食品中金黄色葡萄球菌的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于食品分析检测技术领域，具体涉及一种食品中金黄色葡萄球菌的检测 方法。
【背景技术】
[0002] 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)是葡萄球菌属的一种，广泛存在于自 然界中，如土壤、空气、水、物品表面以及人或动物的皮肤、鼻腔、咽部、肠道等处。
[0003] 金黄色葡萄球菌是引起细菌性食物中毒的主要病原菌之一，广泛存在于自然界 中。金黄色葡萄球菌的致病因子与其产生的毒素和酶有关。金黄色葡萄球菌肠毒素是分子 量为24k Da~30k Da的水溶性蛋白质，已知有A、B、C1、C2、C3、D、E等12个血清型。金黄 色葡萄球菌肠毒素是一组热稳定单纯蛋白，经KKTC煮沸30min仍保持部分活性。金黄色葡 萄球菌肠毒素能抗蛋白水解酶，进入消化道后仍保持活性。食用受污染食物后，肠毒素作用 于肠壁，刺激呕吐中枢，并产生急性胃肠炎症状。金黄色葡萄球菌的适应性和抵抗外界不良 环境的能力都很强，繁殖时会产生杀白细胞素、肠毒素、溶血毒素、血浆凝固酶等，可以引起 恶心、呕吐、腹泻等胃肠疾病，还可以引起人类化脓感染，严重时可以导致败血症。因此，食 品中金黄色葡萄球菌的检测受到了国内外研宄学者的高度关注。
[0004] 随着经济的发展和报道的透明，中国国内曝光的食品安全问题呈现明显上升趋 势，据统计，我国2002~2011年食物中毒的事件一共有3373起，中毒人数11. 47万人，死 亡人数2088人。引发食物中毒的原因主要是微生物性食物中毒，中毒起数和人数均最多， 分别占总起数的35. 72%和总人数的57. 04%。有效监控食品生产和流通领域的微生物污 染，已经成为人们所面临的现实问题。
[0005] 目前金黄色葡萄球菌检测方法主要包括传统的平板培养法、以分子生物学为基础 的检测法、以免疫学位基础的检测法以及生物传感器法。这些方法有的费时费力、有的成本 高，有的灵敏度低等均存在各自的不足。寻找一种快速、操作简便的检测方法是目前的研宄 重点。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是克服现有技术的不足而提供一种食品中金黄色葡萄球菌的检测 方法，该方法检测时间在3h以内，检测限为10~107cfu/mL。
[0007] 食品中金黄色葡萄球菌的检测方法，包括以下步骤：
[0008] 步骤1，取食品样品，研磨，碎肩加至生理盐水中混合，均质，然后过滤，滤液用去离 子水稀释；
[0009] 步骤2,取步骤1所得稀释液接种到选择培养基，在37°C 120rpm下振荡培养4h ;
[0010] 步骤3,将步骤2所得菌液稀释，稀释液过滤浓缩，取2 μ L浓缩液，加至微生物快速 检测仪中进行检测。
[0011] 作为上述发明的进一步改进，步骤1中食品样品的用量为20~70g，生理盐水的用 量为100~300mL。
[0012] 作为上述发明的进一步改进，步骤1中均质时间为3~8min。
[0013] 作为上述发明的进一步改进，步骤1中稀释倍数为5~20倍。
[0014] 作为上述发明的进一步改进，步骤2中稀释液接种量为5~10v/v%。
[0015] 作为上述发明的进一步改进，步骤2中选择培养基的制备方法为取胰蛋白胨 17. 0g、氯化钠5. 0g、植物蛋白胨3. 0g、葡萄糖2. 5g，磷酸氢二钾2. 5g、梓檬酸钠3. 2g在 1000 mL水中加热溶化，调节pH至7. 4,121°C高压灭菌20min，再加入氯化钠0. 05g、亚蹄酸 钾0. 12g、萘啶酮酸0. 03g、苯乙醇0. 15g、氯化锂0. 14g、硫代硫酸钠0. 21g、吖啶黄0. 05g、 丙酮酸钠〇. 14g、甘氨酸0. 23g、甘露醇0. 17g、柠檬酸钠0. 15g，混合，即得。
[0016] 作为上述发明的进一步改进，步骤3中过滤浓缩的过滤器孔径为0. 45 μ m。
[0017] 本发明提供的食品中金黄色葡萄球菌的检测方法与国标GB 4789. 10-2010的检 测方法不存在显著差异，检测时间在3h以内，检测限为10~107cfu/mL。
