一种固态发酵生产解淀粉芽孢杆菌菌剂的方法
【专利摘要】本发明涉及一种固态发酵生产解淀粉芽孢杆菌菌剂的方法。以小麦麸皮、豆粕粉和玉米粉为主要原料制成固态发酵培养基。将配制好的培养基加水湿润在28℃～30℃静置培养7～8h，然后室温下与二氧化氯消毒剂混合进行杀菌。二氧化氯杀菌后的培养基接种解淀粉芽孢杆菌种子液进行固态发酵。发酵结束后，将固态发酵醪进行热风干燥、粉碎，即获得解淀粉芽孢杆菌菌剂，其芽孢数达到200～220亿个/g，芽孢率达到97％～99％。本发明采用二氧化氯杀菌来代替传统的高温蒸汽杀菌，时间短，效率高，大大降低多解淀粉芽孢杆菌菌剂的生产成本，减少了环境污染。
【专利说明】
一种固态发酵生产解淀粉芽孢杆菌菌剂的方法
技术领域
[0001]本发明属于生物技术领域，具体涉及一种固态发酵生产解淀粉芽孢杆菌菌剂的方法。
【背景技术】
[0002]在农业生产上经常会有农作物病害发生，给人们造成重大的经济损失。为了防治农作物病害，通常使用化学农药。化学农药具有成本低、见效快、省时省力等优点，但大量使用化学农药，不但对环境造成极大的污染，而且使得农产品品质下降，甚至造成农残等有毒有害物质超标。生物农药是指利用生物活体或其代谢产物针对农业有害生物进行杀灭或抑制的制剂，具有安全、高效、无污染等特点。随着人们和政府环保意识和保健意识的增强，研究开发生物农药来代替化学农药成为社会发展的必然趋势。
[0003]微生物农药是生物农药中应用最为广泛的一类。微生物源农药的主要成分是微生物活体及其次生代谢产物如抗生素等。用作农药的生物类群主要有细菌、真菌和病毒等。微生物农药具有杀虫、杀菌、除草以及植物生长调节作用。自然界中用于生防细菌的，主要有芽孢杆菌属、假单胞菌属。微生物农药被认为是无公害农药，防治对象不易产生抗药性，不伤害天敌，繁殖快，能利用农副产品甚至是工农业废水、废弃物等进行生产。
[0004]解淀粉芽抱杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)属于芽抱杆菌属(Bacillus)的革兰氏阳性细菌，是一种嗜温、好氧、产芽孢的杆状细菌。该菌在自然界分布广泛，对人畜无毒无害，不污染环境，生长速度快，能产生多种抑菌物质，具有广谱的抑制细菌和真菌活性，对植物的根腐病、枯萎病、黑痘病绿霉病等都有很好防治作用。解淀粉芽孢杆菌已被用于生产微生物农药、农用微生物菌剂和生物有机肥。
[0005]目前解淀粉芽孢杆菌采用液体深层发酵技术，再经喷雾干燥进行生产，对设备要求高，生产工艺复杂。相比液体深层发酵，固态发酵具有以下优点:培养基原料来源广泛且价格低;使用的设备相对简单，能耗低，生产成本远低于液体深层发酵;发酵过程不排放废水，环境污染较少。更重要的是，采用固态发酵可将菌体所产生的抗菌物质完全保存下来，而采用液体深层发酵易使这些抗菌物质随废水而排出。
[0006]二氧化氯消毒剂是一种强氧化剂，具有高效广谱杀菌或抑菌作用，而且安全不污染环境，是被世界卫生组织列为Al级的高效消毒剂。二氧化氯对细菌、真菌、病毒和寄生虫等均具有良好的杀灭或抑制的作用，而且易降解、无残留，在国内外已经广泛应用于饮用水处理、食品保鲜防腐、废水处理、室内环境消毒等领域。虽然二氧化氯还对各种杆菌的芽孢、霉菌的孢子具有较强的抑制作用，但不能完全杀死芽孢和孢子。
[0007]解淀粉芽孢杆菌固态发酵培养方法较少。例如，中国专利(公开号:CN104830711A)中固态发酵培养基(45%酱油豆柏、15%米糠、0.12%硫酸镁、0.12%硫酸锰)115?128°C高温灭菌20?35min，冷却后接种解淀粉芽孢杆菌种子液，37-42°C圆盘培养24-36h。中国专利(公开号:CN 104962492A)中以花生饼粉、麦麸、棉柏为主要原料组成述固态培养基。固体培养基120?125 °C灭菌两次，每次灭菌30?45min。将解淀粉芽孢杆种子液与固体培养基的混合物在30 V条件下静置培养5d。
