一种人工蝉花的制备方法
【专利说明】一种人工蝉花的制备方法技术背景
[0001]蝉花是一种传统中药，药理研究表明蝉花具有镇痛、镇静、解热、抗肿瘤以及抗衰老等作用。天然蝉花作为一种传统中药材，产量非常稀少，品质难以控制。从蝉花中分离纯化出蝉拟青霉菌株进行蝉花人工培养可以部分药品和保健品领域的应用。由于在蝉花人工培养过程中大量活性物质被菌株分泌到培养基中，因此将人工蝉花应用与食品保健品领域时，要么需要进行培养基中活性物质的分离提取，从而显著提高了生产成本，要么只使用菌体而浪费了富含活性物质的培养基。
[0002]另外，人工蝉花菌株产生的多球壳菌素是重要的抗衰老活性物质。它可以增强细胞的线粒体功能，促进细胞呼吸，促进细胞内抗氧化因子的产生，减少细胞的氧化损伤。然而有研究表明，人工蝉花产生的多球壳菌素浓度比较低，在没有更好的手段来提高多球壳菌素浓度的情况下，需要采取一些方法增强多球壳菌素的药效来达到保健作用。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是提供一种人工蝉花的制备方法，包括采用三级培养的方法获取人工蝉花菌体的有效成分，同时对发酵过程中产生的培养基滤液进行喷雾干燥，最终获得人工蝉花的有效成分，用于抗衰老和护肤等领域。所述方法能够有效获取蝉花菌体活性成分，同时对培养基中的活性成分加以利用，显著提高了生产效率。
[0004]本发明的技术方案为:一种人工蝉花的培养方法，培养过程分为三级:
[0005]步骤一:第一级种子液的培养。采用三角瓶进行液体摇床培养。使用葡萄糖蛋白胨培养基，将每个500ml三角瓶装入150ml培养基，用棉塞封住瓶口，0.1Mpa下(121°C )灭菌25分钟。取出冷却至室温，超净工作台接种。先用接种针挑出适量斜面菌种于装有玻璃珠和培养基的三角瓶内，将菌丝打碎。然后将菌液接入其他装有培养基的三角瓶中，接种量为每瓶1ml?20ml。在摇床上(27°C )振荡培养，振荡频率180转/分钟。振荡培养6天即可终止培养，转入第二级培养。
[0006]步骤二:二级培养。第二级培养使用牛乳培养基，灭菌后冷却至27°C，加入0.5%(v/v)的种子液，摇匀。在摇床上(27°C)振荡培养，振荡频率180次/分钟。振荡培养6天终止培养，转入第三级扩大培养。
[0007]步骤三:第三级培养使用含葡萄糖牛乳培养基，培养基灭菌后冷却至27°C，加入1% (v/v)的二级培养物，摇匀。发酵培养9天终止培养。
[0008]步骤四:第三级培养发酵结束后将蝉花发酵培养液和菌丝体混合物按如下方法分离:减压抽滤，收集发酵滤液和菌丝体滤饼。发酵滤液通过喷雾干燥机进行干燥获得滤液干粉，菌丝体滤饼通过烘干机进行干燥，然后再粉碎过80目，获得菌丝体干粉。
[0009]进一步的，步骤一所用葡萄糖蛋白胨培养基成分为(按1L):葡萄糖30g，蛋白胨5g，酵母粉 3g，KH2PO4 0.3g，K2HPO4.3H20 0.92g，MgSO4.7H20 0.61g，pH 5.5。
[0010]进一步的，步骤二所用的牛乳培养基成分为(按1L):牛乳850ml(总乳固体12%，脂肪 3% )，葡萄糖 15g，KH2P04 0.lg, K2HP04.3H20 0.3g，MgS04.7H20 0.5g，pH 5.5。
[0011]进一步的，所述步骤三含葡萄糖牛乳培养基成分为含15g/L葡萄糖的纯牛乳(总乳固体12%，脂肪3%)。
[0012]本发明的有益效果是，本发明的制备人工蝉花的方法能够有效获取蝉花菌体活性成分，同时对培养基中的活性成分加以利用，显著提高了生产效率。此外，以牛乳作为第二和第三级发酵培养的主要培养基组分，不仅提升了人工蝉花制品的口感，也增加了营养价值。
【具体实施方式】
[0013]为了使本发明的发明目的、技术手段、技术效果等更易于了解，以下结合具体实施例进一步阐述本发明
[0014]—种人工蝉花的培养方法，培养过程分为三级:
[0015]步骤一:第一级种子液的培养。采用三角瓶进行液体摇床培养。使用葡萄糖蛋白胨培养基，培养基成分为(按1L):葡萄糖30g，蛋白胨5g，酵母粉3g，KH2PO4 0.3g，K2HPO4.3Η200.92g，MgSO4.7H20 0.61g，pH 5.5。将每个500ml三角瓶装入150ml培养基，用棉塞封住瓶口，0.1Mpa下(121°C)灭菌25分钟。取出冷却至室温，超净工作台接种。先用接种针挑出适量斜面菌种于装有玻璃珠和培养基的三角瓶内，将菌丝打碎。然后将菌液接入其他装有培养基的三角瓶中，接种量为每瓶1ml?20ml。在摇床上(27°C )振荡培养，振荡频率180转/分钟。振荡培养6天即可终止培养，转入第二级培养。
