一种葡萄糖癸二酸二乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物纳米颗粒的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种葡萄糖癸二酸二乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物纳米颗粒的制备方法，包括：(1)将不同链长的二酸，醋酸乙烯酯，醋酸汞，醋酸铜混合烧瓶中，室温搅拌1～15min后加入浓硫酸，在50℃～70℃下恒温搅拌反应8h，加入无水醋酸钠中和浓硫酸，分离提纯，得到二酸二乙烯脂；(2)将上述二酸二乙烯脂与葡萄糖溶于无水吡啶中，加入碱性蛋白酶，分离提纯得到葡萄糖乙烯脂等步骤，本发明的方法操作简单、产物易处理且经济环保，本发明得到的纳米颗粒含有丰富的可反应亲水活性功能基团并且具有接近于体温的相变温度，提高了材料表面的特异性吸附并且改善材料表面的生物相容性的，应用前景广阔。
【专利说明】
一种葡萄糖癸二酸二乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物纳米颗粒的制备方法
技术领域
[0001]本发明属于有机纳米颗粒的制备领域，特别涉及一种葡萄糖癸二酸二乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物纳米颗粒的制备方法。
【背景技术】
[0002]糖与蛋白质，脂类和核酸一样，是构成生物体的重要成分。细胞膜表面的糖类参与了蛋白的靶向，细胞识别，抗体-抗原相互作用等重要生理过程。糖基化材料具有高的亲水性及抗非特异性蛋白质吸附以及高的生物相容性等特性，因此很广泛的用于蛋白质分离纯化，细菌的特异性捕捉，生物医用材料以及细胞的培养等方面，还可以制备表面功能化的分离膜。糖类可以和蛋白质直接进行特异性的识别，来完成生物信息的传递。因此，制备具有蛋白质特异性识别的糖基化材料，具有很广泛的应用前景。
[0003]N-异丙基丙烯酰胺由于分子内有亲水性的酰胺基和疏水性的异丙基，其均相聚合物具有较低的临界溶解温度(LCST)等良好的特性。由于其聚合物具有在32°C以上呈水不溶性这一特殊的溶解特性，正在开发用于制造某些感温性聚合物凝胶的原料。N-异丙基丙烯酰胺用通常的自由基聚合引发剂容易单独聚合，也容易共聚。因此，其成为当前热敏性高分子材料研究的热点。
[0004]纳米技术、计算机技术、基因工程技术被列为21世纪3大前沿科学技术。纳米技术这一被世人广泛看好的前沿科学，其最大价值在于能和不同学科或领域交叉，从而产生新的产业或者学科。纳米微球常称微球，包括纳米球和微米球，是目前最为重要的纳米技术产品之一，能广泛应用于生物制药、疾病诊断、环境监测、净化处理、液晶显示屏、化妆品、油漆涂料等众多领域。
[0005]利用静电电喷技术制备的含糖纳米颗粒具有后续研究蛋白质之间特异性吸附机理的潜力。
【发明内容】
[0006]本发明所要解决的技术问题是提供一种葡萄糖乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物纳米颗粒的制备方法，该方法操作简单、产物易处理且经济环保，该纳米颗粒含有丰富的可反应亲水活性功能基团并且具有接近于体温的相变温度，提高了材料表面的特异性吸附并且改善材料表面的生物相容性的同时，在相变特性的基础上可以有很多潜在的应用。
[0007]本发明是通过以下技术方案来实现的:
[0008]本发明公开了一种葡萄糖乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物纳米颗粒的制备方法，具体步骤如下:
[0009]I )、将不同链长的二酸，醋酸乙烯酯，醋酸汞，醋酸铜混合烧瓶中，室温搅拌I?15min后加入浓硫酸，在50°C?70°C下恒温搅拌反应8h，加入无水醋酸钠中和浓硫酸，分离提纯，得到不同链长的二酸二乙烯脂；
[0010]2)、将摩尔比为1-4:1的二酸二乙烯脂与葡萄糖溶于无水吡啶中，加入碱性蛋白酶，在40-60°C条件下反应3-5天，分离提纯，得到葡萄糖乙烯脂;其中碱性蛋白酶0.5-1.5g，无水吡啶的用量为50-100ml ；
[0011]3)、在上述葡萄糖乙烯脂中加入N-异丙基丙烯酰胺、引发剂和溶剂，然后在55-60°C氮气保护下搅拌反应3-8h，聚合反应结束后得到葡萄糖乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物；其中N-异丙基丙烯酰胺与葡萄糖乙烯脂的摩尔比为1-50:1，引发剂占葡萄糖乙烯脂和N-异丙基丙烯酰胺质量之和的0.2-2% ；
