一种金枪鱼蛋白胨在大肠杆菌培养中的应用方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种大肠杆菌培养培养方法。
【背景技术】
[0002]随着生物发酵的要求日趋标准化、精细化，常规使用的植物及陆生动物蛋白胨逐渐显露弊端。因此，人们开始向生命的起源地一一海洋寻求蛋白资源的突破利用。我国各种水产品年产量可达5906万t (2012)，占全球总量3.67%，居世界首位。鱼类副产物占鱼体总重的40%?60%，其特点之一是水分含量很高，极易腐败变质，需要及时利用，另一个特点是蛋白含量高，脂质含量少，以水产加工副产物蛋白作为蛋白质原料，生产试用于发酵工业生产、实验室微生物培养等的蛋白胨产品，具有供需连接、技术可行的有利条件，是一重要趋势。
【发明内容】
[0003]本发明要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供了一种稳定性好、氨基酸含量高的金枪鱼蛋白胨的制备方法。
[0004]本发明的目的通过以下技术方案来具体实现:
[0005]—种金枪鱼蛋白胨在大肠杆菌培养中的应用方法，将金枪鱼蛋白胨作为大肠杆菌的营养物质用于大肠杆菌的培养基中。
[0006]制备液体培养基时，该方法包括以下步骤:
[0007]1)称取金枪鱼蛋白胨，按照1.5-4.5%浓度溶解于纯水中，制得液体培养基；
[0008]2)加入酸碱稳定剂；
[0009]3)高温灭菌；
[0010]4)密封冷却至50-60°C，配用后采用常规微生物培养操作，进行大肠杆菌培养。
[0011]制备固体培养基时，该方法包括以下步骤:
[0012]1)称取金枪鱼蛋白胨，按照1.5-4.5%浓度溶解于纯水中；
[0013]2)加入酸碱稳定剂；
[0014]3)加入琼脂糖，得固体培养基；
[0015]4)高温灭菌；
[0016]5)培养基冷却至50_60°C，加入抗生素后倒板，配用后采用常规微生物培养操作，进行大肠杆菌培养。
[0017]优选的，所述金枪鱼蛋白胨:琼脂糖的重量比为(1.5-4.5): (1-2)。
[0018]优选的，所述酸碱稳定剂为0.1-0.5%质量浓度的磷酸二氢钾和/或磷酸氢二钾。
[0019]优选的，加入的酸碱稳定剂与金枪鱼蛋白胨的重量比为1:1。
[0020]优选的，所述高温灭菌，采用放入高压灭菌锅121°C灭菌20-30min。
[0021]优选的，所述高压灭菌锅的压力为0.1-0.15MPa。
[0022]本发明使用的金枪鱼蛋白胨以金枪鱼红肉为原料，通过双酶酶解及絮凝沉淀法制备而成，具体操作步骤如下:
[0023]1)剔除金枪鱼红肉中的鱼内脏、鱼骨等杂质，在室温下斩拌切碎，得到红肉肉糜；
[0024]2)在金枪鱼红肉肉糜中加入水，搅拌混匀后，升温至40?60°C，加氨水，调整pH值至6.0?8.5，加一号蛋白酶酶解0.5?2h，得到第一次水解液；
[0025]3)在第一次水解液中加磷酸5?20mL/kg，pH值调节至5.0?8.5，加入二号蛋白酶，继续搅拌酶解2.5?4.5h后，升温至70?100°C灭酶；
[0026]4)将灭活后的水解液用絮凝剂静置分层，取含有目标成分的上清液加入0.1% -10%。絮凝剂，低速搅拌；
[0027]5)离心沉淀不溶性杂质成分，取清液进行固形物检测；
[0028]6)对清液进行真空浓缩，再进行喷雾干燥和干粉收集。
[0029]本发明以金枪鱼蛋白胨为大肠肝菌的营养物质，具有以下好:
[0030]1.弥补了传统动物蛋白的原料价格高，资源少，致病风险等问题及植物蛋白氨基酸储存缺陷，培养效果不好等问题；
[0031]2.从鱼类加工厂的下脚料中提取蛋白成分，是对废弃物的利用，也是对环境在一定程度上的保护；
[0032]3.原料来源丰富易得，舟山地处沿海城市且有中国最大的舟山渔场，其鱼类产量具有一定优势，金枪鱼加工厂也有十二家之多，可见其金枪鱼来源之丰富；
[0033]4.利润更加丰厚，市场上金枪鱼的红肉需3000元/吨，而蛋白胨的含量为15%，我们对于蛋白胨的利用率为60% -90%，所以总的利用率为9% -14%，而市场上每公斤蛋白胨产品为60元，也就是说每吨的利润为2400-5100元。
【附图说明】
[0034]图1为金枪鱼蛋白胨固体培养基的DH5α大肠杆菌培养效果图。
【具体实施方式】
[0035]以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
[0036]实施例1:
[0037]1.制备金枪鱼蛋白胨:从鱼类加工厂废弃物中挑选金枪鱼红肉并斩拌，胰酶水解酶双酶解，骨胶絮凝，真空浓缩制粉；
[0038]2.使用喷雾干燥制备的蛋白胨粉按照2.5%浓度溶解于纯水中；
[0039]3.加入浓度为0.3%质量浓度的与蛋白胨等量磷酸二氢钾；
[0040]4.配合琼脂糖粉(蛋白胨粉:琼脂糖粉为2.5:1)混合制备固体培养基；
