一种从咸水卤虫卵中提取四磷酸二鸟苷的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及超临界流体萃取技术领域，特别涉及一种化妆品原料的制备方法，从咸水卤虫(Artemia Salina)卵中提取四磷酸二鸟苷(GP4G)的方法。
【背景技术】
[0002]咸水卤虫(Artemia Salina)是海洋浮游生物中的一种，早在恐龙年代就存活于地球上，咸水卤虫卵中含有较高浓度的四磷酸二鸟苷。
[0003]四憐酸二鸟苷(Diguanosine Tetraphosphate)为4个憐酸基结合于两个鸟苷的化合物(GPPPPG)，简称GP4G，可水解转化成三磷酸腺苷(ATP)，为细胞供给能量。四磷酸二鸟苷目前作为一种功能性原料应用于化妆品行业，GP4G对人体肌肤细胞的独特功效有，(I)补充细胞能量，唤醒休眠细胞，直接快速地补充细胞能量；(2)激活肌肤细胞的各种生理活动及新陈代谢，加速各种保持肌肤健康状态起到关键作用的蛋白的合成；(3)可促进真皮层成纤维细胞分裂增殖，使胶原纤维、网状纤维和弹性纤维增加，调节基质中胶原酶、透明质酸、硫酸软骨素、肝素的含量和活性，维持肌肤真皮结缔组织中的水分，使结缔组织处于疏松状态，防止胶原蛋白由溶解状态变为不溶解状态，从而防止皱纹的产生，并有效修复已经形成的皱纹；(4)保护及修复肌肤细胞的基因免受外界环境因素的损伤，增强肌肤细胞抵抗力，保持肌肤柔软光滑，能够强烈保护DNA的三维立体螺旋结构，并在其结构受到损伤时，对它进行有效的修复；(5)能有效俘虏自由基，抑制黑色素的形成，抵御自由基造成的肌肤老化，促进肌肤活力；能够有效修复自由基对细胞造成的损伤，对肌肤暗沉有明显的改盡口 ο
[0004]目前有报道的关于GP4G的提取方法见于F.J.FINAM0RE和A.H.WARNER于1963 年在 The Journal of B1logical Chemistry 发表的文章 The occurrence of PI,P4?Diguanosine 5’-Tetraphosphate in Brine shrimp eggs 中生产操作步骤复杂，而专利CN101857623A《一种从生物体中提取GP4G的方法》生产过程中产生大量废液，每处理Ikg样品，大概约产生20L酸碱废液，后处理麻烦，不利于环境保护。
【发明内容】
[0005]本发明要解决的技术问题是提一种操作简单、环保、制备过程无废液产生的从咸水卤虫卵中提取四磷酸二鸟苷的方法。
[0006]为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是:一种从咸水卤虫卵中提取四磷酸二鸟苷的方法，其特征在于采用以下步骤:
A、先将咸水卤虫卵在4(T45°C烘箱中预先烘干，将咸水卤虫卵与无水乙醇按质量比I: Γ10的比例混合均匀，将混合液在常温、7(Tl50Mpa压力下通过高压均质机进行破壁处理，将混合液通过300目过滤网除杂，然后将所得混合液在冻干机中冷冻干燥，得咸水卤虫卵粉块；
B、称步骤A所得咸水卤虫卵粉块，装入超临界萃取釜中，在超临界萃取釜的入口和出口设置滤纸或脱脂棉，阻止萃取时粉块穿过超临界萃取釜的过滤板，萃取温度为4(T50°C，萃取压力为3(T45Mpa，乙醇作为夹带剂，乙醇的添加量为萃取釜中咸水卤虫卵粉块质量的5?10%，CO2的流量控制在20(T400L/h，萃取时间2?3h ;分离釜温度为2(T30°C，分离压为5Mpa,回收乙醇,冷冻干燥后获得粉状物。