[0012]4)、将上述葡萄糖乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物和PLCL加入溶剂中，搅拌得葡萄糖乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物电喷液，然后进行电喷，干燥即得葡萄糖乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物纳米颗粒;其中葡萄糖乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物和PLCL之和占电喷液的质量分数为3-30%，葡萄糖乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物和PLCL的摩尔比为1:1。
[0013]作为进一步地改进，本发明所述步骤I)中不同链长的二酸是己二酸、壬二酸和癸二酸。
[0014]作为进一步地改进，本发明所述步骤I)中的二酸与醋酸乙烯酯的摩尔比为1:1?1:5。
[0015]作为进一步地改进，本发明所述步骤I)中的醋酸汞质量Ig?3g，浓硫酸体积为0.1-0.25mL0
[0016]作为进一步地改进，本发明所述步骤I)中的无水醋酸钠的质量为0.1?1.0g，过量的醋酸乙烯酯的除杂方式为旋转蒸发，提纯方式为硅胶层析柱(300?400目)。
[0017]作为进一步地改进，本发明所述步骤2)中分离提纯为:用硅胶层析柱分离提纯，洗脱剂为乙酸乙酯，展开剂为体积比为17:3:1的乙酸乙酯、甲醇和水的混合液，用I2显色。
[0018]作为进一步地改进，本发明所述步骤3)中引发剂为偶氮二异丁腈AIBN，溶剂为无水乙醇，葡萄糖乙烯脂和N-异丙基丙烯酰胺在无水乙醇溶液中的浓度之和为2-3mol/L，聚合反应结束后，将产物经3500D透析膜除去没反应的葡萄糖乙烯脂。
[0019]作为进一步地改进，本发明所述步骤4)中的溶剂为无水乙醇。
[0020]作为进一步地改进，本发明所述步骤4)中电喷工艺参数为:注射器规格为5mL，针头内径为0.4-0.7mm，喷出流速0.8_2mL/h，静电压10_18kV，接收屏采用铝箔接地接收，接受距离为10_20cm，采用正交方法调节电喷参数进行电喷。
[0021]作为进一步地改进，本发明所述步骤4)中干燥的温度为30_60°C，干燥时间为24-48h0
[0022]糖是生物分子中的一种，广泛存在于生物体内，是一类多羟基化合物，具有极强的亲水性，因此，把糖引入材料的表面，将有效改善材料表面的生物相容性。并且糖类可以和特定的凝集素发生相互识别，将有利于制备蛋白分离介质、细胞培养微载体、药物载体(缓释微球)、非病毒性基因转染载体等。
[0023]本发明将N-异丙基丙烯酰胺和葡萄糖乙烯脂共聚进行电喷，获得在纳米级葡萄糖乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物纳米颗粒。这种膜材料含有丰富的可反应亲水活性功能基团，提高了材料表面的非特异性吸附及改善材料表面的生物相容性，具有应用其做后续相关实验分析的潜力，并且可以和特定的凝集素发生相互作用，具有制备蛋白分离介质的潜质。由于葡萄糖乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物纳米颗粒具有可控的LCST值，具有实现药物的靶向释放，作为药物载体等应用潜力。
[0024]本发明的有益效果如下:
[0025](I)本发明采用水相沉淀聚合方法制备了葡萄糖乙烯脂共聚物，制备方法操作简单、产物易处理且经济环保；
[0026](2)本发明中N-异丙基丙烯酰胺共聚物纳米颗粒是一类比表面，高孔隙率的载体材料；
[0027](3)本发明中糖基化纳米纤维用于蛋白质的特异性识别，高效，快速，有利于研究糖类和蛋白质之间特异性识别的机理，并且可以多次重复使用，易于工业化生产；
[0028](4)本发明的方法操作简单、产物易处理且经济环保，本发明得到的纳米颗粒含有丰富的可反应亲水活性功能基团并且具有接近于体温的相变温度，提高了材料表面的特异性吸附并且改善材料表面的生物相容性的，应用前景广阔。
【附图说明】
[0029]图1为实施例1所得的温敏性含糖共聚物的红外表征图；
[0030]图2为实施例2所得的温敏性含糖共聚物的核磁表征图；
[0031 ]图3为实施例3所得的温敏性含糖共聚物的LCST值图表；
[0032]图4为实施例3所得的温敏性含糖共聚物纳米颗粒的扫描电镜照片(电喷电压为10kV，接收距离为15cm，喷射流速为1.0ml/h)o
【具体实施方式】
[0033]下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。实施例1
[0034](I)将I摩尔的己二酸，醋酸乙烯酯，Ig醋酸汞，微量醋酸铜混合于250mL烧瓶中，室温搅拌15min后加入0.2mL浓硫酸，在50 V?70 V下恒温搅拌反应Sh。反应完毕得到蓝色澄清溶液。反应液冷却后加入0.5g无水醋酸钠，充分震荡以除去其中的硫酸，静置过滤后旋转蒸发除去过量的醋酸乙烯酯。剩余溶液经硅胶层析柱(300?400目)分离提纯，得到己二酸二乙烯脂。