[0008]以上专利技术方法存在的不足之处为:
[0009]①高温杀菌需要消耗大量的热能。这些热能无论是由煤炭燃烧提供，还是由电能提供，均会大大增加生产成本，直接或间接造成环境污染。
[0010]②固态培养基的高温灭菌及冷却耗时长，生产效率较低。
[0011 ]③高温灭菌会造成固态培养基中营养物质的破坏，不利用菌体生长。
【发明内容】
[0012]本发明的目的是提供一种低成本的固态发酵生产解淀粉芽孢杆菌方法。解淀粉芽孢杆菌的固态发酵过程中，使用二氧化氯消毒剂来代替传统的高温杀菌来杀灭培养基中的细菌、酵母、霉菌等杂菌，从而大大降低了生产成本。所生产的解淀粉芽孢杆菌菌剂，其芽孢数达到200?220亿个/g，芽孢率达到97?99 %。
[0013]发明所使用的菌株是一株高效拮抗多种植物病原菌、促进植物生长的解淀粉芽孢杆菌((Bacillus amyloliquefaciens)B3。
[0014]本发明的原理:二氧化氯消毒剂可以杀死细菌、酵母、霉菌等微生物的细胞或菌丝，但不能杀死细菌的芽孢和霉菌的孢子。将固态培养基加入少量水制成豆腐渣状的含水培养基，在28?30 V下培养一段时间，其目的是让培养基中的细菌芽孢和霉菌孢子萌发;然后用二氧化氯消毒剂对该培养基进行消毒，杀死其中的细菌、酵母、霉菌等微生物，达到培养基基本无菌。在消毒后固态培养基中，接种解淀粉芽孢杆菌种子液进行固态发酵。解淀粉芽孢杆菌本身能产生抗菌物质如抗菌肽、抗菌蛋白等，有较强的抗菌能力，而且生长速度快，因此，即便消毒后固态培养基中残留有杂菌，这些杂菌也不能生长，从而保障整个发酵过程的顺利进行。发酵结束后，将固态发酵醪进行热风干燥、粉碎，即获得解淀粉芽孢杆菌菌剂。
[0015]本发明采用以下技术方案予以实现:
[0016]—种固态发酵生产解淀粉芽孢杆菌菌剂的方法，包括以下步骤:
[0017]a、种子培养基的配制及灭菌:于IL水中，加入20?30g葡萄糖、10?20g蛋白胨、5?1g酵母粉、2?2.5硫酸钱、5.0?5.5g氯化钠、4.0?4.5g磷酸二氢钾、1.8?2.0g碳酸I丐，按照所述配比，将各种成分称重后加入三角瓶中，室温下搅拌均匀，制得种子培养基；用8层纱布密封后放入高压灭菌锅中，115°C?121°C灭菌15?20min，灭菌后把三角瓶冷却至室温；
[0018]b、种子液的制备:挑取斜面保藏的解淀粉芽孢杆菌B3菌种2?3环，接种到步骤a中所述的种子培养基中，30°C、180?200rpm摇床振荡培养12?14h;
[0019]c、固态发酵培养基的预处理:10g固态发酵培养基由70?80g小麦麸皮、15?20g豆柏粉、5?1g玉米粉组成；按照上述重量配比，将小麦麸皮、豆柏粉、玉米粉混合均匀，SP为固态发酵培养基；向100g固态发酵培养基中，加入200?250mL自来水，混合均匀，使其呈湿润状态，放置于培养箱中28 0C?30 °(:静置培养7?8h ；
[0020]d、二氧化氯消毒液的配制:将2?3片二氧化氯消毒泡腾片(lg/片，二氧化氯含量12% )加入到IL水中，待泡腾片完全溶解，并用0.2M盐酸调整其pH值为6.0?6.2，即制成浓度为240?360mg/L 二氧化氯消毒液；
[0021]e、固态发酵培养基的杀菌:向步骤c所述的100g固态发酵培养基中，加入4?5g磷酸二氢钾、氯化钾2.5?3g、氯化钠5.0?6g，混匀后转移到带有机械搅拌桨的卧式不锈钢固态发酵罐中，再加入350?400mL步骤d所述的二氧化氯消毒液，室温下搅拌均匀，静置杀菌15?20min;
