基于提高四环素纯度的提纯方法
【专利摘要】本发明公开了基于提高四环素纯度的提纯方法，包括以下步骤：1）、四环素粗品的制备：将金色链霉菌孢子在发酵罐内进行发酵培养后加入草酸，过滤得到滤液，滤液在碱性条件下加入钙盐进行沉淀，沉淀物酸洗后得四环素粗品；2）、四环素粗品的干燥；3）、四环素?无机盐溶解液的制备：将干燥后的四环素粗品用无机盐饱和溶液溶解；得四环素?无机盐溶解液；4）、四环素?无机盐溶解液的沉淀；5）、重结晶?热结晶；6）、重结晶?冷结晶；7）、将步骤6）得到的四环素湿晶体在干燥箱内进行干燥处理得到四环素。本发明通过对得到的四环素?无机盐沉淀进行重结晶?热结晶、重结晶?冷结晶，四环素几乎不含杂质，提高了制备的四环素的纯度。
【专利说明】
基于提高四环素纯度的提纯方法
技术领域
[0001]本发明涉及药物合成技术领域，具体涉及基于提高四环素纯度的提纯方法。
【背景技术】
[0002]四环素未黄色结晶，无气味。味苦。易吸湿。遇光色渐变深。易溶于水，于甲醇。乙醇，不溶于乙醚，轻类。它是从放线菌金色链丛菌(Streptomycesaureofaciens)的培养液中离出来的抗菌物质，对革兰氏阳性菌、阴性菌、立克次体、滤过行病毒、螺旋体属乃至原虫类都有很好的抑制作用，对结核菌、变形菌等则无效。
[0003]四环素为第一代四环素类抗生素，其具有广谱抗菌特点，可抵抗如革兰氏阴性和革兰氏阳性菌、衣原体、支原体和原生物类寄生虫等多种微生物。另外对很多青霉素敏感的人群，可以用四环素类抗生素作为替代品治疗某些疾病。由于其造价不高，广泛应用于对人类和动物感染的治疗。
[0004]现有的四环素的提纯工艺易导致四环素成品中含有较多杂质，使得四环素的纯度较低。
【发明内容】
[0005]本发明所的目的在于提供基于提高四环素纯度的提纯方法，解决现有的四环素的提纯工艺易导致四环素纯度较低的问题。
[0006]本发明通过下述技术方案实现:
1、基于提高四环素纯度的提纯方法，其特征在于，包括以下步骤:
1)、四环素粗品的制备:将金色链霉菌孢子在发酵罐内进行发酵培养后加草酸进行酸化处理，过滤得到滤液，滤液在碱性条件下加入钙盐进行沉淀，沉淀物经酸洗后得到四环素粗品;
2)、四环素粗品的干燥:将四环素粗品放置在真空干燥箱中进行干燥，干燥温度为500C-60 °C；
3)、四环素-无机盐溶解液的制备:将干燥后的四环素粗品用无机盐饱和溶液溶解，调节PH值为2-4;即得四环素-无机盐溶解液；
4)、四环素-无机盐溶解液的沉淀:向四环素-无机盐溶解液中滴加氨水调节pH值至3-5，降温至0-10°C，静止1-2小时析出四环素-无机盐沉淀;5)、重结晶-热结晶:将步骤4)得到的四环素-无机盐沉淀在搅拌条件下加入到有机溶剂A中，待全部加入后滴加盐酸，搅拌至四环素-无机盐沉淀全部溶解，升温至50°C-6(TC，再慢慢加入有机溶剂B，保温50min-60min，析出四环素精制晶体；
所述有机溶剂A为乙醇、乙二醇、异丙醇、异丁醇、叔丁醇或丙酮；
所述有机溶剂B为乙醚、异丙醚、乙酸乙酯、醋酸乙酯、丙烯酸甲酯或磷酸甲酯；
6)、重结晶-冷结晶:将步骤5)的体系放置在0-10°C的冷水浴进行冷结晶，析出四环素精制晶体，待完全结晶后进行减压抽滤，用机溶剂A洗涤晶体，得到四环素湿晶体； 7)、将步骤6)得到的四环素湿晶体在干燥箱内进行干燥处理得到四环素。
[0007]本发明通过对得到的四环素-无机盐沉淀进行重结晶-热结晶、重结晶-冷结晶，经过双重结晶后，四环素几乎不含杂质，提高了制备的四环素的纯度。
[0008]进一步地，发酵培养的具体步骤为:将金色链霉菌孢子接种到孢子培养基上培养5天，直到孢子成熟，然后将制备的孢子转至种子罐培养，种子罐培养完毕后转为发酵培。