[0035](2)将己二酸二乙烯脂与葡萄糖按一定的比例(4:1，摩尔比)溶解在无水吡啶中，利用酶促合成技术合成葡萄糖乙烯脂。反应结束后，粗产物用硅胶层析柱分离提纯，洗脱剂为乙酸乙酯，展开剂为乙酸乙酯、甲醇和水(17:3:1，v/v/v)，用I2显色。将上述糖脂放于微量聚合管中，加入一定量的N-异丙基丙烯酰胺(与葡萄糖乙烯脂的摩尔比为7:1)，用偶氮二异丁腈(AIBN)(占葡萄糖乙烯脂和N-异丙基丙烯酰胺总质量的质量分数为2.0)作为引发剂，加入无水乙醇作溶剂(单体浓度为2.5mol/L无水乙醇)，密封，用油栗抽真空后通氮气，反复多次。将体系置于50-60°C氮气保护下搅拌反应6h，得葡萄糖乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物。
[0036](3)将一定质量的温敏性葡萄糖乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物和PLCL按照摩尔比为1:1加入无水乙醇中，共聚物中葡萄糖脂与NIPAM的摩尔比为1:5，搅拌数小时至完全溶解，静置数小时使电喷液中气泡完全消失，搅拌形成均一电喷液。
[0037](4)用注射器抽取温敏性含糖共聚物，固定于电喷装置上，控制喷出流速1.0ml/h，静电压10kV，接收屏采用铝箔接地接收，针头与接收屏的距离为10-20cm，采用正交方法(改变某一参数，固定其他的参数)调节不同电喷参数进行电喷，得到温敏性含糖共聚物纳米颗粒;放入真空干燥箱中30-60 0C恒温干燥36h ο其红外图谱如图1所示。
[0038]实施例2
[0039](I)将壬二酸二乙烯脂与葡萄糖按一定的比例(4:1，摩尔比)溶解在无水吡啶中，利用酶促合成技术合成葡萄糖乙烯脂。反应结束后，粗产物用硅胶层析柱分离提纯，洗脱剂为乙酸乙酯，展开剂为乙酸乙酯、甲醇和水(17:3:1，v/v/v)，用I2显色。将上述糖脂放于微量聚合管中，加入一定量的N-异丙基丙烯酰胺(与葡萄糖乙烯脂的摩尔比为7:1)，用偶氮二异丁腈(AIBN)(占葡萄糖乙烯脂和N-异丙基丙烯酰胺总质量的质量分数为2.0)作为引发剂，加入无水乙醇作溶剂(单体浓度为2.5mol/L无水乙醇)，密封，用油栗抽真空后通氮气，反复多次。将体系置于50-60°C氮气保护下搅拌反应6h。
[0040](2)将一定质量的温敏性葡萄糖乙烯脂共聚物和PLCL按照摩尔比为1:1加入无水乙醇中，共聚物中葡萄糖脂与NIPAM的摩尔比为1:20，搅拌数小时至完全溶解，静置数小时使电喷液中气泡完全消失，搅拌形成均一电喷液。
[0041](3)用注射器抽取温敏性含糖共聚物，固定于电喷装置上，控制喷出流速1.0ml/h，静电压10kV，接收屏采用铝箔接地接收，针头与接收屏的距离为10-20cm，采用正交方法(改变某一参数，固定其他的参数)调节不同电喷参数进行电喷，得温敏性含糖共聚物纳米颗粒;放入真空干燥箱中60-80°C恒温干燥24h，制成再生纳米复合膜，其核磁图谱如图2所示。
[0042]实施例3
[0043](I)将癸二酸二乙烯脂与葡萄糖按一定的比例(4:1，摩尔比)溶解在无水吡啶中，利用酶促合成技术合成葡萄糖乙烯脂。反应结束后，粗产物用硅胶层析柱分离提纯，洗脱剂为乙酸乙酯，展开剂为乙酸乙酯、甲醇和水(17:3:1，v/v/v)，用I2显色。将上述糖脂放于微量聚合管中，加入一定量的N-异丙基丙烯酰胺(与葡萄糖乙烯脂的摩尔比为7:1)，用偶氮二异丁腈(AIBN)(占葡萄糖乙烯脂和N-异丙基丙烯酰胺总质量的质量分数为2.0)作为引发剂，加入无水乙醇作溶剂(单体浓度为2.5mol/L无水乙醇)，密封，用油栗抽真空后通氮气，反复多次。将体系置于50-60°C氮气保护下搅拌反应6h。
[0044](2)将一定质量的温敏性葡萄糖乙烯脂共聚物和PLCL按照摩尔比为1:1加入无水乙醇中，共聚物中葡萄糖脂与NIPAM的摩尔比为1:20，搅拌数小时至完全溶解，静置数小时使电喷液中气泡完全消失，搅拌形成均一电喷液。
[0045](3)用注射器抽取温敏性含糖共聚物，固定于电喷装置上，控制喷出流速1.0ml/h，静电压10kV，接收屏采用铝箔接地接收，针头与接收屏的距离为10-20cm，采用正交方法(改变某一参数，固定其他的参数)调节不同电喷参数进行电喷，得温敏性含糖共聚物纳米颗粒;放入真空干燥箱中60-80 °C恒温干燥24h，制成再生纳米复合膜，其LCST值如图3所示，电镜照片如图4所示。
