具有脂肪酶抑制作用的绵马次酸类化合物及其应用
【专利摘要】提供绵马次酸类化合物sarothralen A、Rxj?43、Rxj?19或其药用盐，以其为有效成分和至少一种药学上可接受的载体组成的药物组合物，其制备方法，以及其在制备脂肪酶抑制药物中的应用。Sarothralen A为已知结构，Rxj?43和Rxj?19为新化合物绵马次酸类(二聚间苯三酚类衍生物)，具有较好的体外脂肪酶抑制活性，作为脂肪酶抑制药物有较多优势。
【专利说明】
具有脂肪酶抑制作用的绵马次酸类化合物及其应用
技术领域：
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体地说，涉及具有脂肪酶抑制活性的绵马次酸类化 合物sarothralen六、1?幻-43、1?幻-19及其制备方法，以该化合物为活性成分的药物组合物， 以及其在治疗肥胖病中的应用。
【背景技术】：
[0002] 胰和胃脂肪酶是肠道中脂肪消化吸收所必需的。食物中的脂肪被水解为单酰甘油 和游离脂肪酸后在肠道被吸收，然后在体内重新合成脂肪，造成脂肪堆积，最终导致肥胖。 应用脂肪酶抑制剂可有效抑制肠道中脂肪酶对脂肪的分解催化作用，达到减少脂肪吸收， 控制和治疗肥胖的目的。因此，开发和应用有效的脂肪酶抑制剂受到人们的关注。
[0003] 金丝桃属(Hypericum)是藤黄科(Gutt if erae)的一个大属，全世界约400种，除南 北两极地或荒漠地及大部分热带低地外世界广布。我国约有55种8亚种，几产于全国各地， 但主要集中在西南地区。除了用于观赏，金丝桃属植物具有抗抑郁、抗病毒、抗菌和抗肿瘤 等多种药理活性。
[0004] 地耳草(H. japonicum Thunb.):《中药大辞典》记载品种，另丨」名田基黄、雀舌草。一 年生草本，产于江苏、浙江、四川、云南等地。具有清热利湿，消肿解毒等功效，用于黄疸热 淋，肿毒，毒蛇咬伤。文献报道该植物的化学成分有黄酮、xanthone等。迄今为止，现有技术 中未有绵马次酸类化合物sarothralen六、1^」-43、1^〇-19对脂肪酶抑制的生物活性的报 道。
【发明内容】
：
[0005] 本发明目的在于提供从地耳草(H.japonicum)中分离得到的绵马次酸类化合物 sarothralen A、Rxj-43、Rxj-19,其制备方法，在药物中特别是在治疗肥胖病药物中的应 用。
[0006] 为了实现本明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：
[0007] 如下结构式所示的化合物Rxj -43、Rxj-19或其药用盐。
[0008]
[0009]含有治疗有效量的绵马次酸类化合物Rxj_43、Rxj-19任一种或两种的混合物或其 药用盐和药学上可接受的载体的药物组合物。
[0010] 如下结构式所示的化合物Sarothralen A、Rxj-43、Rxj-19或其药用盐在制备脂肪 酶抑制剂中的应用，
[0011]
[0012」化合物Sar0thralenA、RXj-43、R Xj-19或其药用盐在制备治疗肥胖病的药物中的 应用。
[0013] 如所述的绵马次酸类化合物1^」-43、1^」-19、531'〇1:11抑16114或其药用盐，其中所 述的药用盐为是指药学上可接受的盐，是与有机酸形成的盐，所述的有机酸为酒石酸、甲 酸、乙酸、乙二酸、丁酸、马来酸、琥珀酸、己二酸、藻酸、柠檬酸、天冬氨酸、苯磺酸、樟脑酸、 樟脑磺酸、二葡糖酸、环戊烷丙酸、十二烷基硫酸、乙磺酸、葡庚糖酸、甘油磷酸、庚酸、己酸、 延胡索酸、2-羟基乙磺酸、乳酸、甲磺酸、烟酸、2-萘磺酸、扑酸、果胶酯酸、3-苯基丙酸、新戊 酸、丙酸、对 -甲苯磺酸和i 烧酸。
