一种红泽兰苷的提纯工艺的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种红泽兰苷的提纯工艺，属于生物技术领域。
[0002] 键入技术领域描述段落。
【背景技术】
[0003] 红泽兰苷，分子式C22H22O9，分子量430. 40, CAS号110282-44-5,分子结构式：
红泽兰为双子叶植物药爵床科植物，以全草入药，性味苦、微辛，温，具有疏肝解郁，活 血化瘀，温中利水等功效。红泽兰苷是红泽兰中主要生理活性成分。
[0004] 高速逆流色谱技术是一种不用任何同态载体的液、液色谱技术，其原理是基于组 分在旋转螺旋管内的相对移动而互不混溶的两相溶剂间分布不同而分离，其分离效率和速 度可以与HPLC相媲美。HSCCC分离效率高，产品纯度高，不存在载体对样品的吸附和污染， 制备量大和溶剂消耗少，操作简单，能从极复杂的混合物中分离出特定的组分。被广泛应用 天然产物分离制备中。
[0005] 通过文献检索现有制备红泽兰苷的方法，多采用常规试剂提取和大孔树脂分离， 该方法提取效率低，纯化步骤繁琐，污染严重，生产成本高，不适合工业化生产。
【发明内容】
[0006] 本发明目的是提供一种操作简单、所得产品纯度较高的红泽兰苷提纯工艺。
[0007] 本发明是通过以下技术方案实现的： 以红泽兰干燥全草为原料，粉碎，过20~60目筛，加入料液比为1 :3~5、70~90%乙醇溶 液，在pH为4~5的条件下，加入0. 1~0. 5%的纤维素酶和果胶酶按1 :1混合，酶解l~3h，酶 解完成后，在温度为50~60°C下进行微波提取1~3次，每次300~900s，提取液上活性炭层析 柱，先用2~4倍柱体积、10~15%乙醇洗脱，再用2~5倍柱体积的蒸馏水洗脱，洗脱液减压浓 缩，浓缩液用正丁醇萃取1~2次，收集正丁醇萃取液，减压浓缩，浓缩液采用高速逆流色谱 分离，根据图谱收集流分，流分减压干燥即得。
[0008] 所述纤维素酶为5~40u/g和果胶酶为5~40u/g。
[0009] 所述微波提取功率为800~2000W。
[0010] 所述萃取时，浓缩液与正丁醇的体积比为1 :〇. 5~1。
[0011] 所述高速逆流色谱分离条件为：溶剂系统选氯仿、正丙醇、水，混合比例5-10 : I-3 :5-9，取上相做固定相，下相做流动相。
[0012] 本发明具有的优点为：1、采用了生物酶酶解辅助微波提取的提取方法，提取效率 高，溶剂用量少，对环境污染小；2、采用了高速逆流色谱法纯化，方法简便易操作，溶剂用量 小，样品无损失，制备量大，可连续制备，而且无污染。
[0013] 下面将结合【具体实施方式】进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施例。
[0014]
【具体实施方式】： 实施例1 : 以红泽兰干燥全草为原料，粉碎，过20目筛，加入料液比为1 :3、70%乙醇溶液，在pH为 4的条件下，加入0. 1%纤维素酶（5u/g)和果胶酶（5u/g)按1 :1混合，酶解lh，酶解完成后， 在温度为50°C，功率为800W的条件下进行微波提取1次，每次300s，提取液上活性炭层析 柱，先用2倍柱体积、10%乙醇洗脱，再用2倍柱体积的蒸馏水洗脱，洗脱液减压浓缩，浓缩 液用正丁醇萃取1次，浓缩液与正丁醇的体积比为1 :〇. 5,收集正丁醇萃取液，减压浓缩，浓 缩液采用高速逆流色谱分离，根据图谱收集流分，流分减压干燥即得。高速逆流色谱分离条 件为：溶剂系统选氯仿、正丙醇、水，混合比例5 :1 :5,取上相做固定相，下相做流动相。经检 测，所得产品中红泽兰苷的含量为90. 5%。