[0046]本发明所述的实施例1?3仅仅是对本发明的优选实施方式进行的描述，并非对本发明构思和范围进行限定，在不脱离本发明设计思想的前提下，本领域中工程技术对本发明的技术方案作出的各种变型和改进，均应落入本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种葡萄糖乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物纳米颗粒的制备方法，其特征在于，具体步骤如下: 1)、将不同链长的二酸，醋酸乙烯酯，醋酸汞，醋酸铜混合烧瓶中，室温搅拌I?15min后加入浓硫酸，在50 0C?70 0C下恒温搅拌反应Sh，加入无水醋酸钠中和浓硫酸，分离提纯，得到不同链长的二酸二乙烯脂； 2)、将摩尔比为1-4:1的二酸二乙烯脂与葡萄糖溶于无水吡啶中，加入碱性蛋白酶，在40-60°C条件下反应3-5天，分离提纯，得到葡萄糖乙烯脂;其中碱性蛋白酶0.5-1.5g，无水吡啶的用量为50-100ml; 3)、在上述葡萄糖乙烯脂中加入N-异丙基丙烯酰胺、引发剂和溶剂，然后在55-60°C氮气保护下搅拌反应3_8h，聚合反应结束后得到葡萄糖乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物;其中N-异丙基丙烯酰胺与葡萄糖乙烯脂的摩尔比为1-50:1，引发剂占葡萄糖乙烯脂和N-异丙基丙烯酰胺质量之和的0.2-2% ； 4)、将上述葡萄糖乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物和PLCL加入溶剂中，搅拌得葡萄糖乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物电喷液，然后进行电喷，干燥即得葡萄糖乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物纳米颗粒;其中葡萄糖乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物和PLCL之和占电喷液的质量分数为3-30%，葡萄糖乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物和PLCL的摩尔比为1:1。2.根据权利要求1所述的葡萄糖乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述步骤I)中不同链长的二酸是己二酸、壬二酸和癸二酸。3.根据权利要求1所述的葡萄糖乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述步骤I)中的二酸与醋酸乙烯酯的摩尔比为1:1?1:5。4.根据权利要求1所述的葡萄糖乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述步骤I)中的醋酸汞质量Ig?3g，浓硫酸体积为0.1-0.25mL05.根据权利要求1所述的葡萄糖乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述步骤I)中的无水醋酸钠的质量为0.1?1.0g，过量的醋酸乙烯酯的除杂方式为旋转蒸发，提纯方式为硅胶层析柱(300?400目)。6.根据权利要求1或2或3或4或5所述的葡萄糖乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中分离提纯为:用硅胶层析柱分离提纯，洗脱剂为乙酸乙酯，展开剂为体积比为17:3:1的乙酸乙酯、甲醇和水的混合液，用I2显色。7.根据权利要求1所述的葡萄糖乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述步骤3)中引发剂为偶氮二异丁腈AIBN，溶剂为无水乙醇，葡萄糖乙烯脂和N-异丙基丙烯酰胺在无水乙醇溶液中的浓度之和为2-3mol/L，聚合反应结束后，将产物经3500D透析膜除去没反应的葡萄糖乙烯脂。8.根据权利要求6所述的葡萄糖乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述步骤4)中的溶剂为无水乙醇。9.根据权利要求1或2或3或4或5或7或8所述的葡萄糖乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述步骤4)中电喷工艺参数为:注射器规格为5mL，针头内径为0.4-0.7mm，喷出流速0.8_2mL/h，静电压10_18kV，接收屏采用铝箔接地接收，接受距离为10-20cm，采用正交方法调节电喷参数进行电喷。10.根据权利要求9所述的葡萄糖乙烯脂/异丙基丙烯酰胺共聚物纳米颗粒的制备方 法，其特征在于，所述步骤4)中干燥的温度为30-60 0C，干燥时间为24-48h。
【文档编号】C08L33/24GK105837743SQ201610226747
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2016年4月13日
【发明人】翁荣弟, 柴红梅, 刘爱莲
【申请人】浪莎针织有限公司