[0007]本发明提供的制备方法简单可行，首先通过高压均质机对咸水卤虫卵进行预处理，将咸水卤虫卵进行粉碎，然后采用超临界CO2萃取技术，萃取咸水卤虫卵粉块中的四磷酸二鸟苷(GP4G)，最后冷冻干燥得粉状物，萃取得率在709Γ75%之间，远高于Theoccurrence of PI, P4?Diguanosine 5’ -Tetraphosphate in Brine shrimp eggs 论文中所述方法的萃取得率(得率为10%)和专利CN101857623A《一种从生物体中提取GP4G的方法》的萃取得率(得率为50%)。经高效液相色谱法测定本发明制备的粉状物，GP4G的纯度不低于为85%。超临界萃取过程中使用乙醇为夹带剂，安全、环保、可回收。传统提取方法需要经过原料预处理、脱水、破碎、浸取、中和、吸附、洗脱、脱盐和真空浓缩等工艺过程，其四磷酸二鸟苷(GP4G)的收率低，纯度低，设备要求条件高，生产成本高，不利于工业化生产。
本发明具有绿色环保、无三废排放、收率高、萃取得率在709Γ75%之间，纯度不低于85%，生产成本低，有利于工业化生产的优点。
【具体实施方式】
[0008]以下通过实施例对本发明作进一步的说明。
[0009]实施例1:
一种从咸水卤虫(Artemia Salina)卵中提取GP4G的方法,采用以下步骤制备:
Α:原料预处理过程:卤虫卵在40°C烘箱中预先烘干，按咸水卤虫卵:无水乙醇=1:1的质量比例混合均匀，常温下，在70Mpa条件下通过高压均质机，将咸水卤虫卵粉碎，收集通过300目过滤网的混合液，将混合液在冻干机中冷冻干燥后得卤虫卵粉块，回收乙醇；
B:超临界萃取过程:称取100g预处理的卤虫卵粉末，装入萃取釜中，在超临界萃取釜的入口和出口设置滤纸或脱脂棉，阻止萃取时粉块穿过超临界萃取釜的过滤板，萃取温40°C，萃取压力30Mpa，乙醇作为夹带剂，添加量为5% (质量百分比)，CO2的流量200L/h，萃取时间2h ；
C:萃取物收集过程:分离釜温度为2(T35°C，分力压为5Mpa，回收乙醇，冷冻干燥得GP4G粉状物，萃取得率为70%，高效液相色谱发测定GP4G纯度为85.5%。
[0010]实施例2:
一种从咸水卤虫(Artemia Salina)卵中提取GP4G的方法,采用以下步骤制备:
A:原料预处理过程:卤虫卵在42°C烘箱中预先烘干，按咸水卤虫卵:无水乙醇=1:3的质量比例混合均匀，常温下，在10Mpa条件下通过高压均质机，将咸水卤虫卵粉碎，收集通过300目过滤网的混合液，将混合液在冻干机中冷冻干燥后得卤虫卵粉块，回收乙醇；
B:超临界萃取过程:称取100g预处理的卤虫卵粉末，装入萃取釜中，在超临界萃取釜的入口和出口设置滤纸或脱脂棉，阻止萃取时粉块穿过超临界萃取釜的过滤板，萃取温45°C，萃取压力30Mpa，乙醇作为夹带剂，添加量为8% (质量比)，C02的流量300L/h，萃取时间 2.5h ；
C:萃取物收集过程:分离釜温度为20°C，分力压为5Mpa，回收乙醇，冷冻干燥得GP4G粉状物，萃取得率为73.5%，高效液相色谱发测定GP4G纯度为86.5%。
[0011]实施例3:
一种从咸水卤虫(Artemia Salina)卵中提取GP4G的方法,采用以下步骤制备:
A:原料预处理过程:卤虫卵在45°C烘箱中预先烘干，按咸水卤虫卵:无水乙醇=1:8的质量比例混合均匀，常温下，在120Mpa条件下通过高压均质机，将咸水卤虫卵粉碎，收集通过300目过滤网的混合液，将混合液在冻干机中冷冻干燥后得卤虫卵粉块，回收乙醇；
B:超临界萃取过程:称取100g预处理的卤虫卵粉末，装入萃取釜中，在超临界萃取釜的入口和出口设置滤纸或脱脂棉，阻止萃取时粉块穿过超临界萃取釜的过滤板，萃取温45°C，萃取压力40Mpa，乙醇作为夹带剂，添加量为10% (质量比)，CO2的流量400L/h，萃取时间2.5h ；
C:萃取物收集过程:分离釜温度为25V，分力压为5Mpa，回收乙醇，冷冻干燥得GP4G粉状物，萃取得率为75.0%，高效液相色谱发测定GP4G纯度为87.5%。
[0012]实施例4:
