)X100 %
[0114] 经计算，实施例3中碳酸镧纳米颗粒与DNA的结合率为51. 6%，实施例4中DNA的 洗脱率为1〇〇%。
[0115] 分别读取图10和图11中260nm处的吸光度数值，其中实施例6中反应前溶液的吸 光度为A26。4，反应、离心后上清液一的吸光度为A26。5，实施例7中反应、离心后上清液二的 吸光度为A26。6，然后按如下公式计算碳酸镧纳米颗粒与DNA的结合率以及DNA的洗脱率：
[0116] 结合率=(A26。4-A26。5)/A26。4X100%
[0117] 洗脱率=A260 6/ (A260 4-A26。5)X100 %
[0118] 经计算，实施例6中碳酸镧纳米颗粒与DNA的结合率为48. 4%，实施例7中DNA的 洗脱率为68%。
[0119] 实验例5回收的碳酸镧纳米颗粒重复利用
[0120] 将实施例5中回收的碳酸镧纳米颗粒按照与实施例3、实施例4相同的方法用于分 离富集DNA，然后按照与实验例4相同的方法计算回收的碳酸镧纳米颗粒与DNA的结合率， 结果显示，回收的碳酸镧纳米颗粒与DNA的结合率为51. 6%。
[0121] 对比例
[0122] 对比例1
[0123] 按照类似于本发明实施例3中所述方法将碳酸镧纳米颗粒与DNA结合，区别在于， 将实施例3所述方法中的pH为5. 8的lOmmol/L六次甲基四胺-盐酸缓冲溶液替换为pH 为7. 2的lOmmol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲溶液，然后按照与实验例4相同的方法测 定碳酸镧纳米颗粒与DNA的结合率，结果显示，结合率为29. 9%。
[0124] 对比例2
[0125] 按照类似于本发明实施例3中所述方法将碳酸镧纳米颗粒与DNA结合，区别在于， 将实施例3所述方法中的pH为5. 8的lOmmol/L六次甲基四胺-盐酸缓冲溶液替换为pH 为6. 2的lOmmol/L六次甲基四胺-盐酸缓冲溶液，然后按照与实验例4相同的方法测定碳 酸镧纳米颗粒与DNA的结合率，结果显示，结合率为36. 4%。
[0126] 对比例3
[0127] 按照类似于本发明实施例3中所述方法将碳酸镧固体粉末与DNA结合，区别在于， 将实施例3所述方法中的碳酸镧纳米颗粒替换为碳酸镧固体粉末，然后按照与实验例4相 同的方法测定碳酸镧与DNA的结合率，结果显示，结合率为36. 9%。
[0128] 对比例4
[0129] 按照类似于本发明实施例3中所述方法将碳酸镧纳米颗粒与DNA结合，区别在于， 将实施例3所述方法中粒径为100~500nm的碳酸镧纳米颗粒替换为粒径为600~1000 nm 的碳酸镧纳米颗粒，所述粒径为600~1000 nm的碳酸镧纳米颗粒为按照类似于本发明实施 例2中所述方法制备得到，区别在于，高速剪切处理时间为15分钟，然后按照与实验例4相 同的方法测定碳酸镧纳米颗粒与DNA的结合率，结果显示，结合率为43. 5%。
[0130] 对比例5
[0131] 按照类似于本发明实施例3中所述方法将碳酸钙颗粒与DNA结合，区别在于，将实 施例3所述方法中的碳酸镧纳米颗粒替换为碳酸钙颗粒，然后按照与实验例4相同的方法 测定碳酸钙与DNA的结合率，结果显示，结合率为9. 87%。
[0132] 对比例6
[0133] 按照类似于本发明实施例3中所述方法将二氧化硅颗粒与DNA结合，区别在于，将 实施例3所述方法中的碳酸镧纳米颗粒替换为二氧化硅颗粒，然后按照与实验例4相同的 方法测定二氧化硅与DNA的结合率，结果显示，结合率为0. 00%。
[0134] 在本发明的描述中，需要说明的是，术语"上"、"下"、"内"、等指示的方位或位置关 系为基于本发明工作状态下的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而 不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此 不能理解为对本发明的限制。