[0014] 制备所述的绵马次酸类化合物Rx j-43、Rxj -19的方法，取地耳草干燥全草，粉碎， 用甲醇室温下冷浸2次，每次24小时，合并提取液，减压蒸馏浓缩，得浸膏，浸膏用100-200目 硅胶拌样，硅胶柱层析，用氯仿洗脱得到氯仿段，氯仿段用1.5倍量的聚酰胺拌样，过MCI柱， 以7:3-10:0的Me0H-H 20进行梯度洗脱，得到5个大段A-E，B段经硅胶柱层析，以1:0-0:1的石 油醚-丙酮进行梯度洗脱，得到4个小段B1-B4,其中B3段经制备HPLC，甲醇-水，95:5分离纯 化后得到sarothralen A;同样，B4部分经制备HPLC，甲醇-水，95:5分离纯化后得到Rxj-19，C段用100-200目硅胶拌样，硅胶柱层析，以1:0-0:1的石油醚-丙酮进行梯度洗脱，得到5 个部分C1-C5，其中C2部分经制备HPLC，甲醇-水，95:5分离纯化后得到Rx j-43。
[0015] 制备绵马次酸类化合物sarothralen A的方法，取地耳草干燥全草，粉碎，用甲醇 室温下冷浸2次，每次24小时，合并提取液，减压蒸馏浓缩，得浸膏，浸膏用100-200目硅胶拌 样，硅胶柱层析，用氯仿洗脱得到氯仿段，氯仿段用1.5倍量的聚酰胺拌样，过MCI柱，以7:3-10:0的Me0H-H 20进行梯度洗脱，得到5个大段A-E，B段经硅胶柱层析，以1:0-0:1的石油醚-丙酮进行梯度洗脱，得到4个小段B1-B4，其中B3段经制备HPLC，甲醇-水，95:5分离纯化后得 到sarothralen A〇
[0016] Sarothralen A为已知结构，Rx j-43和Rxj-19为新化合物绵马次酸类(二聚间苯三 酚类衍生物），具有较好的体外脂肪酶抑制活性，作为脂肪酶抑制药物有较多优势。 SarothralenA、Rxj-43、Rxj-19对脂肪酶有较强的抑制作用，可作为活性成分用于制备减肥 药物制剂，具有较好药用价值。
【附图说明】： 图1为本发明化合物sarothralen六、1^〇-43、1^〇-19的结构示意图。
【具体实施方式】：
[0017] 下面结合附图，用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以 此来限定本发明。
[0018] 实施例1:
[0019] 1、化合物sarothralen A、Rxj_43、Rxj_19的制备及结构数据：
[0020] 地耳草干燥全草（14kg)，粉碎，用甲醇室温下冷浸2次，每次24小时，合并提取液， 减压蒸馏浓缩，得浸膏2.5kg。粗提物用100-200目硅胶拌样，硅胶柱层析，用氯仿洗脱得到 氯仿段（164.2g)。氯仿段用1.5倍量的聚酰胺拌样，过MCI柱，以Me0H-H 20(7:3-10:0)进行梯 度洗脱，得到5个大段(A-E)』段(25.5g)经硅胶柱层析，以石油醚-丙酮（1:0-0:1)进行梯度 洗脱，得到4个小段(B1-B4)。其中B3段(3.0g)经制备HPLC(甲醇-水，95:5)分离纯化后得到 sarothralen A(520mg);同样，B4部分(6.4g)经制备HPLC(甲醇-水，95: 5)分离纯化后得到 Rxj-19(230mg) X段(25 · 5g)用100-200目硅胶拌样，硅胶柱层析，以石油醚-丙酮（1:0-0:1) 进行梯度洗脱，得到5个部分(C1-C5)，其中C2部分(3.2g)最终经制备HPLC(甲醇-水，95:5) 分离纯化后得到Rxj-43(850mg)。
[0021 ]化合物Rxj-43、Rxj-19的结构解析：
[0022] 化合物Rxj-43,无色胶状物。ESI-MS谱给出准分子离子峰为m/z 581[M-H]_，结合 高分辨负离子^^51-]\^(111/2[]\1-!1]-581.3117，。31。(1€(^581.3114)及13(^^^?1'匪1?谱图 提供的信息，确定其分子式为C34H46〇8，计算不饱和度为12。群光谱在204(4.45)，225(4.32)， 305(4.27)，340(4.11)处有吸收，说明分子中存在较长的共辄系统。分析咕和 13C NMR谱，再 结合HSQC谱表明化合物1中含有34个碳信号，包括9个甲基，5个亚甲基，4个次甲基(包括2个 烯碳），16个季碳(其中1个饱和季碳）。仔细分析这些数据表明Rxj-43为绵马次酸类化合物， 且与已知化合物sarothralen A很相似。最终，Rxj-43被确定为sarothralen A的衍生物， sarothralen A中C-7位异丙基被2中的仲丁基取代。化合物Rxj-19为化合物2的15'氧化产 物，并伴随着16'，17'双键的形成，C-7位羰基上携带的是一个仲丁基。化合物的 1Η和13C NMR 谱数据如表1和2所示。
