一种灵芝萜烯酮醇的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于天然药物化学领域，具体的说设及一种灵芝祗締酬醇的制备方法。
【背景技术】
[0002] 灵芝祗締酬醇为S祗类化合物，CAS号104700-97-2,分子式〔3化6〇2,分子量 438. 685,分子结构式如下：
[0003]
[0004] 灵芝=祗是灵芝的次级代谢产物，具有多种药理活性。文献报道，灵芝祗締酬醇在 体外细胞实验中都具有良好的抗肿瘤、美白、消炎、防止紫外伤害的作用。 阳〇化]通过文献检索，目前还没有发现灵芝祗締酬醇的规模化制备方法。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种灵芝祗締酬醇的制备方法，该方法包括如下步骤：
[0007] (1)提取和富集灵芝祗締酬醇：将灵芝子实体加入乙醇溶液加热提取，收集提取 液并浓缩；浓缩的提取液经大孔树脂乙醇梯度洗脱后，洗脱液进行减压浓缩，再经硅胶柱层 析获得富含灵芝祗締酬醇的组分；
[0008] (2)高速逆流色谱法分离灵芝祗締酬醇：用高速逆流色谱仪进行灵芝祗締酬醇分 离；然后用高效液相色谱法分析检测，收集、浓缩、干燥，分离得到灵芝祗締酬醇。
[0009] 具体的说，本发明的一种灵芝祗締酬醇的制备方法，包括如下步骤：
[0010] (1)提取和富集灵芝祗締酬醇：将灵芝子实体加入5-10倍体积的75-95%乙醇水 溶液加热至50-70°C提取，每次1-3小时，重复2-3次；收集每次的提取液并将提取液加热 减压浓缩，浓缩液经DlOl大孔树脂用50 %、60 %、70 %、80 %、90 %、95 %乙醇依次梯度洗 脱，每个梯度用3-5倍体积的溶液洗脱；得到的洗脱液分别减压浓缩，然后合并95 %和90 % 洗脱组分，过正相硅胶柱层析（100-200目），氯仿与甲醇（氯仿：甲醇=100:0-7:3(体积 比））梯度洗脱，每份收集1000ml，共收集92个流份；根据薄层层析CTLC)检测结果合并相 似流份，其中46-52流份（氯仿：甲醇=98:2洗脱）中富含灵芝祗締酬醇；
[0011] (2)高速逆流色谱法分灵芝祗締酬醇：溶剂体系由正己烧、乙酸乙醋、甲醇、水组 成，按10-14 :22-26 :16-22 :7-11体积比混合，取上相做固定相，下相为流动相，将富含灵芝 祗締酬醇的流份（46-52流份）用下相溶解并进样，转速700-1000;rmp，流速为l-3ml/min， 每4~IOmL收集为一个馈分；然后用高效液相色谱法分析检测各试管收集液成分，按不同 成分收集、浓缩、干燥，并与灵芝祗締酬醇标准品作对比，确定分离得到灵芝祗締酬醇。
[0012] 高速逆流色谱是一种无固相载体的连续液-液分配色谱技术，与传统的色谱技术 相比具有很多优势，利用该色谱技术来制备灵芝=祗化合物，不需固态支持物作载体，不存 在不可逆吸附，灵芝=祗的分离效率高、回收率高、分离时间短，此外，在制备过程中，样品 分解率较低；溶剂流失也较少，是一种经济实用获得灵芝=祗化合物的方法。
[0013] 采用本发明的方法制备灵芝祗締酬醇，成本低，污染小，操作简单，且灵芝祗締酬 醇的得率、纯度高。
【附图说明】：
[0014] 图1为实施例1的高速逆流分离谱图
[0015] 图2为实施例1中获得的灵芝祗締酬醇的高效液相谱图
[0016] 图3为实施例2的高速逆流分离谱图
[0017] 图4为实施例2中获得的灵芝祗締酬醇的高效液相谱图
【具体实施方式】
[0018] 供试子实体：沪农灵芝1号GanodermaIucidum,由上海市农业科学院食用菌研究 所提供。
[0019] 灵芝祗締酬醇标准品购自国家标准物质标准样品信息中屯、。
[0020] D-IOl大孔树脂，净品级，天津海光化工有限公司。
[0021] 正相硅胶（100-200目），青岛海洋化工厂。 阳〇巧薄层层析（TLC)板腿GF2M):烟台汇友硅胶开发有限公司。
[0023] 其余试剂为普通市售产品。
[0024] 中试提取设备：200化提取罐，江苏天宇机械有限公司。 阳0巧]2化旋转蒸发仪：BC-R2001，上海贝凯生物化工设备有限公司；配用甜B-B95型循 环水式多用真空累，郑州长城科工贸有限公司。
[00%] 高速逆流色谱仪购自上海同田生物技术股份有限公司，仪器型号为：T邸-300B。
[0027] 高效液相色谱仪为Waters公司产品，仪器型号为2695-717-600E。 阳02引 实施例1 :
[0029] 将50kg灵芝子实体切片，投料进入中试提取设备中，加入8倍体积的87%乙醇水 溶液提取2次，第一次化，第二次比。提取溫度均为65°C。将两次的提取液合并，在蒸煮罐 中加热蒸煮浓缩后再用WL旋蒸仪减压加热浓缩，获得灵芝子实体提取物。
