一种活性猪脑多肽的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及化工生物技术领域，具体涉及一种脑多肽制备方法。
【背景技术】
[0002]肽是α —氨基酸以肽键连接在一起而形成的化合物，它也是蛋白质水解的中间产物，肽主要控制人体的生长、发育、免疫调节和新陈代谢，它在人体处于一种平衡状态，若活性肽减少后，人体的机能发生重要变化，对于儿童来说，他的生长、发育变得缓慢，甚至停止，长久下去就形成了侏儒，对成年人或老年人，缺少活性肽后，自身的免疫力就会下降，新陈代谢紊乱，内分泌失调，引起各种疾病的产生，如失眠、身体消瘦或浮肿。由于活性肽还作用于神经系统，因此人体就会变得动作迟缓，头脑不再聪慧，更主要的是活性肽减少，直接引起人身体各部位逐渐出现全面衰老，引发各种疾病。脑多肽是一种良好的健脑补脑的生物制剂，猪脑，因其成本低，丰富易得，因此用于制成脑多肽系列产品，现有的脑多肽提取工艺存在活性差，病毒消灭不彻底，生产过程中不安全环保等问题。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于改进现有工艺技术中的不足，提供一种活性脑多肽的制备方法，可有效地解决了目前脑多肽活性差、病毒消灭不彻底等难题。
[0004]为实现上述目的，本发明采取以下工艺技术方案:
本发明提供一种活性猪脑多肽的制备方法，包括以下工段:(一)猪脑组织的收集、(二)猪脑胶原蛋白的提取、(三)猪脑胶原蛋白的酶解、(四)猪脑多肽的分离、(五)猪脑多肽的活化:
(一)猪脑组织的收集
将新鲜或冷冻的胎猪脑组织在室温下用超纯净水洗净，加入质量百分比为3-5倍的无菌超存水，采用涡轮式搅拌器进行搅拌，形成均匀的猪脑蛋白浆液，脱水后得到纯净的猪脑组织；
(二)猪脑胶原蛋白的提取
用质量百分比为1.0-5.0%的醋酸对所述的猪脑组织进行浸泡预处理，水洗后用60-85°C的热水抽提4-10h得到猪脑明胶提取液，将所述提取液浓缩至胶原蛋白质量百分比浓度为15-25%的猪脑胶原蛋白；
(三)猪脑胶原蛋白的酶解
在所述的猪脑胶原蛋白中加入丝氨酸蛋白酶，采用酶解得到猪脑多肽混合液；
(四)猪脑多肽的分离
将所述的猪脑多肽混合液加入有机溶剂，充分搅拌后静置5-8h，离心去除沉淀，用切向流超滤设备截留上清液，取分子量小于3000 Da的多肽提取物，进行除菌过滤；
(五)猪脑多肽的活化将所述的猪脑多肽提取物采用二苯酯磷酰杂环化合物对猪脑多肽中的羟基进行活化，得到活性猪脑多肽。
[0005]在步骤(三)所述酶解工艺条件:丝氨酸蛋白酶添加量为猪脑胶原蛋白质量百分比的 1.0-6.0%，pH 值 3-7，温度为 45-600C，时间为 4_10h。
[0006]在步骤(四)所述有机溶剂为二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、醋酸、乙腈中的一种。
[0007]在步骤(四)所述除菌过滤采用膜过滤法，所述膜的孔径为0.45- 0.2 μπι。
[0008]在步骤(四)所述离心去除沉淀，离心速率为7000-9000转/min，离心分离时间为10_30min 。
[0009]本发明涉及一种活性猪脑多肽的制备方法，采用醋酸进行初步水解得到猪脑胶原蛋白；采用丝氨酸蛋白酶进行定向酶解，得到猪脑多肽混合液，采用有机溶剂沉淀、离心分离以及膜除菌相结合的分离工艺，既分离得到水解多肽产品，又同时实现去杂、去色、去味和除菌，提高了产品的质量；通过控制适宜的酶解条件，使胶原蛋白大分子断裂成活性多肽；采用二苯酯磷酰杂环化合物对猪脑多肽中的羟基进行活化，增加了多肽的水溶性，便于在化妆品、医药、食品等工业领域的应用。
[0010]下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，并非对本发明的限制，凡是依照本发明公开内容所进行的任何本领域的等同替换，均属于本发明的保护范围。
【具体实施方式】
[0011]实施例1:
本【具体实施方式】采取以下技术方案，它的工艺流程为:
(一)猪脑组织的收集
将新鲜胎猪脑组织在室温下用超纯净水洗净，加入质量百分比为3倍的无菌超存水，采用涡轮式搅拌器进行搅拌，形成均匀的猪脑蛋白浆液，脱水后得到纯净的猪脑组织；
(二)猪脑胶原蛋白的提取
用质量百分比为1.0%的醋酸对所述的猪脑组织进行浸泡预处理，水洗后用60°C的热水抽提1h得到猪脑明胶提取液，将所述提取液浓缩至胶原蛋白质量百分比浓度为15%的猪脑胶原蛋白；
(三)猪脑胶原蛋白的酶解
采用酶解得到猪脑多肽混合液，在所述的猪脑胶原蛋白中加入丝氨酸蛋白酶，酶解工艺条件:丝氨酸蛋白酶添加量为猪脑胶原蛋白质量百分比的5.0 %，pH值6.0，温度为45°C，时间为1h0
[0012](四)猪脑多肽的分离
