一种同时制备葡糖乙酰香草苷、10-香荚酰梓醇与6’-o-反式桂皮酰梓醇的工艺方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种同时制备葡糖乙酰香草苷、10-香荚酰梓醇与6' -0-反式桂皮酰 梓醇的工艺方法，属于医药技术领域或药物化学领域。
【背景技术】
[0002] 天然植物药胡黄连，主产于喜马拉雅山脉，是中国、印度、尼泊尔等国的传统医药， 在印度传统医学中用于治疗肝、肺系疾病，在中国传统医学中用于除胃肠湿热，治湿热泻 痢。近代英国、美国、印度、中国的很多研究者研究证实胡黄连的主要药理作用有抗乙肝病 毒、肝脏保护、利胆、降血脂、降血压、降糖、抗炎、抗真菌、抗哮喘等作用。胡黄连中被提取 分离出多种化合物：环烯醚萜类化合物，主要有10-香荚酰梓醇(又名胡黄连苷II，英文名 PicrosideII)、6'-〇-反式桂皮酰梓醇(又名胡黄连苷I，英文名PicrosideI)等；苯乙 酮类化合物，主要有葡糖乙酰香草苷(又名草夹竹桃苷，英文名androsin)等；萌芦素类化 合物；苯乙基苷类化合物；丹宁类化合物等。葡糖乙酰香草苷具有抗哮喘、抗炎、抗氧化作 用，还可用于治疗败血症和动脉硬化；10-香荚酰梓醇具有高效的保肝利胆、抗过敏功效； 6' -0-反式桂皮酰梓醇具有抗糖尿病、调节血脂的作用。
[0003] 经检索有相关化合物的制备专利，如一种胡黄连苷I的制备方法(专利号： 200710164321. 5)，胡黄连普II单体的制备方法及其治疗乙型肝炎的药物剂型（专利号： 200410096006.X)，一种从胡黄连中提取分离纯化胡黄连苷I和胡黄连苷II的制备工艺 (专利号=201310618996. 8)，一种草夹竹桃苷的提纯工艺（专利号：201310373779. 7)，一种 制备高纯度6' -0-反式桂皮酰梓醇的方法(专利号=201510224528. 1)，高纯度6' -0-反 式桂皮酰梓醇的工业化制备（专利号=201510140963.6)。然而未见一套工艺同时制备葡糖 乙酰香草苷、10-香荚酰梓醇与6'-0-反式桂皮酰梓醇3种药用单体物质的专利，本发明可 实现一套工艺同时制备3种药用单体，原材料综合利用，且工艺简洁，能够节约成本，保护 环境，提高效率，可满足工业化大规模生产。
【发明内容】
[0004] 制备提取液： 胡黄连药材粉碎过30目筛，加8- 15倍乙醇加热回流提取。所用乙醇为75% - 95%之 间，分2次或3次回流，总共回流3- 5小时。提取液回收乙醇浓缩，浓缩后体积约为提取液 体积的1/8 -1/12。加入一定量水，置于低温条件下冷沉。水体积约为浓缩液体积的5 -16 倍，低温条件温度为〇- 7 °C，冷沉时间多8小时。
[0005] 吸附过滤柱： 前述冷沉后的提取液，通过硅胶柱吸附过滤柱。硅胶粒径100-400目。硅胶吸附过滤 柱主要起到过滤液体的作用，同时还能吸附杂质。硅胶用量不拘。
[0006] 大孔吸附柱： 将过滤后的液体上大孔树脂柱，水一醇梯度洗脱，分别收集葡糖乙酰香草苷、10-香荚 酰梓醇与6' -0-反式桂皮酰梓醇集中的部分。葡糖乙酰香草苷集中部分挥干乙醇，浓缩成 一定浓度的热水溶液，放冷析出后过滤，得纯度> 95%的葡糖乙酰香草苷。热水溶液的浓度 约为 8% - 20%。
[0007] 硅胶层析柱： 将10-香荚酰梓醇与6'-0_反式桂皮酰梓醇集中部分拌样后分别进行硅胶柱层析。拌 样硅胶与干浸膏的比例大于等于1:1 ;层析硅胶与干浸膏比例大于等于5:1 ;流动相为：石 油醚、环己烷、正戊烷、氯仿、乙酸乙酯、乙醇、甲醇中的一种或两种按一定比例配合使用。往 复栗输送液体，流动相流速：50-200ml/min，压力：0. 3-3MPa。双波长紫外检测器检测，检 测波长设为：254与282。