[0022]f、固态发酵:开动机械搅拌桨搅拌步骤e的固态发酵培养基8?lOmin，其目的是将培养基中残存的二氧化氯释放出来，以免在后续的培养中损伤解淀粉芽孢杆菌细胞，然后，将步骤b所述解淀粉芽孢杆菌B3以4%?5%接种量接种到搅拌后的固态发酵培养基中，控制发酵温度30?34 °C，每8h搅拌一次，每次搅拌8?1min，发酵96?10h，得固态发酵醪。
[0023]g、干燥:采用60 °C?70 °C热风将步骤f所述的固态发酵醪干燥含水量30 %以下。
[0024]h、粉碎:使用锤式粉碎机将步骤g所述的干燥后的固态发酵醪粉碎成60?70目的粉末，即获得解淀粉芽孢杆菌B3菌剂，将解淀粉芽孢杆菌B3菌剂包装后，存放在阴凉干燥处。
[0025]优选的，所述步骤c中10g固态发酵培养基由70g小麦麸皮、20g豆柏粉、1g玉米粉组成。
[0026]优选的，所述步骤c中100g固态发酵培养基，加入200?250mL自来水，混合均匀，使其呈湿润状态，放置于30°C静置培养7?8h。
[0027]优选的，所述步骤d中氧化氯消毒液的pH值为6.0?6.2、二氧化氯浓度为300?360mg/Lo
[0028]优选的，所述步骤e中100g固态发酵培养基加入380?400mL二氧化氯消毒液，室温下搅拌均匀，静置杀菌18?20min。
[0029]优选的，所述步骤h中所获得的解淀粉芽孢杆菌菌剂的芽孢数达到200?220亿个/g，芽孢率达到97%?99 %。
[0030]优选的，a、种子培养基的配制及灭菌:于IL水中，加入30g葡萄糖、20g蛋白胨、5g酵母粉、2硫酸铵、5.0g氯化钠、4.0磷酸二氢钾、2.0g碳酸钙。按照所述配比，将各种成分称重后加入三角瓶中，室温下搅拌均匀，制得种子培养基；用8层纱布密封后放入高压灭菌锅中，115°C灭菌20min，灭菌后把三角瓶冷却至室温；
[0031]b、种子液的制备:挑取斜面保藏的解淀粉芽孢杆菌B3菌种2?3环，接种到步骤a中所述的种子培养基中，30°C、200rpm摇床振荡培养12h;
[0032]c、固态发酵培养基的预处理:10g固态发酵培养基由70g小麦麸皮、20g豆柏粉、1g玉米粉组成。按照上述配比，将小麦麸皮、豆柏粉、玉米粉混合均匀，即为固态发酵培养基。向100g固态发酵培养基中，加入250mL自来水，混合均匀，使其呈湿润状态，放置于30°C培养箱中静置培养7h ；
[0033]d、二氧化氯消毒液的配制:将3片二氧化氯消毒泡腾片(lg/片，二氧化氯含量12% )加入到IL水中，待泡腾片完全溶解，并用0.2M盐酸调整其pH值为6.0?6.2，即制成浓度为360mg/L 二氧化氯消毒液；
[0034]e、固态发酵培养基的杀菌:向步骤c所述的100g固态发酵培养基中，加入4.0g磷酸二氢钾、氯化钾2.5g、氯化钠5.0g，混匀后转移到带有机械搅拌桨的卧式不锈钢固态发酵罐中，再加入400mL步骤d所述的二氧化氯消毒液，室温下搅拌均匀，静置杀菌15min;
[0035]f、固态发酵:开动机械搅拌桨搅拌步骤e的固态发酵培养基8?lOmin，其目的是将培养基中残存的二氧化氯释放出来，以免在后续的培养中损伤解淀粉芽孢杆菌细胞。然后，将步骤b所述解淀粉芽孢杆菌B3以5%接种量接种到搅拌后的固态发酵培养基中，控制发酵温度34 V，每Sh搅拌一次，每次搅拌8?1min，发酵96h，得固态发酵醪；
[0036]g、干燥:采用60°C?70°C热风将步骤f所述的固态发酵醪干燥含水量30%以下；
[0037]h、粉碎:使用锤式粉碎机将步骤g所述的干燥后的固态发酵醪粉碎成60?70目的粉末，即获得解淀粉芽孢杆菌B3菌剂，其芽孢数达到220亿个/g，芽孢率达到99 %。菌剂包装后，存放在阴凉干燥处。
[0038]本发明与现有技术相比具有的有益效果为:
[0039]①使用二氧化氯消毒剂代替传统的高温杀菌来杀灭培养基中的细菌、酵母、霉菌等杂菌，极大地减少了热能消耗，降低了生产成本低，而且不会造成境污染。
[0040]②固态培养基采用二氧化氯消毒剂进行杀菌，时间短，生产效率高。
[0041]③二氧化氯消毒剂进行固态培养基的消毒，不会造成营养物质的破坏。
[0042]④二氧化氯消毒剂用量极低，100g固态发酵培养基仅需84?144mg二氧化氯。
【具体实施方式】
[0043]下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
[0044]实施例一:
[0045]a、种子培养基的配制及灭菌:于IL水中，加入30g葡萄糖、20g蛋白胨、5g酵母粉、2硫酸铵、5.0g氯化钠、4.0磷酸二氢钾、2.0g碳酸钙。按照所述配比，将各种成分称重后加入三角瓶中，室温下搅拌均匀，制得种子培养基；用8层纱布密封后放入高压灭菌锅中，115°C灭菌20min，灭菌后把三角瓶冷却至室温；
[0046]b、种子液的制备:挑取斜面保藏的解淀粉芽孢杆菌B3菌种2?3环，接种到步骤a中所述的种子培养基中，30°C、200rpm摇床振荡培养12h;
[0047]c、固态发酵培养基的预处理:10g固态发酵培养基由70g小麦麸皮、20g豆柏粉、1g玉米粉组成。按照上述配比，将小麦麸皮、豆柏粉、玉米粉混合均匀，即为固态发酵培养基。向100g固态发酵培养基中，加入250mL自来水，混合均匀，使其呈湿润状态，放置于30°C培养箱中静置培养7h ；
[0048]d、二氧化氯消毒液的配制:将3片二氧化氯消毒泡腾片(lg/片，二氧化氯含量12% )加入到IL水中，待泡腾片完全溶解，并用0.2M盐酸调整其pH值为6.0?6.2，即制成浓度为360mg/L 二氧化氯消毒液；
[0049]e、固态发酵培养基的杀菌:向步骤c所述的100g固态发酵培养基中，加入4.0g磷酸二氢钾、氯化钾2.5g、氯化钠5.0g，混匀后转移到带有机械搅拌桨的卧式不锈钢固态发酵罐中，再加入400mL步骤d所述的二氧化氯消毒液，室温下搅拌均匀，静置杀菌15min;
[0050]f、固态发酵:开动机械搅拌桨搅拌步骤e的固态发酵培养基8?lOmin，其目的是将培养基中残存的二氧化氯释放出来，以免在后续的培养中损伤解淀粉芽孢杆菌细胞。然后，将步骤b所述解淀粉芽孢杆菌B3以5%接种量接种到搅拌后的固态发酵培养基中，控制发酵温度34°C，每Sh搅拌一次，每次搅拌8?lOmin，发酵96h，得固态发酵醪。
[0051 ] g、干燥:采用60°C?70°C热风将步骤f所述的固态发酵醪干燥含水量30%以下。
[0052]h、粉碎:使用锤式粉碎机将步骤g所述的干燥后的固态发酵醪粉碎成60?70目的粉末，即获得解淀粉芽孢杆菌B3菌剂，其芽孢数达到220亿个/g，芽孢率达到99 %。菌剂包装后，存放在阴凉干燥处。
[0053]实施例二
[0054]a、种子培养基的配制及灭菌:于IL水中，加入20g葡萄糖、20g蛋白胨、1g酵母粉、2.5硫酸铵、5.5g氯化钠、4.5g磷酸二氢钾、1.Sg碳酸钙。按照所述配比，将各种成分称重后加入三角瓶中，室温下搅拌均匀，制得种子培养基；用8层纱布密封后放入高压灭菌锅中，121°C灭菌15min，灭菌后把三角瓶冷却至室温；
[0055]b、种子液的制备:挑取斜面保藏的解淀粉芽孢杆菌B3菌种2?3环，接种到步骤a中所述的种子培养基中，30°C、180rpm摇床振荡培养14h;
[0056]c、固态发酵培养基的预处理:10g固态发酵培养基由80g小麦麸皮、15g豆柏粉、5g玉米粉组成。按照上述配比，将小麦麸皮、豆柏粉、玉米粉混合均匀，即为固态发酵培养基。向100g固态发酵培养基中，加入200mL自来水，混合均匀，使其呈湿润状态，放置于培养箱中28 °C静置培养8h ；
