从柿子中提取小分子量单宁的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物提取技术领域，具体设及一种从柿子中提取小分子量单宁的方 法。
【背景技术】
[0002] 柿子（PersimmonDiosp巧roskakiL)果肉中含量丰富的单宁类物质。研究表明， 柿子总酪具有很强的抗氧化性W及和蛋白质结合能力，具有抑制人淋己细胞白血病、降血 压、清除体内自由基W及明显抑制峻蛇、眼镜蛇、五步蛇毒液中多种酶类W及毒素的活性。 目前有报道称柿子提取物（有效成分为黄酬、=祗类和可水解单宁）对枯草芽抱杆菌表现 出了一定的耐药性，但耐药性并不稳定。但枯草芽抱杆菌完全不同于变形链球菌，且并未见 到柿子单宁可用于抑制变形链球菌的报道。
【发明内容】
[0003] 本发明要解决的技术问题是提供一种从柿子中提取小分子量单宁的方法，提取的 小分子量单宁可有效抑制变形链球菌，具有很好的防離齿效果。
[0004] 本发明提供的技术方案是从柿子中提取小分子量单宁的方法，包括W下步骤： 阳0化]1)将柿子去皮，破碎，加入乙醇提取，将提取液过滤，取滤液备用；
[0006] 。将滤液浓缩，加入95V%乙醇，放置过夜，离心取上清液；
[0007] 3)将上清液过AB-8大孔树脂，先用水洗柱至无色，然后用乙醇洗脱，收集乙醇洗 脱液；
[0008] 4)将乙醇洗脱液浓缩回收溶剂，得到浸膏，加水溶解，过滤，取滤液通过截留分子 量为3000~4000的中空纤维膜，收集透过液备用；
[0009] 5)将上述透过液通过截留分子量为500~600的中空纤维膜，收集浓缩液，干燥， 即为小分子量单宁粉末。
[0010] 步骤1)中，乙醇的体积浓度为70~80%，其加入量为柿子重量的10~20倍，在 60~80°C下提取1~3次，每次1~化。 W11] 步骤。中，乙醇的加入量为浓缩液的2~4倍。 阳01引步骤如中，水的加入量为浸膏重量的3~5倍。
[0013] 本发明提取得到的柿子小分子量单宁具有很好的抑制变形链球菌的效果，可用于 防離齿。
【具体实施方式】
[0014] W下具体实施例对本发明作进一步阐述，但不作为对本发明的限定。 阳〇1引实施例1
[0016] 1)将柿子去皮，破碎，加入柿子重量的10倍的70v%乙醇，在60°C下提取比，合并 提取液，过滤，取滤液备用； 阳017]。将滤液浓缩，加入95v%乙醇，乙醇的加入量为浓缩液的2倍，放置过夜，离心 取上清液；
[0018] 3)将上清液过AB-8大孔树脂，先用水洗柱至无色，然后用乙醇洗脱，收集乙醇洗 脱液；
[0019] 4)将乙醇洗脱液浓缩回收溶剂，得到浸膏，加水溶解，水的加入量为浸膏重量的3 倍，过滤，取滤液通过截留分子量为3000~4000的中空纤维膜，收集透过液备用；
[0020] 5)将上述透过液通过截留分子量为500~600的中空纤维膜，收集浓缩液，真空冷 冻干燥，即为小分子量单宁粉末。 阳OW 实施例2
[0022] 1)将柿子去皮，破碎，加入柿子重量的20倍的80v%乙醇，在80°C下提取3次，每 次化，合并提取液，过滤，取滤液备用；
[002引。将滤液浓缩，加入95v%乙醇，乙醇的加入量为浓缩液的4倍，放置过夜，离心 取上清液；
[0024]扣将上清液过AB-8大孔树脂，先用水洗柱至无色，然后用乙醇洗脱，收集乙醇洗 脱液；
[00对 4)将乙醇洗脱液浓缩回收溶剂，得到浸膏，加水溶解，水的加入量为浸膏重量的5 倍，过滤，取滤液通过截留分子量为3000~4000的中空纤维膜，收集透过液备用；
[00%] 5)将上述透过液通过截留分子量为500~600的中空纤维膜，收集浓缩液，真空冷 冻干燥，即为小分子量单宁粉末。
[0027] 实施例3
[0028] 1)将柿子去皮，破碎，加入柿子重量的15倍的75v%乙醇，在70°C下提取2次，每 次化，合并提取液，过滤，取滤液备用；
[0029]。将滤液浓缩，加入95v%乙醇，乙醇的加入量为浓缩液的3倍，放置过夜，离心 取上清液；
[0030]扣将上清液过AB-8大孔树脂，先用水洗柱至无色，然后用乙醇洗脱，收集乙醇洗 脱液；
[0031] 4)将乙醇洗脱液浓缩回收溶剂，得到浸膏，加水溶解，水的加入量为浸膏重量的4 倍，过滤，取滤液通过截留分子量为3000~4000的中空纤维膜，收集透过液备用；