[0008] 分别收集10-香荚酰梓醇与6' -0-反式桂皮酰梓醇集中部分回收流动相，10-香 荚酰梓醇以适量热水一乙醇溶解，水一乙醇比例为0 :1-4:1，浓度约为8% - 20%，6'-0_反 式桂皮酰梓醇以适量热水一乙醇溶解，水一乙醇比例为1:1 一 1: 0，浓度约为5% - 35%。低 温条件下，析晶后过滤，得纯度> 95%的10-香荚酰梓醇与6' -0-反式桂皮酰梓醇。
【附图说明】 图1是胡黄连提取液高效液相色谱图； 图2是制备所得葡糖乙酰香草苷高效液相色谱图； 图3是制备所得6' -0-反式桂皮酰梓醇高效液相色谱图； 图4是制备所得10-香荚酰梓醇高效液相色谱图。
[0009] 具体实施例。
[0010] 实施例1。
[0011] 取粉碎且过30目筛的胡黄连药材500g，加95%乙醇5000ml加热回流提取5小时。 提取液回收乙醇浓缩，浓缩后体积约为提取液体积的1/8。加入浓缩液体积的10倍量水，置 于0- 7°C条件下冷沉，冷沉时间12小时。
[0012] 在层析色谱柱中装入5cm厚的300- 400目硅胶(硅胶上下有慢速滤纸，下滤纸起 过滤作用，上滤纸防止提取液将硅胶冲散乱）作为硅胶吸附过滤柱，前述冷沉后的提取液， 通过硅胶吸附过滤柱，得5800ml滤液备用，取滤液高效液相色谱法测定，如附图1所示。
[0013] 附高效液相色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶柱，4. 6mmX320mm;乙腈一水一乙 酸（25:75:0.5)为流动相；检测波长为27511111(下同） 。
[0014] 实施例2。
[0015] 将实施例1中过滤后的液体2900ml上大孔树脂柱，水一醇梯度洗脱，分别收集葡 糖乙酰香草苷、10-香荚酰梓醇与6' -0-反式桂皮酰梓醇集中的部分。
[0016] 葡糖乙酰香草苷集中部分挥干乙醇，浓缩成浓度为12%的热水溶液，放冷析出后 过滤，冷冻干燥，得纯度为99. 4%的葡糖乙酰香草苷9. 31g，高效液相色谱图如附图2所示。
[0017] 实施例3。
[0018] 将实施例1中过滤后的液体2900ml上大孔树脂柱，水一醇梯度洗脱，分别收集葡 糖乙酰香草苷、10-香荚酰梓醇与6' -0-反式桂皮酰梓醇集中的部分。
[0019] 葡糖乙酰香草苷集中部分挥干乙醇，浓缩成浓度为20%的热水溶液，放冷析出后 过滤，冷冻干燥，得纯度为95. 7%的葡糖乙酰香草苷11. 30g。
[0020] 实施例4。
[0021] 将实施例2中所收集的10-香荚酰梓醇、6' -0-反式桂皮酰梓醇集中部分分别拌 样后进行硅胶柱层析。拌样硅胶与干浸膏的比例为1:1;层析硅胶与干浸膏比例为5:1;流 动相为：乙酸乙酯；往复栗流速：80ml/min;压力：0? 7MPa。
[0022] 分别收集10-香荚酰梓醇与6' -0-反式桂皮酰梓醇集中部分回收流动相，10-香 荚酰梓醇以适量热水一乙醇溶解，水一乙醇比例为10:1，浓度为10% ;6' -〇-反式桂皮酰梓 醇以适量热水一乙醇溶解，水一乙醇比例为1:4,浓度约为8%。低温条件下，析晶后过滤，冷 冻干燥。得纯度99. 1%的6'-0_反式桂皮酰梓醇5. 55g，高效液相色谱图如附图3所示；得 纯度99. 7%的10-香荚酰梓醇8g，高效液相色谱图如附图4所示。
[0023] 实施例5。
[0024] 将实施例3中所收集的10-香荚酰梓醇、6' -0-反式桂皮酰梓醇集中部分分别拌 样后进行硅胶柱层析。拌样硅胶与干浸膏的比例为2:1 ;层析硅胶与干浸膏比例为7:1 ;流 动相为：乙酸乙酯：石油醚=50:1 ;往复栗流速：120ml/min;压力：0? 9MPa。
