一种青霉菌核的平板培养方法
【专利摘要】本发明提供了一种青霉菌核的平板培养方法。本发明所使用的菌种是汤姆青霉PT95菌株；培养基配方为：NaNO3 2.9～3.1g、K2HPO4 0.95～1.05g、KCl 0.48～0.52g、FeSO4·7H2O0.009～0.011g、麦芽糖29～31g、琼脂15～20g、蒸馏水1000mL；培养步骤为：接种物的制备、培养基的配制与倒平板、接种与培养、菌核的分离与收集。本发明培养方法的优点：平板培养物菌核密度大、产量高，菌核产量最高可达49.5mg/mL培养基，且易收集分离。
【专利说明】
一种青霉菌核的平板培养方法
技术领域
[0001]本发明涉及霉菌的菌核培养方法，具体是一种青霉菌核的平板培养方法。
【背景技术】
[0002]青霉菌核是青霉菌丝体聚集形成的坚硬的休眠体，是其生活史中的一种重要的、常见的结构。产菌核青霉具有一些独特的生物学特性而表现出良好的应用前景，例如，可以溶解磷来生产菌肥，能拮抗土传性植物菌核病病原菌，能降解土壤中的毒植物素酚酸，可以催化合成孕二烯酮中间体，含有抗肿瘤活性成分等。因此，为了研究产菌核青霉的生物学特性、菌核的分化发育和相关菌核产品的应用开发，需要建立能够获得大量菌核的培养方法。
[0003]目前培养菌核的方法主要是传统的查氏平板培养法，该方法得到的培养物由大量的菌丝体、分生孢子和少量的菌核组成，菌核的产量低，收集困难。而本发明提供的方法不仅能提高培养物中菌核的比例和密度、增加产量，而且还便于分离收集菌核，是一种较好的青霉菌核平板培养的方法。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于针对现有技术存在的问题提供一种青霉菌核的平板培养方法。该方法不仅能提高培养物中菌核的比例和密度、增加产量，同时还便于菌核的分离收集。
[0005]本发明所使用的一株青霉PT95菌株是从山西省汾阳市混交林土壤中分离到的，其形态特征为:帚状枝为严格单轮生，瓶梗3?8个轮生，安瓿形;分生孢子链状排列，椭圆形；菌核球形或不规则形，菌核直径约300μπι，粉红至橙红色。结合形态特征和rDNA-1TS序列测定(NCBI登录号KC966728)将其鉴定为汤姆青霉(Penicillium thomii)，命名为“汤姆青霉卩丁95菌株”。该菌株的生物学特性和鉴定相关内容见:(1)微生物学通报，1998，25(6):319-321; (2)微生物学报，1999，39(2): 148-153; (3)World Journal of Microb1logyB1technology，2014，30(5):1519-1525。
[0006]本发明所提供的一种青霉菌核平板培养方法，包括如下步骤:
[0007]I)接种物的制备:将在查氏斜面上的菌株PT95的菌核0.1g经研磨处理后，用10mL无菌水制成lmg/ mL菌核悬液，作为接种物；
[0008]2)平板培养基制备:培养基配方为NaNO3 2.9?3.IgJ2HPO4 0.95?1.05g、KCl0.48?0.52g、FeS04.7H20 0.009?0.0llg、麦芽糖29?31g、琼脂 15?20g、蒸馏水100mL;按常规方法制备，灭菌后倒平板备用；
[0009]3)接种与培养:将ο.lmL或ο.2mL接种物涂布于平板培养基上，并将涂布好的平板倒置于27?30 °C培养箱中黑暗培养；
[0010]4)菌核的分离与收集:培养20?23天后，用自来水将平板上的培养物冲洗下来，去掉漂在上面的菌丝体和分生孢子，将沉淀在下面的菌核收集后置55?65°C烘箱烘至恒重，计算菌核的产量。
[0011]所述培养基优选配方为NaNO33g,K2HPO4 lg、KCl 0.5g,FeSO4.7H20 0.0lg、麦芽糖30g、琼脂18g、蒸馈水lOOOmL。
[0012]与现有技术相比本发明的有益效果:本发明提供的菌核平板培养方法所获得的青霉平板培养物菌核密度大、产量高(菌核产量最高可达49.5mg/mL培养基)，还便于分离收集。
【具体实施方式】
[0013]实施例1
[0014]培养基:配方为NaNO32.9g^K2HPO4 0.95g、KCl 0.48g、FeS04.7H20 0.009g、麦芽糖29g、琼脂15g、蒸馈水lOOOmL。
[0015]菌种:汤姆青霉菌株PT95，保持在查氏斜面上。
[0016]步骤包括:
