防治植物真菌病害的多粘类芽袍杆菌及其生产方法
【专利说明】
[0001]本发明属于生物农药技术领域。
【背景技术】
[0002]根据味精生产过程中废水所含污染物情况可分成三类:一是高浓度高酸度有机废水即离交尾液；二是其它中高浓度有机废水；三是不需处理直接外排的冷却降温水。
离交尾液是通过离子交换法提取谷氨酸后剩余的“废液”，它既含有丰富的有机质，还含有N、P、K等少量无机敖及其它微量元素，这些物质都可为微生物生长提供营养。其它中高浓度有机废水包括:淀粉废水、制糖废水、发酵洗灌废水、精制废水等。淀粉废水和制糖废水除了含有一定的有机污染物质外，还有一些悬浮物质；发酵洗灌废水与离交尾液所含成分基本相同，只是含量较低；精制废水有时呈酸性，有时呈碱性，有机物污染物质含量较高，这些有机废水也是微生物资源开发比较理想的营养来源之一。但是，这些废水如果得不到合理利用，不仅会对环境造成严重污染，而且使资源白白浪费掉。目前，众多味精废水处理技术大致分为两步，一是提取废水中的谷氨酸菌体单细胞蛋白，通过此步分离菌体，常用物化方法进行处理(如絮凝、离心等方法)；二是提取菌体后废液的处理，使其达到排放标准或处理后用于工厂回用，这也是众多味精废水处理技术所面临的关键问题，常采用生物处理方法(如厌氧发酵、生物膜法，SBR法等)。多粘类芽饱杆菌在自然界中分布广泛，是一种重要的生防菌，对多种植物真菌、细菌病害均有较好的防治作用。多粘类芽抱杆菌对动植物真菌、细菌病原物具有广谱抗性，利用大孔吸附树脂对多粘类抱杆菌产生的抗真菌活性物质的吸附、解吸性能，筛选出其最佳解吸剂，该活性物质对热、紫外线稳定，对胰蛋白酶、蛋白酶K有一定的耐受性，对氯仿部分敏感，对酸稳定，对碱敏感。可以作为微生物肥料菌剂中的一种成分分解秸杆，有效解决农业生产中一方面农业垃圾过多，污染水体和环境，处理困难，另一方面化肥，农药使用过多，土壤恶化的矛盾。
[0003]
【发明内容】
本发明的日的是提供一种能够在植物叶际与根际定植，并且对多种病原菌具有拈抗作用的生防菌一多粘类芽抱杆菌EBL — 06菌株，同时提供一种利用味精废水生产该生防菌剂的方法。本发明所提供的生防菌株是由我们实验室从小麦的叶面上分离筛选出来的。将其编号为EBL — 06，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为二零零八年二月二十六日，分类命名为多粘类芽抱杆菌。保藏编号为:cGMccN0.2377。该菌株具有下列性质:I菌落形态特征该菌株在PDA培养基上生长良好，单个菌落呈半玻璃珠状，边缘整齐，表面粘稠，与培养基结合紧密，菌落中心乳黄色。2菌体形态特征菌体杆状，革兰氏染色显阳性，芽抱端生，包囊膨大。3碳源利用能力可以利用碳源:Q —环式糊精；肝糖；D —葡糖胺酸；衣康酸；D —半乳糖酸Y —内醋；D —半乳糖醛酸；2 —环式糊精；肝糖；D —葡糖胺酸；衣康酸；D —半乳糖酸Y —内醋；D —半乳糖醛酸；2 —轻基苯甲酸；4一轻基苯甲酸山一精氨酸；L一天门冬酞胺山一丝氨酸；甘氨酞一L一谷氨酸；D—木糖山一甘露醇；苯乙胺。不可利用碳源:丙酮酸甲酷；D—纤维二糖；p—甲基一D—葡萄糖昔一赤醉糖醇；N —乙酞一 D葡萄糖氨；D，L-u 一磷酸甘油；u —丁酮酸；Y —经丁酸；L一苯丙氨酸山一苏氨酸；腐胺。对真菌拈抗能力菌株在PDA固体培养基上表现出对灰葡萄抱霉、黄瓜黑星病的病原菌原菌、木霉菌等的高效拈抗效果。5[0 021 J 2、液体种子制备:向高压灭菌的土显液体培养基中，接种多粘类芽抱杆菌，25— 35摄氏度培养，得到液体种子。4、液态发酵:向经过预处理的废水中接种5% (体积)的液体种子，于25— 35°C，通无菌空气培养24— 72小时。[O。2315、后处理:培养好的发酵液经细菌计数后，包装使用。
[0004]【具体实施方式】:由本发明技术方案生产的多粘类芽抱杆菌生防剂能够高效防治多种真菌类植物病害，而且无公害，生产成本低，并且有效地利用了味精废水。以下通过具体实施例详细说明本发明的实施，目的在于帮助读者更好地理解本发明的精神实质，但不作为对本发明实施范围的限定。实施例1:多粘类芽抱杆菌生物农药制备]种子培养基制备:称取200g 土豆，切碎，于儿自来水中煮沸30分钟，过滤除去残渣，加入20g葡萄糖，定容至IL,即得土豆培养基。分装入5个IL的三角瓶中，灭菌20min。发酵培养基制备:经过絮凝除去细菌蛋白的味精废水比加入1L自来水稀释，并用氢氧化钠调节pH至6.0。[O。25]液体种子制备:向土豆液体培养基中接种多粘类芽抱杆菌，于30°C，摇瓶，恒温摇床振荡培养24小时，得到液体种子。发酵产品:将上述发酵培养基装罐到1L的发酵罐中，121°C灭菌lOmin，按照5%的接种量接种液体种子，在30°C恒温，通无菌空气的条件下，发酵2至3天，取样计数后，无菌条件下分装。
【主权项】
1.一株具有防治植物病害作用的多粘类芽抱杆菌，其特征在于:该多粘类芽抱杆菌保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号:cGMcc N0.2377。2.权利要求1所述的多粘类芽抱杆菌，其特征在于:该菌株在POA培养基上生长良好，单个菌落呈半玻璃珠状，边缘整齐，表面粘稠，与培养基结合紧密，菌落中心乳黄色，菌体杆状，革兰氏染色显阳性，芽抱端生。3.用权利要求上所述多粘类芽抱杆菌来制备抗植物病害生防剂的生产方法，其特征在 于:在主要成分为味精废水的培养基中接种权利要求1所述的多粘类芽抱杆菌。4.权利要求3所述的生产方法，其特征在于:将味精废水用水稀释5— 15倍，调节 pH为5— 7，高压灭菌，接种权利要求1所述的多粘类芽抱杆菌，于25— 35°C，通无菌空气培养24— 72小时。
【专利摘要】本发明涉及株防治植物真菌病害的多粘类芽抱杆菌及其生产方法，属于生物农药技术领域。本发明采用的菌株是多粘类芽抱杆菌EBL一06菌株，分离自小麦叶面，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：cGMccNo．2377。该菌株可以防治植物多种真菌病害，提高作物产量c本发明利用味精废水来发酵多粘类芽抱杆菌，制备生防菌剂，该下艺生产的多粘类芽抱杆菌生防剂能有效防治多种植物真菌病害，并且生产成本低廉，操作简单，还可以有效利用味精废水，减少环境污染。
【IPC分类】A01N63/02, A01P3/00, C12R1/12, C12N1/20
【公开号】CN105586285
【申请号】CN201410572758
【发明人】孙婷婷
【申请人】孙婷婷
【公开日】2016年5月18日
【申请日】2014年10月24日