[0057]d、二氧化氯消毒液的配制:将2片二氧化氯消毒泡腾片(lg/片，二氧化氯含量12% )加入到IL水中，待泡腾片完全溶解，并用0.2M盐酸调整其pH值为6.0?6.2，即制成浓度为240mg/L 二氧化氯消毒液；
[0058]e、固态发酵培养基的杀菌:向步骤c所述的100g固态发酵培养基中，加入5.0g磷酸二氢钾、氯化钾3.0g、氯化钠6.0g，混匀后转移到带有机械搅拌桨的卧式不锈钢固态发酵罐中，再加入350mL步骤d所述的二氧化氯消毒液，室温下搅拌均匀，静置杀菌20min;
[0059]f、固态发酵:开动机械搅拌桨搅拌步骤e的固态发酵培养基8?lOmin，其目的是将培养基中残存的二氧化氯释放出来，以免在后续的培养中损伤解淀粉芽孢杆菌细胞。然后，将步骤b所述解淀粉芽孢杆菌B3以4%接种量接种搅拌后的固态发酵培养基中，控制发酵温度300C，每8h搅拌一次，每次搅拌8?1min，发酵10h，得固态发酵醪。
[0060]g、干燥:采用60°C?70°C热风将步骤f所述的固态发酵醪干燥含水量30 %以下。
[0061]h、粉碎:使用锤式粉碎机将步骤g所述的干燥后的固态发酵醪粉碎成60?70目的粉末，即获得解淀粉芽孢杆菌B3菌剂，其芽孢数达到200亿个/g，芽孢率达到97 %。菌剂包装后，存放在阴凉干燥处。
[0062]以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的数据范围和原则之内，所作的任何修改、同等替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种固态发酵生产解淀粉芽孢杆菌菌剂的方法，其特征是包括以下步骤: a、种子培养基的配制及灭菌:于IL水中，加入20?30g葡萄糖、10?20g蛋白胨、5?1g酵母粉、2?2.5硫酸钱、5.0?5.5g氯化钠、4.0?4.5g磷酸二氢钾、1.8?2.0g碳酸|丐，按照所述配比，将各种成分称重后加入三角瓶中，室温下搅拌均匀，制得种子培养基;用8层纱布密封后放入高压灭菌锅中，115°C?121°C灭菌15?20min，灭菌后把三角瓶冷却至室温； b、种子液的制备:挑取斜面保藏的解淀粉芽孢杆菌B3菌种2?3环，接种到步骤a中所述的种子培养基中，30°C、180?200rpm摇床振荡培养12?14h; C、固态发酵培养基的预处理:10g固态发酵培养基由70?80g小麦麸皮、15?20g豆柏粉、5?1g玉米粉组成；按照上述重量配比，将小麦麸皮、豆柏粉、玉米粉混合均匀，即为固态发酵培养基；向100g固态发酵培养基中，加入200?250mL自来水，混合均匀，使其呈湿润状态，放置于培养箱中28 0C?30 0C静置培养7?8h; d、二氧化氯消毒液的配制:将2?3片二氧化氯消毒泡腾片加入到IL水中，待泡腾片完全溶解，并用0.2M盐酸调整其pH值为6.0?6.2，即制成浓度为240?360mg/L二氧化氯消毒液； e、固态发酵培养基的杀菌:向步骤c所述的100g固态发酵培养基中，加入4?5g磷酸二氢钾、氯化钾2.5?3g、氯化钠5.0?6g，混匀后转移到带有机械搅拌桨的卧式不锈钢固态发酵罐中，再加入350?400mL步骤d所述的二氧化氯消毒液，室温下搅拌均匀，静置杀菌15?20min； f、固态发酵:开动机械搅拌桨搅拌步骤e的固态发酵培养基8?lOmin，其目的是将培养基中残存的二氧化氯释放出来，以免在后续的培养中损伤解淀粉芽孢杆菌细胞，然后，将步骤b所述解淀粉芽孢杆菌B3以4%?5%接种量接种到搅拌后的固态发酵培养基中，控制发酵温度30?34 °C，每8h搅拌一次，每次搅拌8?1min，发酵96?10h，得固态发酵醪。 g、干燥:采用60°C?70°C热风将步骤f所述的固态发酵醪干燥含水量30%以下。 