[0032] 5)将上述透过液通过截留分子量为500~600的中空纤维膜，收集浓缩液，真空冷 冻干燥，即为小分子量单宁粉末。 阳〇3引对照实施例1
[0034] 1)将柿子去皮，破碎，加入柿子重量的15倍的75v%乙醇，在70°C下提取2次，每 次化，合并提取液，过滤，取滤液备用；
[00对。将滤液浓缩，加入95v%乙醇，乙醇的加入量为浓缩液的3倍，放置过夜，离心 取上清液；
[0036] 3)将上清液过AB-8大孔树脂，先用水洗柱至无色，然后用乙醇洗脱，收集乙醇洗 脱液；
[0037] 4)将乙醇洗脱液浓缩回收溶剂，真空冷冻干燥，即为小分子量单宁粉末。
[0038] 实验例（体外抑菌试验）
[0039] I、实验方法：
[0040] 1)分别取实施例1~3 W及对照实施例1的小分子量单宁粉末Ig粉碎后加IOml 无菌水配成混合溶液。
[0041] 2)抑菌片的制备：取无菌并干燥的滤纸片4片，每片分别滴加实施例1~3W及 对照实施例1制成的混合溶液20y1，然后将滤纸片平放于清洁的无菌平面皿内，开盖置溫 箱（37°C)中烤干，或置室溫下自然干燥后备用。阴性对照组抑菌片的制备：取无菌干燥滤 纸片，每片滴加无菌蒸馈水20y1，干燥后备用。
[00创如接种变形链球菌：用无菌棉拭子薩取浓度为5XIO5~5X106C化/ml变形链球 菌菌悬液，在营养琼脂培养基平板表面均匀涂抹3次，每涂抹一次，平板转动60°，最后将 棉拭子绕平板边缘涂抹一周，盖好平皿，置室溫干燥5min。 阳0创 4)抑菌片贴放海次贴放一个染菌平板，每个平板贴放实施例W及对照实施例的 4片抑菌片和1片阴性对照组抑菌片。用无菌綴子取样片贴放于平板表面，各样片中屯、之间 相距25mmW上，与平板的周缘相距15mmW上。贴放好后，用无菌綴子轻压样片，使其紧贴 于平板表面，盖好平皿，置于37°C溫箱内培养16~1她，用游标卡尺测量抑菌环的直径（包 括贴片）并记录，实验重复=次。 W44] 2、实验结果
[0045]
【主权项】
1. 从柿子中提取小分子量单宁的方法，其特征在于：包括以下步骤： 1) 将柿子去皮，破碎，加入乙醇提取，将提取液过滤，取滤液备用； 2) 将滤液浓缩，加入95v%的乙醇，放置过夜，离心，取上清液； 3) 将上清液过AB-8大孔树脂，先用水洗柱至无色，然后用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液； 4) 将乙醇洗脱液浓缩回收溶剂，得到浸膏，加水溶解，过滤，取滤液通过截留分子量为 3000~5000的中空纤维膜，收集透过液备用； 5) 将上述透过液通过截留分子量为500~800的中空纤维膜，收集浓缩液，干燥，即为 小分子量单宁粉末。2. 根据权利要求1所述的从柿子中提取小分子量单宁的方法，其特征在于：步骤1) 中，乙醇的体积浓度为70~80%，其加入量为柿子重量的10~20倍，在60~80°C下提取 1~3次，每次1~3h。3. 根据权利要求1所述的从柿子中提取小分子量单宁的方法，其特征在于：步骤2) 中，乙醇的加入量为浓缩液的2~4倍。4. 根据权利要求1所述的从柿子中提取小分子量单宁的方法，其特征在于：步骤3) 中，水的加入量为浸膏重量的3~5倍。
【专利摘要】本发明公开了一种从柿子中提取小分子量单宁的方法，包括以下步骤：1)将柿子去皮，破碎，加入乙醇提取，将提取液过滤，取滤液备用；2)将滤液浓缩，加入95V％乙醇，放置过夜，离心，取上清液；3)将上清液过AB-8大孔树脂，先用水洗柱至无色，然后用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；4)将乙醇洗脱液浓缩回收溶剂，得到浸膏，加水溶解，过滤，取滤液通过截留分子量为3000～5000的中空纤维膜，收集透过液备用；5)将上述透过液通过截留分子量为500～800的中空纤维膜，收集浓缩液，干燥，即为小分子量单宁粉末。本发明提取的小分子量单宁具有很好的抑制变形链球菌的作用，可用于防龋齿。
【IPC分类】C07H13/08, A61P1/02, A61P31/04, C07H1/08
【公开号】CN105218602
【申请号】CN201510759408
【发明人】文继承, 蒋元勇, 朱昂辉, 雍小军, 易华, 李丽金
【申请人】桂林茗兴生物科技有限公司
【公开日】2016年1月6日
【申请日】2015年11月10日