一种藤黄微球菌及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于微生物及色素提取领域，特别涉及一种藤黄微球菌及其应用。
【背景技术】
[0002] 随着现代社会整体生活水平的提高，人们对健康更加关注，天然色素以其安全、 绿色、无毒、保健而备受青睐。目前，世界上天然色素的获取主要有3条途径：一是直接提 取，二是人工合成，三是利用生物技术生产。工业、食品、纺织等行业的色素基本上是由植 物提取出来，发酵生产红曲色素、类胡萝卜素等已成为现实。微生物的生长周期一般为1-3 天，而且不受环境因素的影响，随时随地都可以生产，提取工艺比较简单，产品质量能够 保证，利用微生物生产色素可以很好地解决上述问题。
【发明内容】
[0003] 本发明所要解决的技术问题是提供一种藤黄微球菌及其应用，该藤黄微球菌的菌 株发酵生产黄色素，反应条件温和，需要成本低，对环境友好。
[0004]本发明的一种藤黄微球菌（Micrococcusluteus)4087-1，16SrRNA序列为：
[0005] GCTTGCTGGGTGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGAGTAACCTGCCCTTAACTCTGGGATAA GCCTGGGAAACTGGGTCTAATACCGGATAGGAGCGTCCACCGCATGGTGGGTGTTGGAAAGATTTATCGGTTTTGGA TGGACTCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGTG ACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCA AGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGTAGGGAAGAAGCGAAAG TGACGGTACCTGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCGAGCGTTATCC GGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGTTTGTCGCGTCTGTCGTGAAAGTCCGGGGCTTAACCCCGGATCTG CGGTGGGTACGGGCAGACTAGAGTGCAGTAGGGGAGACTGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGGAATGCGCA〇
[0006] 所述微球菌单个、成双、四联排列或呈立体包裹状不规则；菌落直径为1. 0~1. 5 微米，菌落呈金黄色，圆形，突起，湿润，闪光，全缘，呈金黄色，革兰氏染色呈阳性。
[0007] 所述藤黄微球菌应用于产黄色素。
[0008] 所述产黄色素的方法包括：将藤黄色微球菌接种于pH为7. 0的YH)液体培养基， 30°C，190rpm培养24h，将菌液离心后用热碱法提取，再经浓缩可得黄色素干粉提取物。
[0009] 所述YPD液体培养基的组成为1 %YeastExtract(酵母膏），2%Peptone(蛋白 胨），2 %Dextrose(glucose)(葡萄糖）。
[0010] 所述浓缩为放置于液氮中10min，再置于冻干机3天。
[0011] 本发明的藤黄微球菌（Micrococcusluteus) 4087-1菌株已于2015年10月19日 保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，北京市朝阳区北辰 西路1号院3号，中国科学院微生物研究所），保藏号为CGMCCNo. 11518,建议分类命名为： 藤黄微球菌（Micrococcusluteus)。
[0012] 根据BLAST聚类分析及形态学鉴定结果，确定微生物为藤黄微球菌属 (Micrococcusluteus)，经试验证明可产黄色素。
[0013] 测定菌株的16SrRNA部分序列，进行系统发育学分析。
[0014] 本发明培养并研究能产出黄色素的菌种，通过改变实验条件，摸索其最佳发酵工 艺，提取色素并进行试验。
[0015] 有益效果
[0016] 本发明利用该菌株发酵生产黄色素，反应条件温和，需要成本低，对环境友好。
【附图说明】
[0017] 图1为实施例1中菌落形态图⑷和细胞形态图（B);
[0018] 图2为实施例1中菌株16SrRNA序列系统发育树；
[0019] 图3为实施例1中DNA凝胶电泳图。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人 员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定 的范围。
[0021] 实施例1
[0022] 新菌株藤黄微球菌（Micrococcusluteus)，已保藏在中国微生物菌种保藏管理委 员会普通微生物中心，其保藏号是：CGMCCNo. 11518。
[0023] 菌种来源：上海土壤分离。
[0024] 菌种鉴定：
[0025] (1) 16SrRNA的基因扩增
[0026]在冰上建立PCR体系：ForwardP2μ1，ReverseP2μ1，10*Buffer5μ1， Mg2+3μ1，ddH2035. 5μ1，dNTP1μ1，模板DNA用枪头挑取菌落，Taq(λ5μ1。PCR程序： 94°C4min(预变性）；94°C30s(变性），53°C30s(退火），72°C90s(延伸），循环 32 次； 72°C7min(延伸）。将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。
[0027]引物序列分别为：
[0028]SSUrRNA