[0009]进一步地，孢子培养基由以下成分组成:麸皮3.0%-3.8%，硫酸镁0.1%-0.3%，磷酸二氢钾0.2%-0.4%，琼脂2.4%-3.2%，余量为水。
[00?0] 进一步地，种子耀中设置有培养基，培养基由以下成分组成:玉米淀粉3.0%-5.0%，花生饼粉1%_3%，黄豆饼粉1%_3%，酵母粉1%-2%，碳酸钙0.2%-0.5%，硫酸铵0.2%_0.6%，磷酸二氢钾0.2%-0.4%，淀粉酶0.03%-0.05%，消泡剂0.2%-0.4%，余量为水。
[0011 ] 进一步地，发酵培养的条件为:温度为250C-30°C，压力为0.02Mpa-0.05Mpa，pH为5.6-6.2,发酵时间大于72小时。
[0012]进一步地，无机盐饱和溶液至少包括氯化镁饱和溶液、氯化钡饱和溶液、氯化钙饱和溶液、氯化钾饱和溶液、氯化钠饱和溶液中的一种。
[0013]本发明与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果:
本发明通过对得到的四环素-无机盐沉淀进行重结晶-热结晶、重结晶-冷结晶，经过双重结晶后，四环素几乎不含杂质，提高了制备的四环素的纯度。
【具体实施方式】
[0014]为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例，对本发明作进一步的详细说明，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作为对本发明的限定。
[0015]实施例1:
基于提高四环素纯度的提纯方法，包括以下步骤:
1)、四环素粗品的制备:将金色链霉菌孢子在发酵罐内进行发酵培养后加草酸进行酸化处理，过滤得到滤液，滤液在碱性条件下加入钙盐进行沉淀，沉淀物经酸洗后得到四环素粗品;
所述发酵培养的具体步骤为:将金色链霉菌孢子接种到孢子培养基上培养5天，直到孢子成熟，然后将制备的孢子转至种子罐培养，种子罐培养完毕后转为发酵培；
所述孢子培养基由以下成分组成:麸皮3.0%，硫酸镁0.1%，磷酸二氢钾0.2%，琼脂2.4%，余量为水；
所述种子罐中设置有培养基，培养基由以下成分组成:玉米淀粉3.0%，花生饼粉1%，黄豆饼粉1%，酵母粉1%，碳酸钙0.2%，硫酸铵0.2%，磷酸二氢钾0.2%，淀粉酶0.03%，消泡剂
0.2%，余量为水；
所述发酵培养的条件为:温度为25°C，压力为0.02Mpa，pH为5.6，发酵时间为80小时；
2)、四环素粗品的干燥:将四环素粗品放置在真空干燥箱中进行干燥，干燥温度为50
°C；
3)、四环素-无机盐溶解液的制备:将干燥后的四环素粗品用氯化镁饱和溶液和氯化钡饱和溶液的混合液(比例为I: I)溶解，调节PH值为2;即得四环素-无机盐溶解液； 4)、四环素-无机盐溶解液的沉淀:向四环素-无机盐溶解液中滴加氨水调节pH值至3，降温至(TC，静止I小时析出四环素-无机盐沉淀；5)、重结晶-热结晶:将步骤4)得到的四环素-无机盐沉淀在搅拌条件下加入到有机溶剂A中，待全部加入后滴加盐酸，搅拌至四环素-无机盐沉淀全部溶解，升温至50°C，再慢慢加入有机溶剂B，保温50min，析出四环素精制晶体；
所述有机溶剂A为乙醇；
所述有机溶剂B为乙醚；
6)、重结晶-冷结晶:将步骤5)的体系放置在(TC的冷水浴进行冷结晶，析出四环素精制晶体，待完全结晶后进行减压抽滤，用机溶剂A洗涤晶体，得到四环素湿晶体；
7)、将步骤6)得到的四环素湿晶体在干燥箱内进行干燥处理得到四环素。
[0016]实施例2:
基于提高四环素纯度的提纯方法，包括以下步骤:
1)、四环素粗品的制备:将金色链霉菌孢子在发酵罐内进行发酵培养后加草酸进行酸化处理，过滤得到滤液，滤液在碱性条件下加入钙盐进行沉淀，沉淀物经酸洗后得到四环素粗品;
所述发酵培养的具体步骤为:将金色链霉菌孢子接种到孢子培养基上培养5天，直到孢子成熟，然后将制备的孢子转至种子罐培养，种子罐培养完毕后转为发酵培；
所述孢子培养基由以下成分组成:麸皮3.8%，硫酸镁0.3%，磷酸二氢钾0.4%，琼脂3.2%，余量为水；
所述种子罐中设置有培养基，培养基由以下成分组成:玉米淀粉5.0%，花生饼粉3%，黄豆饼粉3%，酵母粉2%，碳酸钙0.5%，硫酸铵0.6%，磷酸二氢钾0.4%，淀粉酶0.05%，消泡剂
0.4%，余量为水；
所述发酵培养的条件为:温度为30°C，压力为0.05Mpa，pH为6.2，发酵时间为72小时；
2)、四环素粗品的干燥:将四环素粗品放置在真空干燥箱中进行干燥，干燥温度为60
°C；
3)、四环素-无机盐溶解液的制备:将干燥后的四环素粗品用氯化钙饱和溶液溶解，调节PH值为4;即得四环素-无机盐溶解液；
4)、四环素-无机盐溶解液的沉淀:向四环素-无机盐溶解液中滴加氨水调节PH值至5，降温至10°C，静止2小时析出四环素-无机盐沉淀；
5)、重结晶-热结晶:将步骤4)得到的四环素-无机盐沉淀在搅拌条件下加入到有机溶剂A中，待全部加入后滴加盐酸，搅拌至四环素-无机盐沉淀全部溶解，升温至60°C，再慢慢加入有机溶剂B，保温60min，析出四环素精制晶体；
所述有机溶剂A为乙二醇；
所述有机溶剂B为异丙醚；
6)、重结晶-冷结晶:将步骤5)的体系放置在10°C的冷水浴进行冷结晶，析出四环素精制晶体，待完全结晶后进行减压抽滤，用机溶剂A洗涤晶体，得到四环素湿晶体；
7)、将步骤6)得到的四环素湿晶体在干燥箱内进行干燥处理得到四环素。
[0017]实施例3:
基于提高四环素纯度的提纯方法，包括以下步骤: 1)、四环素粗品的制备:将金色链霉菌孢子在发酵罐内进行发酵培养后加草酸进行酸化处理，过滤得到滤液，滤液在碱性条件下加入钙盐进行沉淀，沉淀物经酸洗后得到四环素粗品;
所述发酵培养的具体步骤为:将金色链霉菌孢子接种到孢子培养基上培养5天，直到孢子成熟，然后将制备的孢子转至种子罐培养，种子罐培养完毕后转为发酵培；
所述孢子培养基由以下成分组成:麸皮3.3%，硫酸镁0.2%，磷酸二氢钾0.3%，琼脂2.8%，余量为水；
所述种子罐中设置有培养基，培养基由以下成分组成:玉米淀粉4.0%，花生饼粉2%，黄豆饼粉2%，酵母粉1.5%，碳酸钙0.4%，硫酸铵0.3%，磷酸二氢钾0.3%，淀粉酶0.04%，消泡剂
0.3%，余量为水；
所述发酵培养的条件为:温度为28 °C，压力为0.03Mpa，pH为5.8，发酵时间为72小时；
2)、四环素粗品的干燥:将四环素粗品放置在真空干燥箱中进行干燥，干燥温度为55
°C；
3)、四环素-无机盐溶解液的制备:将干燥后的四环素粗品用氯化钾饱和溶液、氯化钠饱和溶液的混合液(比例为1:2)溶解，调节pH值为3;即得四环素-无机盐溶解液；
4)、四环素-无机盐溶解液的沉淀:向四环素-无机盐溶解液中滴加氨水调节PH值至4，降温至5°C，静止2小时析出四环素-无机盐沉淀；
5)、重结晶-热结晶:将步骤4)得到的四环素-无机盐沉淀在搅拌条件下加入到有机溶剂A中，待全部加入后滴加盐酸，搅拌至四环素-无机盐沉淀全部溶解，升温至55°C，再慢慢加入有机溶剂B，保温50min，析出四环素精制晶体；
所述有机溶剂A为异丙醇，也可以是异丁醇、叔丁醇或丙酮；
所述有机溶剂B为乙酸乙酯，也可以是醋酸乙酯、丙烯酸甲酯或磷酸甲酯；