[0135] 以上结合优选实施方式和范例行实例对本发明进行了详细说明。不过需要声明的 是，这些【具体实施方式】仅是对本发明的阐述性解释，并不对本发明的保护范围构成任何限 制。在不超出本发明精神和保护范围的情况下，可以对本发明技术内容及其实施方式进行 各种改进、等价替换或修饰，这些均落入本发明的保护范围内。本发明的保护范围以所附权 利要求为准。
【主权项】
1. 使用碳酸镧进行核酸分离富集的方法，其特征在于，该方法包括： 步骤1)，将碳酸镧固体高速剪切处理，制备成碳酸镧纳米颗粒； 步骤2)，将待分离富集的核酸样品溶于缓冲溶液一中，加入步骤1)中所述碳酸镧纳米 颗粒，搅拌0. 2~2. 5小时，优选0. 3~1. 8小时，最优选0. 3~1. 5小时，离心分离，得到 固相部分一，所述固相部分一为碳酸镧纳米颗粒-核酸复合物； 步骤3)，将步骤2)中所述固相部分一用蒸馏水清洗后加入到缓冲溶液二中，搅拌 0. 1~1. 5小时，优选0. 2~I. 0小时，最优选0. 2~0. 5小时，离心分离，得到上清液和固 相部分二，所述上清液为分离富集后的核酸溶液； 步骤4)，将步骤3)中所述固相部分二使用稀酸进行淋洗，蒸馏水清洗至中性，离心分 离，得到固相部分三，所述固相部分三为回收的碳酸镧纳米颗粒。2. 根据权利要求1所述的使用碳酸镧进行核酸分离富集的方法，其特征在于，步骤1) 中所述碳酸镧为La2 (CO3) 3 ? xH20,其中X值为0~8。3. 根据权利要求1所述的使用碳酸镧进行核酸分离富集的方法，其特征在于，步骤1) 中所述碳酸镧纳米颗粒的粒径为100~500nm。4. 根据权利要求1所述的使用碳酸镧进行核酸分离富集的方法，其特征在于，步骤2) 中所述核酸包括DNA和RNA。5. 根据权利要求1所述的使用碳酸镧进行核酸分离富集的方法，其特征在于，步骤2) 中所述缓冲溶液一的pH值为5. 5~9. 0,优选为5. 5~6. 5,最优选为5. 5~6. 0。6. 根据权利要求1所述的使用碳酸镧进行核酸分离富集的方法，其特征在于，步骤3) 中所述缓冲溶液二为氨羧配合剂或磷酸盐缓冲溶液，优选为磷酸钠、磷酸一氢钠、磷酸二氢 钠、磷酸钾、磷酸一氢钾、磷酸二氢钾、EDTA或EGTA缓冲溶液，最优选为磷酸二氢钠、磷酸二 氢钾或EDTA缓冲溶液；所述缓冲溶液二的pH值为5. 5~9. 0,优选为7. 0~9. 0,最优选为 8. 0 ~8. 5〇7. 根据权利要求1所述的使用碳酸镧进行核酸分离富集的方法，其特征在于，步骤4) 中所述稀酸优选使用乙酸、稀盐酸、稀硝酸、稀高氯酸，最优选使用稀盐酸、稀硝酸、稀高氯 酸。8. 根据权利要求1所述的使用碳酸镧进行核酸分离富集的方法，其特征在于，步骤4) 中所述稀酸的pH值为0~3,优选为0. 2~2. 5,最优选为0. 3~2. 0。9. 根据权利要求1所述的使用碳酸镧进行核酸分离富集的方法，其特征在于，步骤2)、 步骤3)和步骤4)中所述离心分离的转速为15000~25000r/min，优选为17000~23000r/ min，最优选为 18000 ~22000r/min。10. 碳酸镧在核酸分离富集中的应用，其特征在于，该应用采用如上述权利要求1至9 所述的使用碳酸镧进行核酸分离富集的方法。
【专利摘要】本发明公开了碳酸镧分离富集核酸的方法及用途，该方法将碳酸镧固体高速剪切处理，制备成碳酸镧纳米颗粒；在缓冲溶液一中，将上述碳酸镧纳米颗粒与核酸结合生成碳酸镧纳米颗粒-核酸复合物沉淀，从而与其它溶于缓冲溶液一的非核酸成分分离，再用缓冲溶液二进行洗脱，得到纯度或浓度较高的核酸，从而实现核酸的分离富集；使用过的碳酸镧纳米颗粒经稀酸淋洗后可回收再利用；本发明提供的碳酸镧分离富集核酸的方法操作简便、快速有效、成本低且绿色环保，适用于核酸的大规模批量分离富集，有利于实现核酸分离富集的自动化和机械化；另外，本发明提供的碳酸镧分离富集核酸的用途开辟了碳酸镧的新用途，为碳酸镧在其它领域的理论及实际应用研究奠定了基础。
【IPC分类】C12N15/10
【公开号】CN105087545
【申请号】CN201510482164
【发明人】康晓燕, 贺安琪, 徐怡庄
【申请人】宁海德宝立新材料有限公司
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2015年8月7日