将所述的猪脑多肽混合液加入醋酸，充分搅拌后静置5h，离心去除沉淀，用切向流超滤设备截留上清液，取分子量小于3000 Da的多肽提取物，进行除菌过滤，所述除菌过滤采用膜过滤法，所述膜的孔径为0.45 μπι，所述离心去除沉淀，离心速率为7000转/min，离心分离时间为30min。
[0013](五)猪脑多肽的活化
将所述的猪脑多肽提取物采用二苯酯磷酰杂环化合物对猪脑多肽中的羟基进行活化，得到活性猪脑多肽。
[0014]实施列2 一种活性猪脑多肽的制备方法，包括以下工段:(一)猪脑组织的收集、(二)猪脑胶原蛋白的提取、(三)猪脑胶原蛋白的酶解、(四)猪脑多肽的分离、(五)猪脑多肽的活化，其特征在于:
(一)猪脑组织的收集
将冷冻的胎猪脑组织在室温下用超纯净水洗净，加入质量百分比为5倍的无菌超存水，采用涡轮式搅拌器进行搅拌，形成均匀的猪脑蛋白浆液，脱水后得到纯净的猪脑组织；
(二)猪脑胶原蛋白的提取
用质量百分比为5.0%的醋酸对所述的猪脑组织进行浸泡预处理，水洗后用80°C的热水抽提4h得到猪脑明胶提取液，将所述提取液浓缩至胶原蛋白质量百分比浓度为25%的猪脑胶原蛋白；
(三)猪脑胶原蛋白的酶解
采用酶解得到猪脑多肽混合液，在所述的猪脑胶原蛋白中加入丝氨酸蛋白酶，酶解工艺条件:丝氨酸蛋白酶添加量为猪脑胶原蛋白质量百分比的1.0 %，pH值3.5，温度为60°C，时间为4ho
[0015](四)猪脑多肽的分离
将所述的猪脑多肽混合液加入二甲基亚砜，充分搅拌后静置5h，离心去除沉淀，用切向流超滤设备截留上清液，取分子量小于1000 Da的多肽提取物，进行除菌过滤，所述除菌过滤采用膜过滤法，所述膜的孔径为0.25 μπι，所述离心去除沉淀，离心速率为9000转/min，离心分离时间为25 min。
[0016](五)猪脑多肽的活化
将所述的猪脑多肽提取物采用二苯酯磷酰杂环化合物对猪脑多肽中的羟基进行活化，得到活性猪脑多肽。
【主权项】
1.一种活性猪脑多肽的制备方法，包括以下工段:(一)猪脑组织的收集、(二)猪脑胶原蛋白的提取、(三)猪脑胶原蛋白的酶解、(四)猪脑多肽的分离、(五)猪脑多肽的活化，其特征在于: (一)猪脑组织的收集 将新鲜或冷冻的胎猪脑组织在室温下用超纯净水洗净，加入质量百分比为3-5倍的无菌超存水，采用涡轮式搅拌器进行搅拌，形成均匀的猪脑蛋白浆液，脱水后得到纯净的猪脑组织； (二)猪脑胶原蛋白的提取 用质量百分比为1.0-5.0%的醋酸对所述的猪脑组织进行浸泡预处理，水洗后用60-85°C的热水抽提4-10h得到猪脑明胶提取液，将所述提取液浓缩至胶原蛋白质量百分比浓度为15-25%的猪脑胶原蛋白； (三)猪脑胶原蛋白的酶解 在所述的猪脑胶原蛋白中加入丝氨酸蛋白酶，采用酶解得到猪脑多肽混合液； (四)猪脑多肽的分离 将所述的猪脑多肽混合液加入有机溶剂，充分搅拌后静置5-8h，离心去除沉淀，用切向流超滤设备截留上清液，取分子量小于3000 Da的多肽提取物，进行除菌过滤； (五)猪脑多肽的活化 将所述的猪脑多肽提取物采用二苯酯磷酰杂环化合物对猪脑多肽中的羟基进行活化，得到活性猪脑多肽。2.根据权利要求1所述活性猪脑多肽的制备方法，其特征在于:在步骤(三)所述酶解工艺条件:丝氨酸蛋白酶添加量为猪脑胶原蛋白质量百分比的1.0-6.0%，ρΗ值3-7，温度为45-60 0C，时间为 4-1 Oh。3.根据权利要求1所述活性猪脑多肽的制备方法，其特征在于:在步骤(四)所述有机溶剂为二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、醋酸、乙腈中的一种。4.根据权利要求1所述活性猪脑多肽的制备方法，其特征在于:在步骤(四)所述除菌过滤采用膜过滤法，所述膜的孔径为0.45- 0.2μπι。5.根据权利要求1所述活性猪脑多肽的制备方法，其特征在于:在步骤(四)所述离心去除沉淀，离心速率为7000-9000转/min，离心分离时间为10_30min。
【专利摘要】本发明涉及一种活性猪脑多肽的制备方法，采用醋酸进行初步水解得到猪脑胶原蛋白；采用丝氨酸蛋白酶进行定向酶解，得到猪脑多肽混合液，采用有机溶剂沉淀、离心分离以及膜除菌相结合的分离工艺，既分离得到水解多肽产品，又同时实现去杂、去色、去味和除菌，提高了产品的质量；通过控制适宜的酶解条件，使胶原蛋白大分子断裂成活性多肽；采用二苯酯磷酰杂环化合物对猪脑多肽中的羟基进行活化，增加了多肽的水溶性，便于在化妆品、医药、食品等工业领域的应用。
【IPC分类】C07K1/30, C07K1/08, C12P21/06
【公开号】CN105039482
【申请号】CN201510545539
【发明人】刘冬明
【申请人】刘冬明
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年8月31日