一种植物乳杆菌及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于微生物领域，是关于一种新发现的植物乳杆菌及其降解胆固醇功能的 作用。
【背景技术】
[0002] 植物乳杆菌与人类、动物的生活关系密切，是一种常见于奶油、肉类及许多蔬菜发 酵制品、青贮饲料中的乳酸菌，能通过胃并定植于肠道发挥有益作用，例如维持肠道内菌群 的平衡、促进营养物质吸收、缓解乳糖不耐症及抑制肿瘤细胞的形成等多种功能，目前研究 报道较多的应用领域包括食品、饲料、医疗保健、化妆品、美容、水产养殖、工农业生产、生物 防腐剂、益生菌制剂等等。
[0003] 本发明新发现的植物乳杆菌是从养殖水体的动植物体内提取的乳杆菌，经鉴定是 一种植物乳杆菌，最适生长温度为30~35，菌种为直或弯的杆状或成链状，最适pH6.5左右， 属于同型发酵乳酸菌。此菌与其他乳酸菌的区别在于此菌的活菌数比较高，能大量的产酸， 使水中的pH值稳定不升高；由于此菌是厌氧细菌(兼性好氧），在繁殖过程中能产出特有的 乳酸杆菌素，目前植物乳杆菌目前主要应用于改变各类型过敏症状，改善体质，排毒等医用 方面，在研究新发现的植物乳杆菌作用时，发现其对降解胆固醇具有很好的功效。
【发明内容】
[0004] 本发明发现了一种新的植物乳杆菌，并发现了其新的用途。
[0005] 具体地，本发明在养殖水体的动植物体内提取分离得到一种乳杆菌，经鉴定为一 种新的植物乳杆菌，其于2015年12月保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中 心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏号为CGMCC N0:11875。
[0006] 本发明的植物乳杆菌16S rDNA序列SEQ Nol所示。
[0007] 培养乳杆菌所用的是MRS培养基，培养基配方为：葡萄糖30g，蛋白胨10g，酵母粉 7 · 5g，无水乙酸钠5g，K2HP042g，硫酸镁0 · 8g，硫酸锰0 · 2g，柠檬酸二铵2g，PH7 · 0-7 · 5，培养 温度为37°C。
[0008] 菌种的形态
[0009] 植物乳杆菌在培养基上培养48h，生成的的菌落图如图1所示，菌落边缘整齐，表面 光滑、呈乳黄色;将单菌落取样在电子显微镜下(放大倍数为1800倍)进行观察，观察结果如 图2所示，细胞形态为杆状，革兰氏染色鉴定为革兰氏阳性，无芽孢和鞭毛。
[0010] 本发明进一步发现了该植物乳杆菌以及其对胆固醇的降解作用。
[0011] 更进一步地，本发明提出了上述植物乳杆菌在制备用于降解胆固醇的药物或保健 品上的应用。
【附图说明】
[0012] 图1为植物乳杆菌菌落图；
[0013] 图2为植物乳杆菌镜检图。
【具体实施方式】
[0014] 以下是通过具体实验详细说明了新发现的植物乳杆菌以及其对胆固醇的降解作 用。
[0015] 本发明在养殖水体的动植物体内提取分离得到一种乳杆菌，经鉴定为一种新的植 物乳杆菌，其于2015年12月保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏 地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏号为CGMCC N0: 11875〇
[0016] 本发明的植物乳杆菌16S r DNA序列如序列表所示。本发明的植物乳杆菌16SrDNA 序列如序列表所示。通过对该菌株的16SrDNA进行PCR扩增，回收扩增产物测序，序列与 GenBank数据库中已经登录的序列进行同源性比较，该菌株的16SrDNA序列与植物乳杆菌同 源性达99 %。