[0041 ] 5.经高压灭菌锅121 °C 30分钟灭菌，高压灭菌锅的压力为0.1-0.15MPa ；
[0042]6.培养基冷却至50-60°C，加入抗生素后倒板，进行大肠杆菌DH5 α涂板培养实验。
[0043]如图1所示，即为金枪鱼蛋白胨固体培养基的DH5 α大肠杆菌培养效果图。
[0044]实施例2:
[0045]1.制备金枪鱼蛋白胨:从鱼类加工厂废弃物中挑选金枪鱼红肉并斩拌，胰酶水解酶双酶解，骨胶絮凝，真空浓缩制粉；
[0046]2.使用喷雾干燥制备的蛋白胨粉按照4.5%浓度溶解于纯水中；
[0047]3.加入浓度为0.1%质量浓度的与蛋白胨等量磷酸氢二钾；
[0048]4.配合琼脂糖粉(蛋白胨粉:琼脂糖粉为4.5:1)混合制备固体培养基；
[0049]5.经高压灭菌锅121°C 30分钟灭菌，高压灭菌锅的压力为0.1-0.15MPa ；
[0050]6.培养基冷却至50-60°C，加入抗生素后倒板，进行大肠杆菌DH5 α涂板培养实验。
[0051]实施例3:
[0052]1.制备金枪鱼蛋白胨:从鱼类加工厂废弃物中挑选金枪鱼红肉并斩拌，胰酶水解酶双酶解，骨胶絮凝，真空浓缩制粉；
[0053]2.使用喷雾干燥制备的蛋白胨粉按照4.5%浓度溶解于纯水中；
[0054]3.加入浓度为0.5%质量浓度的与蛋白胨等量磷酸二氢钾与磷酸氢二钾按1:1的混合物；
[0055]4.配合琼脂糖粉(蛋白胨粉:琼脂糖粉为4.5:1)混合制备固体培养基；
[0056]5.经高压灭菌锅121 °C 30分钟灭菌，高压灭菌锅的压力为0.1-0.15MPa ；
[0057]6.培养基冷却至50-60°C，加入抗生素后倒板，进行大肠杆菌DH5 α涂板培养实验。
[0058]实施例4:
[0059]1.制备金枪鱼蛋白胨:从鱼类加工厂废弃物中挑选金枪鱼红肉并斩拌，胰酶水解酶双酶解，骨胶絮凝，真空浓缩制粉；
[0060]2.使用喷雾干燥制备的蛋白胨粉按照2.5%浓度溶解于纯水中，形成液体的培养基;
[0061]3.加入浓度为0.3%质量浓度的与蛋白胨等量磷酸二氢钾；
[0062]4.经高压灭菌锅121 °C 30分钟灭菌，高压灭菌锅的压力为0.1-0.15MPa ；
[0063]5.培养基冷却至50-60 °C，4进行大肠杆菌DH5 α涂板培养实验。
[0064]以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种金枪鱼蛋白胨在大肠杆菌培养中的应用方法，其特征在于:将金枪鱼蛋白胨作为大肠杆菌的营养物质用于大肠杆菌的培养基中。2.根据权利要求1所述的金枪鱼蛋白胨在大肠杆菌培养中的应用方法，其特征在于:该方法包括以下步骤: 1)称取金枪鱼蛋白胨，按照1.5-4.5%浓度溶解于纯水中，制得液体培养基； 2)加入酸碱稳定剂； 3)高温灭菌； 4)密封冷却至50-60°C，配用后采用常规微生物培养操作，进行大肠杆菌培养。3.根据权利要求1所述的金枪鱼蛋白胨在大肠杆菌培养中的应用方法，其特征在于:该方法包括以下步骤: 1)称取金枪鱼蛋白胨，按照1.5-4.5%浓度溶解于纯水中； 2)加入酸碱稳定剂； 3)加入琼脂糖，得固体培养基； 4)高温灭菌； 5)培养基冷却至50-60°C，加入抗生素后倒板，配用后采用常规微生物培养操作，进行大肠杆菌培养。4.根据权利要求3所述的金枪鱼蛋白胨在大肠杆菌培养中的应用方法，其特征在于:所述金枪鱼蛋白胨:琼脂糖的重量比为(1.5-4.5): (1-2)。5.根据权利要求2-4任一项所述的金枪鱼蛋白胨在大肠杆菌培养中的应用方法，其特征在于:所述酸碱稳定剂为0.1-0.5%质量浓度的磷酸二氢钾和/或磷酸氢二钾。6.根据权利要求2-4任一项所述的金枪鱼蛋白胨在大肠杆菌培养中的应用方法，其特征在于:加入的酸碱稳定剂与金枪鱼蛋白胨的重量比为1:1。7.根据权利要求2-4任一项所述的金枪鱼蛋白胨在大肠杆菌培养中的应用方法，特征在于:所述高温灭菌，采用放入高压灭菌锅121°C灭菌20-30min。8.根据权利要求7所述的金枪鱼蛋白胨在大肠杆菌培养中的应用方法，特征在于:所述高压灭菌锅的压力为0.1-0.15MPa。
【专利摘要】本发明公开了一种金枪鱼蛋白胨在大肠杆菌培养中的应用方法，将金枪鱼蛋白胨作为大肠杆菌的营养物质用于大肠杆菌的培养基中。本发明以金枪鱼蛋白胨为大肠肝菌的营养物质，弥补了传统动物蛋白的原料价格高，资源少，致病风险等问题及植物蛋白氨基酸储存缺陷和培养效果不好等问题。
【IPC分类】C12N1/20, C12R1/19
【公开号】CN105385641
【申请号】CN201510991966
【发明人】杨静文, 张燕, 何乔飞, 党慧, 宋鑫金, 李娟芳, 张依莎, 白炳波
【申请人】浙江海洋学院
【公开日】2016年3月9日
【申请日】2015年12月25日