A的制备 取圆瓣姜花的干燥根，经粉碎处理，称取lkg，置于萃取釜中，以乙醇作为夹带剂，通入 超临界CO2流体，CO2流量为18L/h，超临界萃取温度为48°C，萃取压力为32MPa，解析温度为 29°C，解析压力为7MPa，进行超临界CO2萃取lh，解析，收集萃取物，与DlOl大孔树脂按重量 比1:1. 5充分混匀，装入层析柱，依次用去离子水、30%乙醇溶液和90%乙醇溶液洗脱，流速 为0. 8BV/h，收集高浓度乙醇洗脱液，减压浓缩，得粗品；采用高速逆流色谱法分离纯化粗 品中的圆瓣姜花素A，以体积比5:4:6:2石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水为两相溶剂系统，上 相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，主机转速lOOOrpm，泵入下相做流动相，流速为 3ml/min，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集圆瓣姜花素A组分， 进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，过滤、洗涤干燥即得圆瓣姜花素A，含量97. 6%。
[0012] 实施例2: 圆瓣姜花素A的抗肿瘤应用 1、材料 动物：昆明种小鼠，雌雄各半性，体重20±2g，由南京中医药大学提供。
[0013] 细胞株：Sarc〇ma180腹水型瘤株（S180)，由中国科学院上海药物研宄所提供。
[0014] 2、方法 取50只小鼠，每只小鼠左腋下接种S18tl瘤液，次日随机分成5组，每组10只，分别为生 理盐水对照组（NS组)、阳性对照组、圆瓣姜花素A低剂量组（lmg/kg)、中剂量组（2mg/kg)、 高剂量组（4mg/kg)。接种24h后圆瓣姜花素A给药组灌胃给药，连续7，阳性对照组试验期 间腹腔注射2次，隔日给药。期间，每日观察小鼠的一般活动、皮毛、粪便等情况。最后一次 给药24h后断颈处死，称重，并计算抑瘤率。
[0015] 3、结果 本发明植物提取组合物对小鼠S18tl皮下荷瘤有明显的抑制作用，抑瘤率为 68. 32-76. 29%，结果见表 1。
[0016] 抑瘤率（％)=( 1-治疗组平均瘤重/空白对照组平均瘤重）X% 表1 本发明植物提取组合物对S18tl皮下荷瘤小鼠的抑瘤作用（n=10，i±S)
注：与阳性对照组相比，#P< 0. 01。
【主权项】
1. 一种圆瓣姜花素A的制备方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 取圆瓣姜花的干燥根，经粉碎处理，置于萃取釜中，以乙醇作为夹带剂，进行超临界 CO2萃取，解析，收集圆瓣姜花的干燥根萃取物； (2) 萃取物与DlOl大孔树脂按重量比1:1-2. 5充分混匀，装入层析柱，然后用30-90% 乙醇洗脱，流速为〇. 8-2BV/h，收集洗脱液，浓缩，得粗品； (3) 采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的圆瓣姜花素A，其两相溶剂系统为石油 醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动 相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集圆瓣姜花素A组分； (4) 将圆瓣姜花素A组分进行真空浓缩，析出结晶，过滤、洗涤干燥即得圆瓣姜花素A。2. 根据权利要求1所述的圆瓣姜花素A的制备方法，其特征在于：所述步骤（1)中超临 界萃取温度为45-55 °C，萃取压力为30-43MPa，解析温度为25-42 °C，解析压力为6-10MPa， CO2 流量为 15-20L/h。3. 根据权利要求1所述的圆瓣姜花素A的制备方法，其特征在于：所述步骤（3)中石油 醚-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统的体积比为5-8 :3-5:4-6:2-3,取上相做固定相，下相为 流动相，主机转速700-1000rpm，流速为l-3ml/min。4. 根据权利要求1~3所述方法制备的圆瓣姜花素A，在其口服配方中添加肠吸收促进 剂。5. 根据权利要求4所述的圆瓣姜花素A，其特征在于肠吸收促进剂包含中链脂肪酸盐、 胆酸盐、鹅去氧胆酸盐、壳聚糖及其衍生物中的一种或几种。
【专利摘要】本发明公开了一种植物提取物的制备方法及应用，尤其涉及一种圆瓣姜花素A的制备方法及抗肿瘤应用。制备方法包括以下步骤：（1）取圆瓣姜花的干燥根，经粉碎处理，超临界CO2萃取；（2）萃取物通过经D101大孔树脂柱层析，得粗提物；（3）采用高速逆流色谱法分离纯化；（4）将圆瓣姜花素A组分进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，即得圆瓣姜花素A。本发明首先在国内建立了圆瓣姜花素A的提纯工艺，得到高纯度的圆瓣姜花素A，而且本发明采用超临界萃取和高速逆流色谱法结合，具有环保、制备量大、安全稳定、易于工业化等优点。圆瓣姜花素A具有抗肿瘤促进作用，在其口服配方中添加肠吸收促进剂，利于提高生物利用度。
【IPC分类】A61P35/00, C07D307/58
【公开号】CN104926762
【申请号】CN201510263717
【发明人】刘东锋, 杨成东
【申请人】南京泽朗医药科技有限公司
【公开日】2015年9月23日
【申请日】2015年5月22日