[0017]I)接种物的制备:将在查氏斜面上的菌株PT95的菌核0.1g经研磨处理后，用10mL无菌水制成lmg/ mL菌核悬液，作为接种物；
[0018]2)平板培养基制备:将灭菌的培养基趁热倒入直径90mm的培养皿中(每皿30mL培养基)，制成33只平板；
[0019]3)接种与培养:每只平板加0.1mL接种物，用无菌玻璃刮棒涂布均匀，并将涂布好的平板倒置于27°C培养箱中黑暗培养23天；
[0020]4)菌核的分离与收集:将菌株PT95在平板上形成的培养物用自来水冲洗下来，稍加沉淀，去掉漂在上面的菌丝体和分生孢子，将沉淀在下面的菌核收集后置55°C烘箱烘至恒重。
[0021 ]经称重计算，33只平板共培养获得46.5g干菌核，菌核产量为46.5mg/mL培养基。
[0022]实施例2
[0023]培养基:配方为NaNO33.1g^K2HPO4 1.05g、KCl 0.52g、FeS04.7H20 0.0llg、麦芽糖31g、琼脂20g、蒸馈水1000mL。
[0024]菌种:同实施例1。
[0025]步骤包括:
[0026]I)接种物的制备:将在查氏斜面上的菌株PT95的菌核0.1g经研磨处理后，用10mL无菌水制成lmg/ mL菌核悬液，作为接种物；
[0027]2)平板培养基制备:将灭菌的培养基趁热倒入直径120mm的培养皿中(每皿83.3mL培养基)，制成12只平板；
[0028]3)接种与培养:每只平板加0.2mL接种物，用无菌玻璃刮棒涂布均匀，并将涂布好的平板倒置于30°C培养箱中黑暗培养20天；
[0029]4)菌核的分离与收集:将菌株PT95在平板上形成的培养物用自来水和玻璃刮棒冲洗下来，稍加沉淀，去掉漂在上面的菌丝体和分生孢子，将沉淀在下面的菌核收集后置65 V烘箱烘至恒重。
[0030]经称重计算，12只平板共培养获得45.5g干菌核，菌核产量为45.5mg/mL培养基。
[0031]实施例3
[0032]培养基:配方为NaNO33g,K2HPO4 lg、KCl 0.5g,FeSO4.7H20 0.01g、麦芽糖3g、琼脂18g、蒸馈水1000mL。
[0033]菌种:同实施例1。
[0034]步骤包括:
[0035]I)接种物的制备:将在查氏斜面上的菌株PT95的菌核0.1g经研磨处理后，用10mL无菌水制成lmg/ mL菌核悬液，作为接种物；
[0036]2)平板培养基制备:将灭菌的培养基趁热倒入直径90mm的培养皿中(每皿30mL培养基)，制成33只平板；
[0037]3)接种与培养:每只平板加0.1mL接种物，用无菌玻璃刮棒涂布均匀，并将涂布好的平板倒置于28°C培养箱中黑暗培养21天；
[0038]4)菌核的分离与收集:将菌株PT95在平板上形成的培养物用自来水冲洗下来，稍加沉淀，去掉漂在上面的菌丝体和分生孢子，将沉淀在下面的菌核收集后置60°C烘箱烘至恒重。经称重计算，33只平板共培养获得49.5g干菌核，菌核产量为49.5mg/mL培养基。
【主权项】
1.一种青霉菌核平板培养方法，其特征在于，包括如下步骤: 1)接种物的制备:将在查氏斜面上的汤姆青霉PT95菌株的菌核0.1g经研磨处理后，用I OOmL无菌水制成lmg/ mL菌核悬液，作为接种物； 2)平板培养基制备:培养基配方为NaNO32.9?3.1g、K2HP04 0.95?I.05g、KCl 0.48—0.52g、FeS04.7H20 0.009?0.0llg、麦芽糖29?31g、琼脂 15?20g、蒸馏水100mL;按常规方法制备，灭菌后倒平板备用； 3)接种与培养:将0.1mL或0.2mL接种物涂布于平板培养基上，并将涂布好的平板倒置于27?30 °C培养箱中黑暗培养； 4)菌核的分离与收集:培养20?23天后，用自来水将平板上的培养物冲洗下来，去掉漂在上面的菌丝体和分生孢子，将沉淀在下面的菌核收集后置55?65°C烘箱烘至恒重，计算菌核的产量。2.如权利要求1所述的一种青霉菌核平板培养方法，其特征在于，所述的培养基配方为:NaNO3 3g,K2HPO4 lg、KCl 0.5g、FeS(k.7H20 0.01g、麦芽糖30g、琼脂 18g、蒸馏水100mL0
【文档编号】C12R1/80GK105838628SQ201610417154
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2016年6月14日
【发明人】王琪, 韩建荣
【申请人】山西大学