苦参碱衍生物、其制备方法及其应用
【专利摘要】本发明公开了一种苦参碱衍生物、其制备方法及其应用。本发明公开的苦参碱衍生物具有良好的抗肿瘤、抗真菌感染和细菌感染的活性。本发明公开的苦参碱衍生物的制备方法，包括步骤，培养粘性放线菌，收集菌丝体；将菌丝体，悬浮于水中，配制成静息细胞悬液，加入苦参碱，进行生物转化；生物转化完成后，对转化产物进行分离纯化。本发明的制备苦参碱衍生物的方法，反应条件温和，方法简单可靠，极大的减少了化学试剂的用量，避免了化学方法中的环境污染问题。
【专利说明】
苦参碱衍生物、其制备方法及其应用
技术领域
[0001] 本发明涉及医药技术领域，具体地涉及苦参碱衍生物及其用途。
【背景技术】
[0002] 苦参（Radix Sophorae flavescentis)为豆科苦参属的植物。别名：苦骨、地槐、 水槐、菟槐、骄槐、野槐或白茎。生长于海拔1，500米的地区，多生在山坡、沙地、草坡、灌木 林中及田野附近。可用于清热燥湿、杀虫、利尿。也可用于热痢，便血，黄疸尿闭，赤白带下， 阴肿阴痒，湿疹，湿疮，皮肤瘙痒，疥癣麻风；外治滴虫性阴道炎。
[0003] 苦参碱（Matrine，MT)是由苦参的干燥根、植株、果实经乙醇等有机溶剂提取制成 的生物碱。是传统中药苦参的主要活性成分之一，结构中含有一个四元稠环的喹诺里西啶， 是一类结构特异的生物碱。苦参碱的结构如下式所示，
[0004]
[0005] 研究表明，苦参碱具有广泛的药理作用，如有抗肿瘤、镇痛、抗心律失常、防止肝纤 维化、抗乙型肝炎病毒等，临床上广泛用于治疗慢性肝炎和肝纤维化。作为一种天然产物药 品，苦参碱有很多的优点，如：毒副作用小，安全有效，药用资源来源广等；此外，研究者对 苦参碱的抗肿瘤作用进行了较为广泛而深入的研究，结果显示，苦参碱具有广谱抗肿瘤作 用，对正常细胞不产生破坏作用，且能升高白细胞数、提高机体免疫功能。但是虽然苦参碱 的应用比较广泛，但是由于活性较低，在一定程度上又限制了它的开发利用。因此本领域技 术人员致力于对其结构进行改造，以期获得一种生物活性较强的苦参碱衍生物。申请号为 201010188491. 9的中国专利申请，报道了一类苦参碱衍生物，其具有良好的抗肿瘤活性。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种苦参碱衍生物及其用途。
[0007] 本发明的第一方面提供了一种苦参碱衍生物：其结构式如式I所示：
[0008]
[0009] 本发明的另一方面提供了式I所示化合物的用途，用于制备治疗肿瘤、真菌感染、 细菌感染的药物。
[0010] 本发明的第另一方面提供了一种式I所示苦参碱的制备方法，包括步骤：
[0011] (1)菌体培养
[0012] 培养粘性放线菌（Actinomyces viscosus)，收集菌丝体；
[0013] ⑵生物转化
[0014] 将步骤（1)获得的菌丝体，悬浮于水中，配制成静息细胞悬液，加入苦参碱，进行 生物转化；
[0015] (3)分离纯化
[0016] 生物转化完成后，对转化产物进行分离纯化。
[0017] 优选地，步骤（1)中的粘性放线菌菌株为粘性放线菌ATCC27044菌株。
[0018] 优选地，步骤（2)中的静息细胞悬液体积为步骤（1)中培养粘性放线菌发酵液体 积的 30% -50%。
[0019] 优选地，步骤（2)中，生物转化的pH为5. 5-6. 5,更优选地pH为6. 0。
[0020] 优选地，步骤（2)中，每升静息细胞悬液中加入苦参碱0. 2-0. 6g。
[0021] 优选地，步骤（2)中，转化温度为20-35°C，更优选地为27°C。
[0022] 优选地，步骤（3)中，采用大孔吸附树脂进行分离纯化。
[0023] 本发明的苦参碱衍生物具有良好的抗肿瘤、抗真菌感染和细菌感染的活性。而且 本发明的制备上述苦参碱衍生物的方法，反应条件温和，方法简单可靠，极大的减少了化学 试剂的用量，避免了化学方法中的环境污染问题。
[0024] 应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文（如实施例）中具 体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
【附图说明】
[0025] 图1显示了本发明实施例中各实验组的摩尔转化率。
[0026] 图2显示了标准品共进样的HPLC检测图谱。
【具体实施方式】
[0027] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条 件或按照制造厂商所建议的条件。
[0028] 除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意 义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文 中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
[0029] 实施例1
[0030] 发酵粘性放线菌制备静息细胞悬液
[0031] 菌株：粘性放线菌（ATCC27044)购自广东省微生物菌种保藏中心。