[0016]步骤二: 二级培养。第二级培养使用牛乳培养基，培养基成分为(按1L):牛乳 850ml (总乳固体 12 %，脂肪 3 % )，葡萄糖 15g，KH2P04 0.lg, K2HP04.3H20 0.3g，MgS04.7H20 0.5g，pH 5.5。灭菌后冷却至27°C，加入0.5% (v/v)的种子液，摇勾。在摇床上(27°C )振荡培养，振荡频率180次/分钟。振荡培养6天终止培养，转入第三级扩大培养。
[0017]步骤三:第三级培养使用含葡萄糖牛乳培养基，培养基成分为含15g/L葡萄糖的纯牛乳(总乳固体12%，脂肪3%)。培养基灭菌后冷却至27°C，加入1% (v/v)的二级培养物，摇匀。发酵培养9天终止培养。
[0018]步骤四:第三级培养发酵结束后将蝉花发酵培养液和菌丝体混合物按如下方法分离:减压抽滤，收集发酵滤液和菌丝体滤饼。发酵滤液通过喷雾干燥机进行干燥获得滤液干粉，菌丝体滤饼通过烘干机进行干燥，然后再粉碎过80目，获得菌丝体干粉。
[0019]所述菌丝体干粉和滤液干粉可用于制备蝉花抗氧化防衰老组合物等。
【主权项】
1.一种人工蝉花的培养方法，包括三级培养过程: 步骤一:第一级种子液的培养。采用三角瓶进行液体摇床培养。使用葡萄糖蛋白胨培养基，将每个500ml三角瓶装入150ml培养基，用棉塞封住瓶口，0.1Mpa下(121°C )灭菌25分钟。取出冷却至室温，超净工作台接种。先用接种针挑出适量斜面菌种于装有玻璃珠和培养基的三角瓶内，将菌丝打碎。然后将菌液接入其他装有培养基的三角瓶中，接种量为每瓶1ml?20ml。在摇床上(27°C )振荡培养，振荡频率180转/分钟。振荡培养6天即可终止培养，转入第二级培养。 步骤二:二级培养。第二级培养使用牛乳培养基，灭菌后冷却至27°C，加入0.5% (v/V)的种子液，摇匀。在摇床上(27°C)振荡培养，振荡频率180次/分钟。振荡培养6天终止培养，转入第三级扩大培养。 步骤三:第三级培养使用含葡萄糖牛乳培养基，培养基灭菌后冷却至27°C，加入1%(v/v)的二级培养物，摇匀。发酵培养9天终止培养。2.权利要求1所述的蝉花的人工培养方法，还包括步骤四:在第三级培养发酵结束后将蝉花发酵培养液和菌丝体混合物按如下方法分离:减压抽滤，收集发酵滤液和菌丝体滤饼。发酵滤液通过喷雾干燥机进行干燥获得滤液干粉，菌丝体滤饼通过烘干机进行干燥，然后再粉碎过80目，获得菌丝体干粉。3.权利要求1-2的方法，其特征在于，所述步骤一中的葡萄糖蛋白胨培养基成分为(按 1L):葡萄糖 30g，蛋白胨 5g，酵母粉 3g，KH2PO4 0.3g，K2HPO4.3H20 0.92g，MgSO4.7H200.61g，pH 5.5。4.权利要求1-3的方法，其特征在于，所述步骤二所用的牛乳培养基成分为(按1L):牛乳 850ml (总乳固体 12%，脂肪 3% )，葡萄糖 15g，KH2P04 0.lg, K2HP04.3H20 0.3g，MgS04.7H20 0.5g，pH 5.5。5.权利要求1-4的方法，其特征在于，所述步骤三所用的含葡萄糖牛乳培养基成分为含15g/L葡萄糖的纯牛乳(总乳固体12%，脂肪3% )。
【专利摘要】一种人工蝉花的培养方法，包括以下步骤：一级培养基灭菌后斜面接种，将菌丝打碎。然后将菌液接入其他装有培养基的三角瓶中。摇床振荡培养，6天终止培养，转入第二级培养。二级培养采用牛乳培养基，灭菌后冷却，加入种子液，摇匀。摇床振荡培养，振荡培养6天终止培养，转入第三级扩大培养。三级培养所用培养基成分为含葡萄糖的纯牛乳，培养发酵结束后减压抽滤分离蝉花发酵培养液和菌丝体混合物，发酵滤液通过喷雾干燥机进行干燥获得滤液干粉，菌丝体滤饼通过烘干机进行干燥，然后再粉碎过80目，获得菌丝体干粉。
【IPC分类】A01G1/04, C12N1/14
【公开号】CN105087401
【申请号】CN201510595005
【发明人】刘科
【申请人】成都朴锐生物科技有限公司
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2015年9月17日