一种用于原代肝组织细胞分离的灌流装置的制造方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种灌流装置，尤其涉及一种用于原代肝组织细胞分离的灌流装置。
【背景技术】
[0002]原代肝组织细胞为原代肝细胞及肝间充质细胞的来源。目前主要采用二步灌流法，将原代肝细胞及肝间充质细胞由原代肝组织细胞中分离。肝组织标本的分离灌流为分离过程的关键实验步骤。传统的分离灌流多采用手动的多点穿刺灌流法进行，需要准备大量的操作器械及耗材，且操作过程繁琐，不仅分离效率低，且容易造成人为污染。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于提供一种用于原代肝组织细胞分离的灌流装置。其能够进行肝组织标本的灌流，从而无污染、高效地分离肝组织细胞。
[0004]为达到上述目的，本发明的技术方案如下:
一种用于原代肝组织细胞分离的灌流装置，其特征在于包括:
富集容器，所述的富集容器中设有搅拌器；
消化液循环机构，包括输出管和输入管，所述的输出管和输入管的一端分别与所述富集容器的内腔相连，另一端分别连接有注射器；在输出管和输入管的管路中分别设有蠕动栗Ο
[0005]温度监控器，其能够保持富集容器内腔温度的恒定；
消化液过滤机构，包括与所述富集容器内腔相连的过滤管，所述的过滤管内设过滤网。
[0006]在使用时，将肝组织置于培养皿中，并该培养皿置于所述的输出管和输入管一端的注射器附近。在进行灌流时，首先在富集容器中加入前灌流液，将输入管出口端的注射器插入肝组织中，对肝组织进行单项灌流；单项灌流结束后，将消化液加入富集容器中，对肝组织进行多点穿刺灌流。灌注后的消化液通过输入管，回流至富集容器中。多点穿刺灌流结束后，将肝组织剪碎成组织碎片，并将其加入富集容器中。最后，将富集容器中的消化液和组织碎片输入过滤装置进行过滤。
[0007]优选地，所述的富集容器为双层容器。
[0008]优选地，所述温度监控器包括位于富集容器外壁上的热水输入阀门，位于富集容器上盖上的恒温控制电路以及位于所述富集容器内壁上的温度计。使用者可通过恒温控制电路设定温度；当富集容器内部的温度低于设定温度时，热水输入阀门自动将恒温热水输入富集容器的夹心层中，以保持温度的恒定。热水输入阀门同时也是夹心层中的水的出口。
[0009]优选地，所述的搅拌器为磁力搅拌器，其与富集容器上盖连接，且富集容器上盖上设有与所述的搅拌器相连的磁力均匀控制电路。所述的磁力均匀控制电路能够控制搅拌器均匀运转；使用者可根据具体需要，调整搅拌器的搅拌速度。
[0010]优选地，所述过滤管的管路中设有蠕动栗。
[0011]优选地，所述的富集容器由玻璃制成，以便于观察实验过程。
[0012]优选地，所述的输出管和所述的输入管的一端分别连接在富集容器内腔两侧壁的中部。
[0013]优选地，所述的过滤网为100目。
[0014]与现有技术相比，本发明具有以下技术优点:
1.使用机器，自动完成肝组织标本的灌流，避免了人工灌流中可能产生的污染，灌流分离的效率高。
[0015]2.使用内置磁力搅拌器进行混匀，简化了人工操作过程中使用摇床进行混匀的步骤；
3.使用温度监控系统对灌流中所使用的消化液进行温度控制，从而保证消化液中的酶活性不受损；
4.本发明拆装方便，各部件可拆卸并分别进行紫外线或高压灭菌；
5.本发明结构简单，组装方便，能够满足大部分实验室进行组织灌流的基本需求，实用性强。
【附图说明】
[0016]下文结合附图和具体实施例，对本发明进行进一步的说明。
[0017]图1为本发明的示意图。
[0018]附图标记:1_富集容器；2_富集容器上盖；3_输出管；4_输入管；5_热水输入阀门；6_温度计；7_搅拌器；8_过滤管；9_培养皿；10-过滤网；11_烧瓶；12-注射器；13_耐酸蠕动栗；21_磁力匀速控制按钮；22_恒温控制按钮。
【具体实施方式】
[0019]如图1所示，在一个优选的实施例中，本发明的灌流装置包括:
富集容器1，该富集容器1中设有搅拌器7。搅拌器7为磁力搅拌器，其与富集容器上盖2连接，用于控制磁力搅拌器的磁力均匀控制电路安装在富集容器上盖2内，磁力均匀控制电路的控制按钮21设在富集容器上盖2的上表面。富集容器由玻璃制成，规格为50mL，且为双层容器。富集容器的规格也可选用25mL或100mL。
[0020]消化液循环机构，包括输出管3和输入管4，输出管3和输入管4的入液端与富集容器1的内腔相连，出口端注射器12。输出管3和输入管4分别连接在富集容器1内腔两侧壁的中部。
[0021]温度监控器，其包括位于富集容器1外壁的热水输入阀门5，安装于富集容器上盖
2内的恒温控制电路以及位于富集容器1内壁上的温度计6 ;恒温控制电路的控制按钮22设在富集容器上盖2的上表面