h、粉碎:使用锤式粉碎机将步骤g所述的干燥后的固态发酵醪粉碎成60?70目的粉末，即获得解淀粉芽孢杆菌B3菌剂，将解淀粉芽孢杆菌B3菌剂包装后，存放在阴凉干燥处。2.根据权利要求1所述的固态发酵生产解淀粉芽孢杆菌菌剂的方法，其特征是:所述步骤c中10g固态发酵培养基由70g小麦麸皮、20g豆柏粉、1g玉米粉组成。3.根据权利要求1所述的固态发酵生产解淀粉芽孢杆菌菌剂的方法，其特征是:所述步骤c中100g固态发酵培养基，加入200?250mL自来水，混合均匀，使其呈湿润状态，放置于30°C静置培养7?8h。4.根据权利要求1所述的固态发酵生产解淀粉芽孢杆菌菌剂的方法，其特征是:所述步骤d中氧化氯消毒液的pH值为6.0?6.2、二氧化氯浓度为300?360mg/L。5.根据权利要求1所述的固态发酵生产解淀粉芽孢杆菌菌剂的方法，其特征是:所述步骤e中100g固态发酵培养基加入380?400mL二氧化氯消毒液，室温下搅拌均匀，静置杀菌18?20mino6.根据权利要求1所述的固态发酵生产解淀粉芽孢杆菌菌剂的方法，其特征是，所述步骤h中所获得的解淀粉芽孢杆菌菌剂的芽孢数达到200?220亿个/g，芽孢率达到97%?99%。7.根据权利要求1所述的固态发酵生产解淀粉芽孢杆菌菌剂的方法，其特征是包括以下具体步骤: a、种子培养基的配制及灭菌:于IL水中，加入30g葡萄糖、20g蛋白胨、5g酵母粉、2硫酸铵、5.0g氯化钠、4.0磷酸二氢钾、2.0g碳酸钙。按照所述配比，将各种成分称重后加入三角瓶中，室温下搅拌均匀，制得种子培养基；用8层纱布密封后放入高压灭菌锅中，115°C灭菌20min，灭菌后把三角瓶冷却至室温； b、种子液的制备:挑取斜面保藏的解淀粉芽孢杆菌B3菌种2?3环，接种到步骤a中所述的种子培养基中，30°C、200rpm摇床振荡培养12h; c、固态发酵培养基的预处理:10g固态发酵培养基由70g小麦麸皮、20g豆柏粉、1g玉米粉组成。按照上述配比，将小麦麸皮、豆柏粉、玉米粉混合均匀，即为固态发酵培养基。向I OOOg固态发酵培养基中，加入250mL自来水，混合均匀，使其呈湿润状态，放置于30 °C培养箱中静置培养7h; d、二氧化氯消毒液的配制:将3片二氧化氯消毒泡腾片(lg/片，二氧化氯含量12%)加入到IL水中，待泡腾片完全溶解，并用0.2M盐酸调整其pH值为6.0?6.2，即制成浓度为360mg/L 二氧化氯消毒液； e、固态发酵培养基的杀菌:向步骤c所述的100g固态发酵培养基中，加入4.0g磷酸二氢钾、氯化钾2.5g、氯化钠5.0g，混匀后转移到带有机械搅拌桨的卧式不锈钢固态发酵罐中，再加入400mL步骤d所述的二氧化氯消毒液，室温下搅拌均匀，静置杀菌15min; f、固态发酵:开动机械搅拌桨搅拌步骤e的固态发酵培养基8?lOmin，其目的是将培养基中残存的二氧化氯释放出来，以免在后续的培养中损伤解淀粉芽孢杆菌细胞。然后，将步骤b所述解淀粉芽孢杆菌B3以5 %接种量接种到搅拌后的固态发酵培养基中，控制发酵温度340C，每8h搅拌一次，每次搅拌8?1min，发酵96h，得固态发酵醪； g、干燥:采用60°C?70°C热风将步骤f所述的固态发酵醪干燥含水量30%以下； h、粉碎:使用锤式粉碎机将步骤g所述的干燥后的固态发酵醪粉碎成60?70目的粉末，即获得解淀粉芽孢杆菌B3菌剂，其芽孢数达到220亿个/g，芽孢率达到99%。菌剂包装后，存放在阴凉干燥处。
【文档编号】C12N1/20GK105886430SQ201610268604
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2016年4月27日
【发明人】卢麦田, 赵国群, 卢士康
【申请人】石家庄大众肥业有限公司