[0023]表1.化合物 Rxj-43 和 Rxj-19的NMR 13C 谱数据(acetone)
[0024]
[0025]
[0026] 表2.化合物Rxj-43和Rxj-19的NMR 4谱数据(acetone)
[0027]
[0028]
[0029] 实施例2
[0030] Sarothralen六、1^」-43、1^」-19的脂肪酶抑制活性：
[0031 ] 试剂来源:猪胰脂肪酶(PPL)购自阿拉丁试剂公司；p-nitrophenyl butyrate(p-NPB)、0rlistat购自Sigma公司；D-PBS购自Hyclone公司；无水氯化f丐为成都市科龙化工试 剂厂产品。
[0032]实验方法:在96孔酶标板上，将待测化合物与PPL溶液充分混合，每个浓度均设定3 个重复孔，37 °C，15min ;加入p-NPB，混合均匀，37 °C，15min，酶标仪测定0D值（400nm/ 630nm)，检测波长为400nm，参考波长为630nm。实验同时设置空白对照孔和Orlistat阳性对 照孔。
[0033]计算公式：
[0034] PPL活性抑制率（％ ) = (1-样品0D值/实验对照孔0D值）X 100%
[0035] IC5〇(50%concentration of inhibition)按Reed&Muench法计算。检测结果见表3 所示。
[0036] 表3、Sarothralen八、1^」-43、1^」-19的脂肪酶抑制的1〇5〇值
[0039]由表3可见：331"〇1:11抑16114、1^」-43、1^」-19对脂肪酶有较强的抑制作用，可作为
[0037]
[0038] 活性成分用于制备减肥药物制剂，具有较好药用价值。
[0040] 实施例3:
[0041] 按实施例 1 制得化合物Sarothralen A、Rxj_43、Rxj_19,，按化合物Sarothralen A、Rxj-43、Rxj-19任一种或任几种混合与赋形剂重量比1:1或1:2的比例加入赋形剂，制粒 压片。
[0042] 实施例4:
[0043] 按实施例1制得化合物Sarothralen A、Rxj-43、Rxj-19,，按常规胶囊制剂方法制 成胶囊。
[0044] 实施例5:
[0045] 先按实施例1制得化合物Sar〇thra 1 en A、Rxj-43、Rxj-19，再按下述方法制成片 剂。
[0046] 片剂:化合物Sarothralen A、Rxj_43、Rxj_19任一种或任几种混合100mg，淀粉适 量，玉米浆适量，硬脂酸镁适量。制备方法:将化合物与助剂混合，过筛，在合适的容器中均 匀混合，把得到的混合物制粒压片。
[0047] 实施例6:
[0048] 胶囊剂:化合物Sarothralen A、Rxj-43、Rxj-19任一种或任几种混合100mg，淀粉 适量，硬脂酸镁适量。
[0049] 制备方法:将化合物1-4任一种或任几种混合与助剂混合，过筛，在合适的容器中 均匀混合，把得到的混合物装入硬明胶胶囊。
[0050] 实施例7:
[0051 ] 片剂：实施例1所得化合物Sarothralen A、Rxj-43、Rxj-19任一种或任几种混合 l〇mg，乳糖180mg，淀粉55mg，硬脂酸镁5mg;
[0052] 制备方法:将化合物Sarothralen A、Rxj-43、Rxj-19任一种或任几种混合、乳糖和 淀粉混合，用水均匀湿润，把湿润后的混合物过筛并干燥，再过筛，加入硬脂酸镁，然后将 混合物压片，每片重250mg，化合物含量为10mg。