【具体实施方式】
[0018] 实施例1
[0019] 步骤1，取食品样品，研磨，碎肩加至生理盐水中混合，均质，然后过滤，滤液用去离 子水稀释；
[0020] 步骤2,取步骤1所得稀释液接种到选择培养基，在37°C 120rpm下振荡培养4h ;
[0021] 步骤3,将步骤2所得菌液稀释，稀释液过滤浓缩，取2 μ L浓缩液，加至微生物快速 检测仪中进行检测。
[0022] 步骤1中食品样品的用量为20g，生理盐水的用量为100mL。
[0023] 步骤1中均质时间为3min。
[0024] 步骤1中稀释倍数为5倍。
[0025] 步骤2中稀释液接种量为5v/v %。
[0026] 步骤2中选择培养基的制备方法为取胰蛋白胨17. 0g、氯化钠5. 0g、植物蛋白胨 3. 0g、葡萄糖2. 5g，磷酸氢二钾2. 5g、朽1檬酸钠3. 2g在1000 mL水中加热溶化，调节pH至 7. 4,121°C高压灭菌20min，再加入氯化钠0. 05g、亚碲酸钾0. 12g、萘啶酮酸0. 03g、苯乙醇 0. 15g、氯化锂0. 14g、硫代硫酸钠0. 21g、吖啶黄0. 05g、丙酮酸钠0. 14g、甘氨酸0. 23g、甘露 醇0. 17g、梓檬酸钠0. 15g，混合，即得。
[0027] 步骤3中过滤浓缩的过滤器孔径为0. 45 μ m。
[0028] 实施例2
[0029] 步骤1，取食品样品，研磨，碎肩加至生理盐水中混合，均质，然后过滤，滤液用去离 子水稀释；
[0030] 步骤2,取步骤1所得稀释液接种到选择培养基，在37°C 120rpm下振荡培养4h ;
[0031] 步骤3,将步骤2所得菌液稀释，稀释液过滤浓缩，取2 μ L浓缩液，加至微生物快速 检测仪中进行检测。
[0032] 步骤1中食品样品的用量为35g，生理盐水的用量为150mL。
[0033] 步骤1中均质时间为5min。
[0034] 步骤1中稀释倍数为8倍。
[0035] 步骤2中稀释液接种量为7v/v %。
[0036] 步骤2中选择培养基的制备方法为取胰蛋白胨17. 0g、氯化钠5. 0g、植物蛋白胨 3. 0g、葡萄糖2. 5g，磷酸氢二钾2. 5g、朽1檬酸钠3. 2g在1000 mL水中加热溶化，调节pH至 7. 4,121°C高压灭菌20min，再加入氯化钠0. 05g、亚碲酸钾0. 12g、萘啶酮酸0. 03g、苯乙醇 0. 15g、氯化锂0. 14g、硫代硫酸钠0. 21g、吖啶黄0. 05g、丙酮酸钠0. 14g、甘氨酸0. 23g、甘露 醇0. 17g、梓檬酸钠0. 15g，混合，即得。
[0037] 步骤3中过滤浓缩的过滤器孔径为0. 45 μ m。
[0038] 实施例3
[0039] 步骤1，取食品样品，研磨，碎肩加至生理盐水中混合，均质，然后过滤，滤液用去离 子水稀释；
[0040] 步骤2,取步骤1所得稀释液接种到选择培养基，在37°C 120rpm下振荡培养4h ;
[0041] 步骤3,将步骤2所得菌液稀释，稀释液过滤浓缩，取2 μ L浓缩液，加至微生物快速 检测仪中进行检测。
[0042] 步骤1中食品样品的用量为50g，生理盐水的用量为200mL。
[0043] 步骤1中均质时间为7min。
[0044] 步骤1中稀释倍数为15倍。
[0045] 步骤2中稀释液接种量为9v/v %。
[0046] 步骤2中选择培养基的制备方法为取胰蛋白胨17. 0g、氯化钠5. 0g、植物蛋白胨 3. 0g、葡萄糖2. 5g，磷酸氢二钾2. 5g、朽1檬酸钠3. 2g在1000 mL水中加热溶化，调节pH至 7. 4,121°C高压灭菌20min，再加入氯化钠0. 05g、亚碲酸钾0. 12g、萘啶酮酸0. 03g、苯乙醇 0. 15g、氯化锂0. 14g、硫代硫酸钠0. 21g、吖啶黄0. 05g、丙酮酸钠0. 14g、甘氨酸0. 23g、甘露 醇0. 17g、梓檬酸钠0. 15g，混合，即得。
[0047] 步骤3中过滤浓缩的过滤器孔径为0. 45 μ m。
[0048] 实施例4