[0029]BSF8/205'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3' 61. 0°CPosition8-27
[0030]BSR1541/205'-AAGGAGGTGATCCAGCCGCA-3' 61. 0°CPosition1541-1522
[0031] PCR产物，120V恒压电泳，电泳结束后用EB染色20min，即可在紫外成像系统中观 察拍照。
[0032] (2)所得序列的分析
[0033] DNA凝胶电泳：
[0034] 除1号孔以外，均有明显清晰条带，DNA分子量约为15kb。
[0035]DNA凝胶电泳图见图3。
[0036] 将有条带的PCR产物进行基因测序，测序结果：
[0037] GCTTGCTGGGTGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGAGTAACCTGCCCTTAACTCTGGGATAA GCCTGGGAAACTGGGTCTAATACCGGATAGGAGCGTCCACCGCATGGTGGGTGTTGGAAAGATTTATCGGTTTTGGA TGGACTCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGTG ACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCA AGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGTAGGGAAGAAGCGAAAG TGACGGTACCTGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCGAGCGTTATCC GGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGTTTGTCGCGTCTGTCGTGAAAGTCCGGGGCTTAACCCCGGATCTG CGGTGGGTACGGGCAGACTAGAGTGCAGTAGGGGAGACTGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGGAATGCGCA
[0038] 将序列与BLAST网站中进行序列比对，查找到其菌属。
[0039] 该菌为放线菌门（Actinobacteria)，微球菌属，Micrococcusluteus，是革兰氏阳 性菌。
[0040] 菌株产色素工艺：将菌种接种于pH为7.0的Yro液体培养基，30°C，190rpm培 养24h，取5ml发酵液离心得菌体，加入5ml，0.lmol/1的Na0H，50°C剧烈搅拌25min。以 5000rpm，lOmin离心，取上清，将离心后的菌体重复之前的步骤直至菌体发白。将用碱提取 法处理后得到的黄色上清液倒在离心管中，放置于液氮中lOmin，再置于冻干机3天，得到 黄色素干粉粗提物。
【主权项】
1. 一种藤黄微球菌，其特征在于，保藏号为CGMCC No.11518,其16SrRNA序列为： GCTTGCTGGGTGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGAGTAACCTGCCCTTAACTCTGGGATAAGC CTGGGAAACTGGGTCTAATACCGGATAGGAGCGTCCACCGCATGGTGGGTGTTGGAAAGATTTATCGGTTTTGGAT GGACTCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGTGA CCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAA GCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGTAGGGAAGAAGCGAAAGT GACGGTACCTGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCGAGCGTTATCCG GAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGTTTGTCGCGTCTGTCGTGAAAGTCCGGGGCTTAACCCCGGATCTGC GGTGGGTACGGGCAGACTAGAGTGCAGTAGGGGAGACTGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGGAATGCGCA〇2. -种如权利要求1所述的藤黄微球菌的应用，其特征在于，应用于产黄色素。3. 根据权利要求2所述的一种藤黄微球菌的应用，其特征在于，所述产黄色素的方法 包括： 将藤黄色微球菌接种于pH为7. 0的Yro液体培养基，30°C，190rpm培养24h，将菌液离 心后用热碱法提取，再经浓缩可得黄色素干粉提取物。4. 根据权利要求3所述的一种藤黄微球菌的应用，其特征在于，所述浓缩为放置于液 氮中lOmin，再置于冻干机3天。
【专利摘要】本发明涉及一种藤黄微球菌及其应用，保藏号为CGMCC？No.11518。所述微球菌应用于产黄色素，方法包括：将微球菌接种于pH为7.0的YPD液体培养基，30℃，190rpm培养24h，将菌液离心后用热碱法处理，再经浓缩可得黄色素干粉提取物。本发明利用该菌株发酵生产黄色素，反应条件温和，需要成本低，对环境友好。CGMCC No.1151820151019
【IPC分类】C12R1/265, C12N1/20, C12P1/04
【公开号】CN105349466
【申请号】CN201510864016
【发明人】曹张军, 索锦惠, 沈玲玲, 秦春萍, 顾鸿倩
【申请人】东华大学
【公开日】2016年2月24日
【申请日】2015年12月1日