[0025]分别收集10-香荚酰梓醇与6' -0-反式桂皮酰梓醇集中部分回收流动相，10-香 荚酰梓醇以适量热水一乙醇溶解，水一乙醇比例为99:1，浓度为20% ;6' -〇-反式桂皮酰 梓醇以适量热水一乙醇溶解，水一乙醇比例为1:99,浓度约为30%。低温条件下，析晶后过 滤，冷冻干燥。得纯度96. 3%的6'-0-反式桂皮酰梓醇6. 08g，纯度97%的10-香荚酰梓醇 10. 45g〇
【主权项】
1. 一种同时制备葡糖乙酰香草苷、10-香荚酰梓醇与6' -O-反式桂皮酰梓醇的工艺方 法，其特征在于，具体方法如下： (1) .胡黄连药材粉碎过30目筛，75% -95%乙醇分2次或3次加热回流提取，提取液 浓缩，加入一定量水，低温下冷沉，冷沉后，通过硅胶吸附过滤柱过滤，过滤后的液体上大孔 树脂柱，水一醇梯度洗脱，分别收集葡糖乙酰香草苷、10-香荚酰梓醇与6' -0-反式桂皮酰 梓醇集中的部分； (2) .葡糖乙酰香草苷集中部分挥干乙醇，浓缩成一定浓度的热水溶液，放冷析出后过 滤，得纯度> 95%的葡糖乙酰香草苷； (3) . 10-香荚酰梓醇与6' -0-反式桂皮酰梓醇集中部分拌样后分别进行硅胶柱层析， 往复栗输送流动相洗脱，以双波长紫外检测器检测，分别收集10-香荚酰梓醇与6'-0_反式 桂皮酰梓醇集中部分，回收流动相，10-香荚酰梓醇以适量热水一乙醇溶解，6' -0-反式桂 皮酰梓醇以适量热水一乙醇溶解，放低温下，析晶后过滤，得纯度> 95%的10-香荚酰梓醇 与6' -〇-反式桂皮酰梓醇。2. 如权利要求1中所述，胡黄连药材提取液浓缩，浓缩液体积约为提取液体积的1/8- 1/12,浓缩液加入一定量水，低温下冷沉，胶柱吸附过滤柱过滤，加入水体积约为浓缩液体 积的5 -16倍，低温条件温度为0 - 7°C，冷沉时间多8小时，胶柱吸附过滤柱硅胶粒径 100-400 目。3. 如权利要求1中所述，葡糖乙酰香草苷集中部分浓缩成一定浓度的热水溶液，热水 溶液的浓度约为8% - 20%。4. 如权利要求1中所述，10-香荚酰梓醇与6' -0-反式桂皮酰梓醇集中部分拌样后分 别进行硅胶柱层析，流动相洗脱，拌样硅胶与干浸膏的比例大于等于1:1 ;层析硅胶与干浸 膏比例大于等于5:1 ;流动相为：石油醚、环己烷、正戊烷、氯仿、乙酸乙酯、乙醇、甲醇中的 一种或两种按一定比例配合使用；流动相流速50-200ml/min，压力0. 3 -3MPa ;检测器波 长设为254nm与280nm。5. 如权利要求1中所述，10-香荚酰梓醇以适量热水一乙醇溶解，水一乙醇比例为 0 :1-4:1，浓度约为8% - 20%，6'-0-反式桂皮酰梓醇以适量热水一乙醇溶解，水一乙醇比 例为1:1一 1:①，浓度约为5% - 35%。
【专利摘要】本发明涉及一种同时制备葡糖乙酰香草苷、10-香荚酰梓醇与6’-O-反式桂皮酰梓醇的工艺方法，以胡黄连药材为原料，经过乙醇提取，纯化精制，同时得到葡糖乙酰香草苷、10-香荚酰梓醇与6’-O-反式桂皮酰梓醇3种药用单体化合物。本发明的工艺方法可实现一次工艺过程得到3种药用单体化合物，工艺简洁，生产成本低，适用于工业化大规模生产。
【IPC分类】C07H15/203, C07H17/04, C07H1/08
【公开号】CN105111257
【申请号】CN201510599363
【发明人】张志东, 刘培冉, 贺灵剑, 杨涛, 刘文卉, 孙士青
【申请人】济南同生生物医药科技有限公司
【公开日】2015年12月2日
【申请日】2015年9月19日