[0017] 培养乳杆菌所用的是MRS培养基，培养基配方为：葡萄糖30g，蛋白胨10g，酵母粉 7 · 5g，无水乙酸钠5g，K2HP042g，硫酸镁0 · 8g，硫酸锰0 · 2g，柠檬酸二铵2g，PH7 · 0-7 · 5，培养 温度为37°C。
[0018] 菌种的形态
[0019] 植物乳杆菌在培养基上培养48h，生成的的菌落图如图1所示，菌落边缘整齐，表面 光滑、呈乳黄色;将单菌落取样在电子显微镜下(放大倍数为1800倍)进行观察，观察结果如 图2所示，细胞形态为杆状，革兰氏染色鉴定为革兰氏阳性，无芽孢和鞭毛。
[0020] 本发明进一步发现了植物乳杆菌降解胆固醇的作用，并对其降解胆固醇的作用进 行了研究。
[0021] 首先配制含胆固醇MRS液体培养基:先用无水乙醇配制浓度为10g L-1的胆固醇溶 液，用孔径为〇.45μπι的微孔滤膜过滤除菌后，加入到含0.30%牛胆酸钠的灭菌MRS中，使胆 固醇最终浓度为l〇〇mg L-1。
[0022] 发酵液的制备:在MRS中连传3代，第3代培养物5000r min-1离心10min，弃上清液， 用灭菌生理盐水离心洗菌3遍，调菌悬液浓度为3\1090?1]1^-1。按2%的接种量接种到含 胆固醇的MRS液体培养基中，37 °C厌氧培养24h。同时保留未接菌的含胆固醇MRS培养基，5 °C 保存，作为空白对照。
[0023] 邻苯二甲醛工作液的配制：50mg邻苯二甲醛溶于100mL冰醋酸中，搅拌至完全溶 解，制成〇. 5g L-1的工作液。该溶液须使用当天配制。
[0024] 胆固醇含量测定:发酵液5000r min-1离心10min，保留发酵上清。沉淀菌体用与原 发酵液等量的生理盐水离心洗涤3遍，洗涤液保留。发酵上清液和菌体洗涤液中胆固醇含量 均用改良的Ophthalaldehyde法进行测定。
[0025] 具体方法如下:移取0.5mL样品于一洁净试管中，加入3mL 95%的乙醇和2mL 50% 的Κ0Η。振荡混匀，60°C水浴中皂化10min。冷却至室温后，加入5mL正己烷，完全混匀，萃取 lmin。再加入3mL蒸馏水混勾，室温下静置15min。待各项分离后，从己烧层准确吸取2.5mL至 另一干净试管中。60 °C水浴挥干正己烷，加入4mL新配制的邻苯二甲醛工作液，室温下显色 lOmin。再加入2mL浓硫酸，立即完全混勾，室温静置lOmin。在90min内测定550nm处的吸光 值。
[0026] 胆固醇脱除率可由以下公式得出：
[0027]脱除率=(1_发酵上清液吸光值/未接菌培养基吸光值）X 100%
[0028]计算得到乳杆菌降解胆固醇的脱除率为55.19%。
[0029]通过实验证明本发明的一种植物乳杆菌对胆固醇具有很好的降解作用，能够用于 医用方面或保健品方面。
【主权项】
1. 一种植物乳杆菌，其特征在于，所述植物乳杆菌于2015年12月14日保藏于中国微生 物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO. 11875。.2. 权利要求1所述的植物乳杆菌在降解胆固醇上的应用。3. 权利要求1所述的植物乳杆菌在制备用于降解胆固醇的药物或保健品上的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种植物乳杆菌，其保藏号为CGMCC？NO.11875。本发明进一步提出了所述的植物乳杆菌在降解胆固醇上的应用以及在制备用于降解胆固醇的药物或保健品上的应用。CGMCC NO:1187520151214
【IPC分类】A23L33/10, C12N1/20, A61K35/747, C12R1/25, A61P3/06
【公开号】CN105567601
【申请号】CN201610066292
【发明人】金雪霞, 路庆鹏, 陈家伟
【申请人】江苏绿科生物技术有限公司
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2016年1月29日