[0053] 实施例8:
[0054] 安瓿剂:实施例1所得化合物Sarothralen A、Rxj-43、Rxj-19任一种或任几种混合 2mg，氯化钠 10mg;
[0055] 制备方法:将化合物Sarothralen A、Rxj-43、Rxj-19任一种或任几种混合和氯化 钠溶解于适量的注射用水中，过滤所得溶液，在无菌条件下装入安瓿瓶中。
[0056] 实施例9:
[0057] 胶囊剂:实施例1所得化合物Sarothralen A、Rxj-43、Rxj-19任一种或任几种混合 1 〇mg，乳糖187mg，硬脂酸镁3mg;
[0058] 制备方法:将化合物Sarothralen A、Rxj-43、Rxj-19任一种或任几种混合与助剂 混合，过筛，均匀混合，把得到的混合物装入硬明胶胶囊，每个胶囊重200mg，活性成分含量 为10mg。
【主权项】
1. 如下结构式所示的化合物Rxj-43、Rxj-19或其药用盐。2. 含有治疗有效量的权利要求1所示的绵马次酸类化合物任一种或两种的混合物或其 药用盐和药学上可接受的载体的药物组合物。3. 如下结构式所示的化合物Sarothralen A、Rxj-43、Rxj-19或其药用盐在制备脂肪酶 ^出I商I出的庶田4. 化合物Sarothralen A、Rxj-43、Rxj-19或其药用盐在制备治疗肥胖病的药物中的应 用。5. 如权利要求1或2或3或4所述的绵马次酸类化合物Rx j-43、Rxj-19、Sar0thra 1 en A或 其药用盐，其特征在于所述的药用盐为是指药学上可接受的盐，是与有机酸形成的盐，所述 的有机酸为酒石酸、甲酸、乙酸、乙二酸、下酸、马来酸、班巧酸、己二酸、藻酸、巧樣酸、天冬 氨酸、苯横酸、精脑酸、精脑横酸、二葡糖酸、环戊烧丙酸、十二烷基硫酸、乙横酸、葡庚糖酸、 甘油憐酸、庚酸、己酸、延胡索酸、2-径基乙横酸、乳酸、甲横酸、烟酸、2-糞横酸、扑酸、果胶 醋酸、3-苯基丙酸、新戊酸、丙酸、对-甲苯横酸和十一烧酸。6. 制备权利要求1所述的绵马次酸类化合物Rxj-43、Rxj-19的方法，取地耳草干燥全 草，粉碎，用甲醇室溫下冷浸2次，每次24小时，合并提取液，减压蒸馈浓缩，得浸膏，浸膏用 100-200目硅胶拌样，硅胶柱层析，用氯仿洗脱得到氯仿段，氯仿段用1.5倍量的聚酷胺拌 样，过MCI柱，^7:3-10:0的MeOH-出0进行梯度洗脱，得到5个大段A-E，B段经硅胶柱层析，W 1:0-0:1的石油酸-丙酬进行梯度洗脱，得到4个小段B1-B4,其中B3段经制备HPLC，甲醇-水， 95: 5分离纯化后得到sarothralen A;同样，B4部分经制备HPLC，甲醇-水，95:5分离纯化后 得到Rx j-19，C段用100-200目硅胶拌样，硅胶柱层析，W1:0-0:1的石油酸-丙酬进行梯度洗 脱，得至化个部分C1-C5，其中C2部分经制备HPLC，甲醇-7jC，95:5分离纯化后得到Rx j-43。7. 制备权利要求3或4所述应用中所设及到的绵马次酸类化合物sarothralen A的方 法，取地耳草干燥全草，粉碎，用甲醇室溫下冷浸2次，每次24小时，合并提取液，减压蒸馈浓 缩，得浸膏，浸膏用100-200目硅胶拌样，硅胶柱层析，用氯仿洗脱得到氯仿段，氯仿段用1.5 倍量的聚酷胺拌样，过MCI柱，^7:3-10 :0的MeOH-此0进行梯度洗脱，得到5个大段A-E，B段 经硅胶柱层析，如：0-0:1的石油離-丙酬进行梯度洗脱，得到4个小段B1-B4,其中B3段经制 备HPLC，甲醇-水，95:5分离纯化后得到saro化ralen Ao
【文档编号】A61K31/122GK105906500SQ201610255786
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年4月22日
【发明人】许刚, 杨兴伟, 李艳萍, 白雪
【申请人】中国科学院昆明植物研究所