[0015] 实施例2: 以红泽兰干燥全草为原料，粉碎，过40目筛，加入料液比为1 :4、80%乙醇溶液，在pH为 5的条件下，加入0. 3%的纤维素酶（20u/g)和果胶酶（20u/g)按1 :1混合，酶解2h，酶解完 成后，在温度为55°C功率为1000W的条件下，进行微波提取2次，每次600s，提取液上活性 炭层析柱，先用3倍柱体积、10%乙醇洗脱，再用3倍柱体积的蒸馏水洗脱，洗脱液减压浓缩， 浓缩液与正丁醇的体积比为1 :1，浓缩液用正丁醇萃取2次，收集正丁醇萃取液，减压浓缩， 浓缩液采用高速逆流色谱分离，根据图谱收集流分，流分减压干燥即得。高速逆流色谱分离 条件为：溶剂系统选氯仿、正丙醇、水，混合比例8 :2 :7,取上相做固定相，下相做流动相。经 检测，所得产品中红泽兰苷的含量为91. 5%。
[0016] 实施例3: 以红泽兰干燥全草为原料，粉碎，过60目筛，加入料液比为1 :5、90%乙醇溶液，在pH为 5的条件下，加入0. 5%纤维素酶（40u/g)和果胶酶（40u/g)按1 :1混合，酶解3h，酶解完成 后，在温度为60°C功率为2000W条件下，进行微波提取3次，每次900s，提取液上活性炭层 析柱，先用4倍柱体积、15%乙醇洗脱，再用5倍柱体积的蒸馏水洗脱，洗脱液减压浓缩，浓缩 液用正丁醇萃取2次，浓缩液与正丁醇的体积比为I : 1，收集正丁醇萃取液，减压浓缩，浓缩 液采用高速逆流色谱分离，根据图谱收集流分，流分减压干燥即得。高速逆流色谱分离条件 为：溶剂系统选氯仿、正丙醇、水，混合比例10 :3 :9,取上相做固定相，下相做流动相。经检 测，所得产品中红泽兰苷的含量为92. 2%。
【主权项】
1. 一种红泽兰苷的提纯工艺，其特征在于包含以下步骤：以红泽兰干燥全草为原料， 粉碎，过20~60目筛，加入料液比为1 :3~5、70~90%乙醇溶液，在pH为4~5的条件下，加入 0. 1~0. 5%的纤维素酶和果胶酶按1 :1混合，酶解l~3h，酶解完成后，在温度为50~60°C下进 行微波提取1~3次，每次300~900s，提取液上活性炭层析柱，先用2~4倍柱体积、10~15%乙 醇洗脱，再用2~5倍柱体积的蒸馏水洗脱，洗脱液减压浓缩，浓缩液用正丁醇萃取1~2次，收 集正丁醇萃取液，减压浓缩，浓缩液采用高速逆流色谱分离，根据图谱收集流分，流分减压 干燥即得。2. 如权利要求1所述的一种红泽兰苷的提纯工艺，其特征在于：所述纤维素酶为 5~40u/g和果胶酶为5~40u/g。3. 如权利要求1所述的一种红泽兰苷的提纯工艺，其特征在于：所述微波提取功率为 800~2000ff〇4. 如权利要求1所述的一种红泽兰苷的提纯工艺，其特征在于：所述萃取时，浓缩液与 正丁醇的体积比为1 :〇.5~1。5. 如权利要求1所述的一种红泽兰苷的提纯工艺，其特征在于：所述高速逆流色谱分 离条件为：溶剂系统选氯仿、正丙醇、水，混合比例5-10 :1-3 :5-9,取上相做固定相，下相做 流动相。
【专利摘要】本发明公开了一种红泽兰苷的提纯工艺，方法是以红泽兰干燥全草为原料，粉碎，过筛，加入乙醇溶液，在酸性的条件下，加入纤维素酶和果胶酶酶解，酶解完成后进行微波提取，提取液上活性炭层析柱，先用2~4倍柱体积、10~15%乙醇洗脱，再用3~5倍柱体积的蒸馏水洗脱，洗脱液减压浓缩，浓缩液用正丁醇萃取1~2次，收集正丁醇萃取液，减压浓缩，浓缩液采用高速逆流色谱分离，根据图谱收集流分，流分减压干燥即得。本发明所述方法的实用价值和先进性在于，应用本方法所制备的红泽兰苷纯度高，方法简便实用，易于工业化生产。
【IPC分类】C07H15/26, C07H1/08
【公开号】CN104926893
【申请号】CN201510270140
【发明人】刘东锋, 杨成东
【申请人】南京泽朗医药科技有限公司
【公开日】2015年9月23日
【申请日】2015年5月26日