一种从咸水卤虫(Artemia Salina)卵中提取GP4G的方法,采用以下步骤制备:
A:原料预处理过程:卤虫卵在45°C烘箱中预先烘干，按咸水卤虫卵:无水乙醇=1:10的质量比例混合均匀，通过高压均质机，常温下，在150Mpa条件下，将咸水卤虫卵粉碎，收集通过300目过滤网的混合液，将混合液在冻干机中冷冻干燥后得卤虫卵粉块，回收乙醇；B:超临界萃取过程:称取100g预处理的卤虫卵粉末，装入萃取釜中，在超临界萃取釜的入口和出口设置滤纸或脱脂棉，阻止萃取时粉块穿过超临界萃取釜的过滤板，萃取温50°C，萃取压力45Mpa，乙醇作为夹带剂，添加量为10% (质量比)，CO2的流量400L/h，萃取时间3h ；
C:萃取物收集过程:分离釜温度为30°C，分力压为5Mpa，回收乙醇，冷冻干燥得GP4G粉状物，萃取得率为74.0%，高效液相色谱发测定GP4G纯度为85.0%。
[0013]实施例5:
一种从咸水卤虫(Artemia Salina)卵中提取GP4G的方法,采用以下步骤制备:
A:原料预处理过程:卤虫卵在45°C烘箱中预先烘干，按咸水卤虫卵:无水乙醇=1:5的质量比例混合均匀，常温下，在120Mpa条件下通过高压均质机，将咸水卤虫卵粉碎，收集通过300目过滤网的混合液，将混合液在冻干机中冷冻干燥后得卤虫卵粉块，回收乙醇；
B:超临界萃取过程:称取100g预处理的卤虫卵粉末，装入萃取釜中，在超临界萃取釜的入口和出口设置滤纸或脱脂棉，阻止萃取时粉块穿过超临界萃取釜的过滤板，萃取温45°C，萃取压力45Mpa，乙醇作为夹带剂，添加量为10% (质量比)，CO2的流量400L/h，萃取时间3h ；
C:萃取物收集过程:分离釜温度为25°C，分力压为5Mpa，回收乙醇，冷冻干燥得GP4G粉状物，萃取得率为75.0%，高效液相色谱发测定GP4G纯度为85.5%。
【主权项】
1.一种从咸水卤虫卵中提取四磷酸二鸟苷的方法，其特征在于采用以下步骤: A、先将咸水卤虫卵在4(Γ45V烘箱中预先烘干，将咸水卤虫卵与无水乙醇按质量比I: Γ10的比例混合均匀，将混合液在常温、7(Tl50Mpa压力下通过高压均质机，将混合液通过300目过滤网除杂，然后将所得混合液在冻干机中冷冻干燥，得咸水卤虫卵粉块； B、称步骤A所得咸水卤虫卵粉块，装入超临界萃取釜中，在超临界萃取釜的入口和出口设置滤纸或脱脂棉，阻止萃取时粉块穿过超临界萃取釜的过滤板，萃取温度为4(T50°C，萃取压力为3(T45Mpa，乙醇作为夹带剂，乙醇的添加量为萃取釜中咸水卤虫卵粉块质量的5?10% (质量比)，CO2的流量控制在20(T400L/h，萃取时间2?3h ;分离釜温度为2(T30°C，分离压为5Mpa,回收乙醇,冷冻干燥后获得粉状物。
【专利摘要】本发明涉及一种从咸水卤虫卵中提取四磷酸二鸟苷的方法，采用以下步骤：A、先将咸水卤虫卵在40~45℃烘箱中预先烘干，将咸水卤虫卵与无水乙醇按质量比1:1~10的比例混合均匀，然后通过高压均质机进行粉碎，过滤网除杂，冷冻干燥，得咸水卤虫卵粉块；B、将咸水卤虫卵粉块，装入超临界萃取釜中，萃取温度为40~50℃，萃取压力为30~45Mpa，乙醇作为夹带剂，乙醇的添加量为萃取釜中咸水卤虫卵粉块质量的5~10%，CO2的流量控制在200~400L/h,萃取时间2~3h；分离釜温度为20~30℃，分离压为5Mpa，回收乙醇，冷冻干燥后获得粉状物。本发明具有绿色环保、无三废排放、收率高、生产成本低，有利于工业化生产的优点。
【IPC分类】C07H19/20, C07H1/08
【公开号】CN104974207
【申请号】CN201410131004
【发明人】毕永贤, 蒋丽刚, 殷海琴
【申请人】珀莱雅化妆品股份有限公司
【公开日】2015年10月14日
【申请日】2014年4月3日