[0049] 步骤1，取食品样品，研磨，碎肩加至生理盐水中混合，均质，然后过滤，滤液用去离 子水稀释；
[0050] 步骤2,取步骤1所得稀释液接种到选择培养基，在37°C 120rpm下振荡培养4h ;
[0051] 步骤3,将步骤2所得菌液稀释，稀释液过滤浓缩，取2 μ L浓缩液，加至微生物快速 检测仪中进行检测。
[0052] 步骤1中食品样品的用量为60g，生理盐水的用量为240mL。
[0053] 步骤1中均质时间为7min。
[0054] 步骤1中稀释倍数为12倍。
[0055] 步骤2中稀释液接种量为9v/v %。
[0056] 步骤2中选择培养基的制备方法为取胰蛋白胨17. 0g、氯化钠5. 0g、植物蛋白胨 3. 0g、葡萄糖2. 5g，磷酸氢二钾2. 5g、朽1檬酸钠3. 2g在1000 mL水中加热溶化，调节pH至 7. 4,121°C高压灭菌20min，再加入氯化钠0. 05g、亚碲酸钾0. 12g、萘啶酮酸0. 03g、苯乙醇 0. 15g、氯化锂0. 14g、硫代硫酸钠0. 21g、吖啶黄0. 05g、丙酮酸钠0. 14g、甘氨酸0. 23g、甘露 醇0. 17g、梓檬酸钠0. 15g，混合，即得。
[0057] 步骤3中过滤浓缩的过滤器孔径为0. 45 μ m。
[0058] 将实施例1至4所得结果与国标金黄色葡萄球检测方法中的第二法Baird-Parker 平板计数法结果进行比较，结果如下：
[0059]
[0060] 由上表可知，本发明提供的食品中金黄色葡萄球菌的检测方法与国标GB 4789. 10-2010的检测方法不存在显著差异。
【主权项】
1. 食品中金黄色葡萄球菌的检测方法，其特征在于：包括以下步骤： 步骤1，取食品样品，研磨，碎肩加至生理盐水中混合，均质、过滤，滤液用去离子水稀 释； 步骤2,取步骤1所得稀释液接种到选择培养基，37°C、120rpm振荡培养4h; 步骤3,将步骤2所得菌液稀释，稀释液过滤浓缩，取2ML浓缩液，加至微生物快速检测 仪中进行检测。2. 根据权利要求1所述的食品中金黄色葡萄球菌的检测方法，其特征在于：步骤1中 食品样品的用量为20~70g，生理盐水的用量为100~300mL。3. 根据权利要求1所述的食品中金黄色葡萄球菌的检测方法，其特征在于：步骤1中 均质时间为3~8min。4. 根据权利要求1所述的食品中金黄色葡萄球菌的检测方法，其特征在于：步骤1中 稀释倍数为5~20倍。5. 根据权利要求1所述的食品中金黄色葡萄球菌的检测方法，其特征在于：步骤2中 稀释液接种量为5~10v/v%。6. 根据权利要求1所述的食品中金黄色葡萄球菌的检测方法，其特征在于：步骤2中 选择培养基的制备方法为取胰蛋白胨17.Og、氯化钠5.Og、植物蛋白胨3.Og、葡萄糖2. 5g， 磷酸氢二钾2. 5g、柠檬酸钠3. 2g在1000 mL水中加热溶化，调节pH至7. 4,121 °C高压灭菌 20min，再加入氯化钠0. 05g、亚蹄酸钾0. 12g、萘啶酮酸0. 03g、苯乙醇0. 15g、氯化锂0. 14g、 硫代硫酸钠〇. 21g、吖啶黄0. 05g、丙酮酸钠0. 14g、甘氨酸0. 23g、甘露醇0. 17g、柠檬酸钠 〇? 15g，混合，即得。7. 根据权利要求1所述的食品中金黄色葡萄球菌的检测方法，其特征在于：步骤3中 过滤浓缩的过滤器孔径为〇. 45Mm。
【专利摘要】本发明提供了一种食品中金黄色葡萄球菌的检测方法，先取食品样品，研磨，碎屑加至生理盐水中混合，均质，然后过滤，滤液用去离子水稀释；再取所得稀释液接种到选择培养基，在37℃ 120rpm下振荡培养4h；然后将所得菌液稀释，稀释液过滤浓缩，取2μL浓缩液，加至微生物快速检测仪中进行检测。本发明提供的食品中金黄色葡萄球菌的检测方法与国标GB 4789.10-2010的检测方法不存在显著差异，检测时间在3h以内，检测限为10～107cfu/mL。
【IPC分类】C12R1/445, C12Q1/04
【公开号】CN104928344
【申请号】CN201510368441
【发明人】熊开胜, 张海防, 谢建庭
【申请人】苏州东辰林达检测技术有限公司
【公开日】2015年9月23日
【申请日】2015年6月29日