6)、重结晶-冷结晶:将步骤5)的体系放置在5°C的冷水浴进行冷结晶，析出四环素精制晶体，待完全结晶后进行减压抽滤，用机溶剂A洗涤晶体，得到四环素湿晶体；
7)、将步骤6)得到的四环素湿晶体在干燥箱内进行干燥处理得到四环素。
[0018]以上所述的【具体实施方式】，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的【具体实施方式】而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.基于提高四环素纯度的提纯方法，其特征在于，包括以下步骤: 1)、四环素粗品的制备:将金色链霉菌孢子在发酵罐内进行发酵培养后加草酸进行酸化处理，过滤得到滤液，滤液在碱性条件下加入钙盐进行沉淀，沉淀物经酸洗后得到四环素粗品; 2)、四环素粗品的干燥:将四环素粗品放置在真空干燥箱中进行干燥，干燥温度为500C-60 °C； 3)、四环素-无机盐溶解液的制备:将干燥后的四环素粗品用无机盐饱和溶液溶解，调节PH值为2-4;即得四环素-无机盐溶解液； 4)、四环素-无机盐溶解液的沉淀:向四环素-无机盐溶解液中滴加氨水调节pH值至3-5，降温至0-10°C，静止1-2小时析出四环素-无机盐沉淀； 5)、重结晶-热结晶:将步骤4)得到的四环素-无机盐沉淀在搅拌条件下加入到有机溶剂A中，待全部加入后滴加盐酸，搅拌至四环素-无机盐沉淀全部溶解，升温至50 V-60 V，再慢慢加入有机溶剂B，保温50min-60min，析出四环素精制晶体； 所述有机溶剂A为乙醇、乙二醇、异丙醇、异丁醇、叔丁醇或丙酮； 所述有机溶剂B为乙醚、异丙醚、乙酸乙酯、醋酸乙酯、丙烯酸甲酯或磷酸甲酯； 6)、重结晶-冷结晶:将步骤5)的体系放置在0-10°C的冷水浴进行冷结晶，析出四环素精制晶体，待完全结晶后进行减压抽滤，用机溶剂A洗涤晶体，得到四环素湿晶体； 7)、将步骤6)得到的四环素湿晶体在干燥箱内进行干燥处理得到四环素。2.根据权利要求1所述的基于提高四环素纯度的提纯方法，其特征在于，所述发酵培养的具体步骤为:将金色链霉菌孢子接种到孢子培养基上培养5天，直到孢子成熟，然后将制备的孢子转至种子罐培养，种子罐培养完毕后转为发酵培。3.根据权利要求2所述的基于提高四环素纯度的提纯方法，其特征在于，所述孢子培养基由以下成分组成:麸皮3.0%-3.8%，硫酸镁0.1%-0.3%，磷酸二氢钾0.2%-0.4%，琼脂2.4%-3.2%，余量为水。4.根据权利要求2所述的基于提高四环素纯度的提纯方法，其特征在于，所述种子罐中设置有培养基，培养基由以下成分组成:玉米淀粉3.0%-5.0%，花生饼粉1%_3%，黄豆饼粉1%-3%，酵母粉1%-2%，碳酸钙0.2%-0.5%，硫酸铵0.2%-0.6%，磷酸二氢钾0.2%-0.4%，淀粉酶0.03%-0.05%，消泡剂0.2%-0.4%，余量为水。5.根据权利要求2所述的基于提高四环素纯度的提纯方法，其特征在于，所述发酵培养的条件为:温度为250C-30°C，压力为0.02Mpa-0.05Mpa，pH为5.6-6.2,发酵时间大于72小时。6.根据权利要求1所述的基于提高四环素纯度的提纯方法，其特征在于，所述无机盐饱和溶液至少包括氯化镁饱和溶液、氯化钡饱和溶液、氯化妈饱和溶液、氯化钾饱和溶液、氯化钠饱和溶液中的一种。
【文档编号】C07C231/24GK105861610SQ201610413722
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年6月14日
【发明人】廖成斌
【申请人】成都中牧生物药业有限公司