[0032] 斜面培养基：酵母粉0.4%，蛋白胨0.7%，葡萄糖1.2%，琼脂2. 5%，pH 7. 0-7. 2， 30°C培养4-5天。
[0033] 种子培养基：蔗糖2.5%，酵母粉0.3%，1(2册040.1 %，1((：10.05%，]\%504.7!120 0· 05%，FeS04 · 7H20 0· 0002%，pH = 6. 8,3(TC 培养 1-2 天。
[0034] 发酵培养基：蔗糖2. 5 %，大豆柏粉1. 2 %，酵母粉0. 1 %，Κ2ΗΡ040. 1 %， MgS04 · 7Η200· 3 %，pH = 6. 8，30 °C 培养 2-3 天。
[0035] 配制2L发酵培养基，发酵培养完成后，离心获得菌丝体。将菌丝体悬浮于水中，添 加0. 5%的氯化钠，制成静息细胞悬液，静息细胞悬液终体积为1L。
[0036] 本发明实施例中苦参碱、式I所示的苦参碱衍生物标准品购自南京标科生物科技 有限公司。
[0037] 实施例2
[0038] 生物转化
[0039] 按照下表配制生物转化体系，并设置转化条件，转化时间均为5小时。
[0040] 表 1
[0041]
[0042]
[0043] 转化完成后，离心，将离心液与甲醇1 : 1体积混合，HPLC定量检测，并计算苦参 碱底物的摩尔转化率；
[0044] HPLC检测法的条件如下：
[0045] 流动相：0. 1%甲酸水溶液：乙腈=92 : 8 ;
[0046] 柱型号：C18,150X4. 60mm，3ym;
[0047] 柱温：40°C ;
[0048] 流速：0· 7ml/min ;
[0049] 检测波长：226nm。
[0050] 摩尔转化率％ =苦参碱衍生物摩尔数/底物苦参碱摩尔数X 100%。
[0051] 实验组A、B、C、D、E、F、G的摩尔转化率如图1所示，分别为76%、80%、86%、81%、 63%、92%、74%，从该结果可以看出，pH对转化率的影响很大，最优化的转化条件为：苦参 碱0. 4g/L，转化体系pH6. 0,转化温度为27°C。
[0052] 转化完成后，离心，将离心液过滤，滤液经大孔吸附树脂纯化，所得产品与标准品 按重量1 : 1混合制得检测液，HPLC共进样检测，所得HPLC图谱如图2所示，标准品和本 发明所得产品的HPLC峰形完全重合，证明本发明所得产品，结构与标准品一致。经质谱检 测，纯化所得产品分子量大小与预期相符。
[0053] 在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独 引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可 以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范 围。
【主权项】
1. 一种苦参碱衍生物，其特征在于，其结构式如式I所示：2. 如权利要求1所述的化合物的用途，其特征在于，用于制备治疗肿瘤、真菌感染、细 菌感染的药物。3. -种权利要求1所述化合物的制备方法，其特征在于，包括步骤： (1) 菌体培养 培养粘性放线菌（Actinomyces viscosus)，收集菌丝体； (2) 生物转化 将步骤（1)获得的菌丝体，悬浮于水中，配制成静息细胞悬液，加入苦参碱，进行生物 转化； (3) 分离纯化 生物转化完成后，对转化产物进行分离纯化。4. 如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤（1)中的粘性放线菌菌株为粘性放线菌 ATCC27044 菌株。5. 如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤⑵中的静息细胞悬液体积为步骤（1) 中培养粘性放线菌发酵液体积的30% -50%。6. 如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤（2)中，生物转化的pH为5. 5-6. 5,更 优选地pH为6.0。7. 如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤（2)中，每升静息细胞悬液中加入苦参 喊 0· 2-〇· 6g。8. 如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤（2)中，转化温度为20-35°C。9. 如权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤⑵中，转化温度为27°C。10. 如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤（3)中，采用大孔吸附树脂进行分离纯 化。
【文档编号】A61P35/00GK105884772SQ201410473178
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2014年9月6日
【发明人】杨钟华
【申请人】瑞安市普罗生物科技有限公司