[0030]将灵芝子实体提取物过大孔树脂D101，用50%、60%、70%、80%、90%、95%乙醇 依次梯度洗脱，洗脱液分别减压浓缩，然后合并95%和90%洗脱组分（共194g)，过正相娃 胶柱层析（100-200目，2200g)，氯仿：甲醇（100:0-7:3)梯度洗脱，每份收集1000ml，共收 集92个流份。根据薄层层析（TLC)检测结果合并相似流份，其中46-52流份（氯仿：甲醇 = 98:2洗脱）中富含灵芝祗締酬醇。 阳〇3U 取正己烧、乙酸乙醋、甲醇、7心按12 :24 :18 :9的体积比混合，充分分层后，取上相 做固定相，注满高速逆流色谱管后，开转主机，转速9(K)巧m，同时累入下相做流动相，流速为 2ml/min，用流动相溶解样品500mg，待出口处流出流动相且系统稳定后，由进样阀进样，紫 外检测器在线监测，每8ml收集为一个馈分。HPLC分析检测分离情况，并与灵芝祗締酬醇标 准品作对比，确定收集合并灵芝祗締酬醇的馈分，浓缩干燥，用高效液相面积归一化法测得 纯度为90. 9 %的灵芝祗締酬醇52.Img。 阳03引 实施例2 :
[0033] 将50kg灵芝子实体切片，投料进入中试提取设备中，加入8倍体积的87%乙醇水 溶液提取2次，第一次化，第二次比。提取溫度均为65°C。将两次的提取液合并，在蒸煮罐 中加热蒸煮浓缩后再用WL旋蒸仪减压加热浓缩，获得灵芝子实体提取物。
[0034] 将灵芝子实体提取物过大孔树脂D101，用50%、60%、70%、80%、90%、95%乙醇 依次梯度洗脱，洗脱液分别减压浓缩，然后合并95%和90%洗脱组分（194g)，过正相硅胶 柱层析（100-200目，2200g)，氯仿：甲醇（100:0-7:3)梯度洗脱，每份收集1000ml，共收集 92个流份。根据薄层层析（TLC)检测结果合并相似流份，其中46-52流份（氯仿：甲醇= 98:2洗脱）中富含灵芝祗締酬醇。 阳03引取正己烧、乙酸乙醋、甲醇、水，按12 :24 :20 :9的体积比混合，充分分层后，取上相 做固定相，注满高速逆流色谱管后，开转主机，转速9(K)巧m，同时累入下相做流动相，流速为 2ml/min，用流动相溶解样品200mg，待出口处流出流动相且系统稳定后，由进样阀进样，紫 外检测器在线监测，每8ml收集为一个馈分。HPLC分析检测分离情况，并与灵芝祗締酬醇标 准品作对比，确定收集合并灵芝祗締酬醇的馈分，浓缩干燥，用高效液相面积归一化法测得 纯度为92. 1 %的灵芝祗締酬醇17. 5mg。
【主权项】
1. 一种灵芝萜烯酮醇的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤： (1) 提取和富集灵芝萜烯酮醇：将灵芝子实体加入乙醇溶液加热提取，提取液浓缩；浓 缩液进行大孔树脂乙醇梯度洗脱，洗脱液进行减压浓缩，再经硅胶柱层析获得富含灵芝萜 烯酮醇的组分； (2) 高速逆流色谱法分离灵芝萜烯酮醇：用高速逆流色谱仪进行灵芝萜烯酮醇分离； 然后用高效液相色谱法分析检测，收集、浓缩、干燥，得到灵芝萜烯酮醇。2. 根据权利要求1所述的灵芝萜烯酮醇的制备方法，其特征在于该方法包括如下步 骤： (1) 提取和富集灵芝萜烯酮醇：将灵芝子实体加入5-10倍75-95 %乙醇溶液加热 50-70°C提取，每次1-3小时，重复2-3次。将提取液加热减压浓缩，浓缩液经过D101大孔树 脂用50 %、60 %、70 %、80 %、90 %、95 %乙醇依次梯度洗脱，每个梯度用3-5倍溶液体积洗 脱。将洗脱液分别减压浓缩，然后将95%和90%洗脱组分合并，过正相硅胶柱层析100-200 目，氯仿与甲醇梯度洗脱，每份收集l〇〇〇ml，共收集92个流份。根据薄层层析检测结果合并 相似流份，其中46-52流份中富含灵芝萜烯酮醇； (2) 高速逆流色谱法分离灵芝萜烯酮醇：溶剂体系由正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水组成， 按10-14 :22-26 :16-22 :7-11体积比混合，取上相做固定相，下相为流动相，将富含灵芝萜 稀酮醇的流份，46-52流份，用下相溶解并进样，转速700-1000rmp，流速为l-3ml/min，每 4~10mL收集为一个馏分；然后用高效液相色谱法分析检测各试管收集液成分，按不同成 分收集、浓缩、干燥，分离得到灵芝萜烯酮醇。
【专利摘要】本发明公开了一种灵芝萜烯酮醇的制备方法，该方法包括步骤；(1)提取和富集灵芝萜烯酮醇：将灵芝子实体加入乙醇溶液加热提取，提取液浓缩；浓缩液经大孔树脂乙醇梯度洗脱吸附后，进行减压浓缩，再过柱层析获得富含灵芝萜烯酮醇的组分；(2)高速逆流色谱法分离灵芝萜烯酮醇：用高速逆流色谱仪进行灵芝萜烯酮醇分离；然后用高效液相色谱法分析检测，收集、浓缩、干燥，分离得到灵芝萜烯酮醇。本发明的一种灵芝萜烯酮醇的制备方法操作简单，污染小，成本低，灵芝萜烯酮醇的得率、纯度高。
【IPC分类】C07J9/00
【公开号】CN105294802
【申请号】CN201510793776
【发明人】冯娜, 张劲松, 田振, 唐庆九, 冯杰, 杨焱, 唐传红, 魏雨恬
【申请人】上海市农业科学院
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2015年11月17日