消化液过滤机构，包括与富集容器1内腔相连的过滤管8，所述的过滤管内设100目过滤网10，其开口端接烧瓶11。
[0022]输入管4、输出管3和过滤管8均为软管，且在每个管路中连接一个耐酸蠕动栗13ο
[0023]本发明的具体使用方法如下:
(1)准备事项:将本发明的灌流装置置于超净台，进行紫外线外部灭菌；配置无菌前灌流液和消化液；准备温度在37°C的热水；收集大小为1.5cm3~2.5cm3的肝组织标本，清洗干净表明残余血迹。
[0024](2)在富集容器1中加入50~100mL前灌流液；打开输出管3及与其连接的蠕动栗13，将前灌流液由富集容器1中输出，并对置于培养皿9中的肝组织标本进行单项灌流；当标本颜色由暗红色变为灰白色时停止灌流。弃去培养皿9中的前灌流液，并更换输出管3。
[0025](3)将配置好的消化液加入富集容器1中；将预热好的37°C温水通过热水输入阀门5加入富集容器1的夹心层，按压控制按钮22，开启恒温控制器，保持富集容器1内腔的温度恒定在37 °C ;
(4)打开输出管3、输入管4及与其连接的蠕动栗13，将消化液由富集容器1中经输出管3输出，并对置于培养皿9中的肝组织样本脉管缓慢进行多点穿刺灌注。灌注后的消化液经输入管4回流至富集容器1中。按压控制按钮21，启动搅拌器7，匀速搅拌富集容器1中的消化液，并将转速保持在50rpm/min ；
(5)当肝组织标本灌流至疏松、失去弹性，表面呈龟背状裂隙时，停止灌流；将标本剪碎成2mm3大小的组织碎片，并使用巴氏吸管将其加入富集容器1中；停止循环管路上蠕动栗的工作；
(6)打开过滤管8和与其连接的蠕动栗13，缓慢输出富集容器1中的消化液。该消化液经100目过滤网10过滤后，进入烧瓶11。
[0026](7)收集过滤液，进行下一步工作。
[0027]本发明设计合理、便捷，无多余累赘功用，能够便捷有效地进行肝组织标本的灌流工作。为后续肝组织细胞的分离和提取提供良好的基础。
【主权项】
1.一种用于原代肝组织细胞分离的灌流装置，其特征在于包括: 富集容器(1)，所述的富集容器(1)中设有搅拌器(7)，顶部盖有富集容器上盖(2); 消化液循环机构，包括输出管(3 )和输入管(4 )，所述的输出管(3 )和输入管(4 )的一端分别与所述富集容器(1)的内腔相连，另一端分别连接有注射器(12);在输出管和输入管的管路中分别设有蠕动栗； 温度监控器，用于保持富集容器内腔温度的恒定； 消化液过滤机构，包括与所述富集容器(1)内腔相连的过滤管(8)，所述的过滤管(8)内设过滤网(10)。2.根据权利要求1所述的用于原代肝组织细胞分离的灌流装置，其特征在于:所述的富集容器(1)为双层容器。3.根据权利要求2所述的用于原代肝组织细胞分离的灌流装置，其特征在于:所述温度监控器包括位于所述富集容器(1)外壁上的热水输入阀门(5)，安装于所述富集容器上盖(2)内的恒温控制电路以及位于所述富集容器(1)内壁上的温度计(6)。4.根据权利要求1~3中任意一项所述的用于原代肝组织细胞分离的灌流装置，其特征在于:所述的搅拌器(7)为磁力搅拌器，其与富集容器上盖(2)连接，且所述的富集容器上盖(2)上安装有与所述的搅拌器(7)相连的磁力均匀控制电路(21)。5.根据权利要求4所述的用于原代肝组织细胞分离的灌流装置，其特征在于:所述过滤管(8)的管路中连接有蠕动栗(13)。6.根据权利要求5所述的用于原代肝组织细胞分离的灌流装置，其特征在于:所述的富集容器(1)由玻璃制成。7.根据权利要求6所述的用于原代肝组织细胞分离的灌流装置，其特征在于:所述的输出管(3)和所述的输入管(4)分别连接在富集容器(1)内腔两侧壁的中部。8.根据权利要求7所述的用于原代肝组织细胞分离的灌流装置，其特征在于:所述的过滤网(10)为100目。
【专利摘要】本发明公开了一种用于原代肝组织细胞分离的灌流装置，其特征在于包括：富集容器1，其中设有搅拌器7，顶部盖有富集容器上盖2；消化液循环机构，包括输出管3和输入管4，输出管3和输入管4的一端分别与所述富集容器1的内腔相连，另一端分别连接有注射器12；在输出管和输入管的管路中分别设有蠕动泵；温度监控器，用于保持富集容器内腔温度的恒定；消化液过滤机构，包括与所述富集容器1内腔相连的过滤管8，过滤管8内设过滤网10。本发明的用于原代肝组织细胞分离的灌流装置能够进行肝组织标本的灌流，从而无污染、高效地分离肝组织细胞。
【IPC分类】C12M1/02, C12M1/12, C12M1/00, C12M1/38, C12M1/34
【公开号】CN105420102
【申请号】CN201510871128
【发明人】刘思德, 庄康敏, 罗晓蓓, 李爱民, 余严军, 张菊嫦, 孟琰
【申请人】南方医科大学南方医院
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年12月2日