羊抗兔β防御素124多克隆抗体及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及生物领域，具体设及一种羊抗兔β防御素124多克隆抗体及其制备方 法和应用。
【背景技术】
[0002] β防御素124是一种在山羊附睾头高度特异性表达的防御素，需要有特定的抗体 研究其蛋白的表达定位特点及其生物学功能，然而，目前还未见有可用于绵羊和山羊的0 防御素124多克隆抗体。
【发明内容】
[0003] 为解决上述问题，本发明提供了一种羊抗兔β防御素124多克隆抗体及其制备方 法和应用。
[0004] 为实现上述目的，本发明采取的技术方案为： 阳00引羊抗兔β防御素124多克隆抗体，它的核巧酸序列为
[0006]TGTCTGCCTTATGGACTCAAGCCTGTCAAGACTGAAAAGGTCTAG。
[0007] 本发明还提供了上述抗兔β防御素124多克隆抗体的制备方法，包括如下步骤：
[0008] S1、将β防御素124蛋白Ν端55-68共14个氨基酸作为羊抗兔β防御素124多 克隆抗体的抗原表位，合成羊β防御素124多肤，纯度> 75% ;
[0009] S2、取步骤S1所得的1. 5mg羊β防御素124多肤偶联到KLH，脱盐后作为免疫原 备用；
[0010] S3、采用AbMax标准程序（42天），对免疫原KLH-CLPYGLKPVKTEKV多肤免疫兔子， 使用步骤S2所得的免疫原进行若干次加强免疫，多肤-BSA的多抗效价达到标准：血清滴度 > 1 : 50000,第28天每只放血20ml并加强免疫，若动物无异常情况，则在第42天终放血， 得羊抗兔β防御素124多克隆抗体。
[0011] 其中，所述步骤S1中的抗原表位的氨基酸序列为CLPYGLKPVKTEKV。
[0012] 上述抗体可W用于山羊和绵羊免疫巧光化学的检测，用于细胞免疫巧光化学时， 浓度为1 : 50-200。
【具体实施方式】
[0013] 为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，W下结合实施例对本发明进行进一步 详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用W解释本发明，并不用于限定本发 明。
[0014] 羊抗兔β防御素124多克隆抗体，它的核巧酸序列为
[0015] TGTCTGCCTTATGGACTCAAGCCTGTCAAGACTGAAAAGGTCTAG。
[0016] 本发明还提供了上述抗兔β防御素124多克隆抗体的制备方法，包括如下步骤：
[0017]S1、将β防御素124蛋白Ν端55-68共14个氨基酸作为羊抗兔β防御素124多 克隆抗体的抗原表位，抗原表位的氨基酸序列为CLPYGLKPVKTEKV，合成羊β防御素124多 肤，纯度> 75% ;
[0018] S2、取步骤S1所得的1. 5mg羊β防御素124多肤偶联到KLH，脱盐后作为免疫原 备用；
[0019]S3、采用AbMax标准程序（42天），对免疫原KLH-CLPYGLKPVKTEKV多肤免疫兔子， 使用步骤S2所得的免疫原进行若干次加强免疫，多肤-BSA的多抗效价达到标准：血清滴度 > 1 :50000,第28天每只放血20ml并加强免疫，若动物无异常情况，则在第42天终放血， 得羊抗兔β防御素124多克隆抗体。
[0020] 上述抗体可W用于山羊和绵羊免疫巧光化学的检测，用于细胞免疫巧光化学时， 浓度为1 : 50-200。
[0021]ELISA检测抗血清效价：
[0022] 将0. 5mg0防御素124多肤偶联到BSA，脱盐后作为检测抗原备用。在免疫后的 第25天取血，用β防御素124多肤和多肤-BSA包板（lOOng/well)，进行ELISA评价，多 肤-BSA的多抗血清效价大于1 : 50000，ProteinG纯化抗体识别肤-BSA滴度达0. 00加g/ mlο 阳023] 多克隆抗体亲和纯化与评价
[0024]用Imgβ防御素124多肤制备免疫亲和柱，选择信号较好的兔血，进行免疫亲和纯 化10-30ml血清，获得1~3mg免疫亲和纯化抗体，用β防御素124多肤和多肤-BSA包板 (lOOng/well)，通过化ISA初步评价免疫亲和纯化后抗体效价，亲和纯化抗体识别肤-BSA 滴度能达到0.000lug/ml。 阳〇2引实施例1
[00%] 用于山羊附睾头组织的免疫巧光化学，稀释比例1 : 100。绿色巧光处为β防御 素124强阳性信号区域。
[0027] 实施例2
[0028] 用于山羊附睾体组织的免疫巧光化学，稀释比例1 : 50。绿色巧光处为β防御素 124强阳性信号区域。
[0029]W上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人 员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可W作出若干改进和润饰，运些改进和润饰也应 视为本发明的保护范围。
【主权项】
1. 羊抗兔β防御素124多克隆抗体，其特征在于，它的核苷酸序列为TGTCTGCCTTATGG ACTCAAGCCTGTCAAGACTGAAAAGGTCTAGo2. 羊抗兔β防御素124多克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： 51、 将β防御素124蛋白Ν端55-68共14个氨基酸作为羊抗兔β防御素124多克隆 抗体的抗原表位，合成羊β防御素124多肽； 52、 取步骤S1所得的1.5mg羊β防御素124多肽偶联到KLH，脱盐后作为免疫原备用； 53、 采用AbMax标准程序（42天），对免疫原KLH-CLPYGLKPVKTEKV多肽免疫兔子，使 用步骤S2所得的免疫原进行若干次加强免疫，多肽-BSA的多抗效价达到标准：血清滴度 彡1 : 50000,第28天每只放血20ml并加强免疫，若动物无异常情况，则在第42天终放血， 得羊抗兔β防御素124多克隆抗体。3. 根据权利要求2所述的羊抗兔β防御素124多克隆抗体的制备方法，其特征在于， 所述步骤S1中的抗原表位的氨基酸序列为CLPYGLKPVKTEKV。4. 如权利要求1所述的羊抗兔β防御素124多克隆抗体的应用，其特征在于，该抗体 可以用于山羊和绵羊免疫荧光化学的检测。5. 如权利要求4所述的羊抗兔β防御素124多克隆抗体的应用，其特征在于，用于细 胞免疫荧光化学时，浓度为1 : 50-200。
【专利摘要】本发明公开了一种羊抗兔β防御素124多克隆抗体及其制备方法和应用，该抗体可以用于山羊和绵羊免疫荧光化学的检测，用于细胞免疫荧光化学时，浓度为1∶50-200。
【IPC分类】C07K16/06, G01N33/68, C07K16/18
【公开号】CN105254757
【申请号】CN201510744805
【发明人】张春香, 任有蛇, 杜海燕, 刘文忠, 郑亚琳, 张彩霞
【申请人】山西农业大学
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2015年10月31日