盐酸氨溴索的药物组合物及其在生物医药中的应用
【专利摘要】本发明公开了盐酸氨溴索的药物组合物及其在生物医药中的应用，本发明提供的盐酸氨溴索的药物组合物中含有盐酸氨溴索和一种从羌活的干燥根及根茎中分离得到的结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)，本发明提供的盐酸氨溴索与化合物(Ⅰ)组合物可以显著降低高血压大鼠模型的血管紧张素Ⅱ浓度和肾素活性，且组合物的效果优于盐酸氨溴索或化合物(Ⅰ)单独的作用效果。盐酸氨溴索与化合物(Ⅰ)组合物可以开发成治疗肾血管性高血压的药物，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
盐酸氨漠索的药物组合物及其在生物医药中的应用
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，设及盐酸氨漠索的新用途，具体设及盐酸氨漠索的药 物组合物及其在生物医药中的应用。
【背景技术】
[0002] 盐酸氨漠索具有粘液排除促进作用及溶解分泌物的特性，它可促进呼吸道内部粘 稠分泌物的排除及减少粘液的滞留，因而显著促进排疲，改善呼吸状况。应用本品治疗时， 病人粘液的分泌可恢复至正常状况。咳嗽及疲量通常显著减少，呼吸道粘膜上的表面活性 物质因而能发挥其正常的保护功能。适用于伴有疲液分泌不正常及排疲功能不良的急性、 慢性呼吸系统疾病，例如:慢性支气管炎急性加重，喘息型支气管炎、支气管哮喘的桂疲治 疗;术后肺部并发症的预发性治疗;早产儿及新生儿婴儿呼吸窘迫综合症(IRDS)的治疗。
[0003] 肾素-血管紧张素系统(RAS)活性增高是造成血压升高的重要机制之一，其中血管 紧张素 n (Angn )与血压升高有直接关系。在肾动脉狭窄后，肾血流量减少促使肾素释放增 多，血浆中血管紧张素原生成血管紧张素 n增多。循环系统的血管紧张素 n通过促进醒固 酬的分泌影响水电解质平衡，增加血管张力等因素而发挥作用。随着血压的持续长时间升 高，局部组织（屯、、脑、血管)增多的血管紧张素 n与其它生长因子刺激屯、血管壁发生向屯、性 血管重构是维持血压升高的病理基础。抑制高血压大鼠模型的血管紧张素 n浓度和肾素活 性可W控制高血压病情的进一步发展。
[0004] 迄今为止，尚未见盐酸氨漠索及其药物组合物与肾血管性高血压的相关性报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种盐酸氨漠索的药物组合物，该药物组合物中含有盐酸 氨漠索和一种结构新颖的天然产物，盐酸氨漠索和该天然产物可W协同治疗肾血管性高血 压。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得W实现的：
[0007] -种具有下述结构式的化合物(I)，
[OOOi
-种盐酸氨漠索的药物组合物，包括盐酸氨漠索、如权利要求1所述的化合物（I) 和药学上可W接受的载体，制备成需要的剂型。
[0010]进一步地，药学上可W接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、 崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。
[ocm]进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、 膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
[0012] 上述化合物（I)的制备方法，包含W下操作步骤：（a)将弟活的干燥根及根茎粉碎， 用65~85 %乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋和水饱 和的正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b)步骤(a)中 正下醇萃取物用大孔树脂除杂，先用6%乙醇洗脱8个柱体积，再用70%乙醇洗脱8个柱体 积，收集70 %洗脱液，减压浓缩得70 %乙醇洗脱浓缩物；（C)步骤(b)中70 %乙醇洗脱浓缩物 用正相硅胶分离，依次用体积比为50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到4 个组分；（d)步骤(C)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为10:1、5:1和2:1的二 氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶 分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱体积洗脱液，洗脱液 减压浓缩得到化合物(I)。
[0013] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)用75%乙醇热回流提取，合并提取 液。
[0014] 进一步地，化合物(I)的制备方法中，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0015] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)中用二氯甲烧代替乙酸乙醋进行萃 取，得到二氯甲烧萃取物。
[0016] 上述化合物(I)在制备治疗肾血管性高血压的药物中的应用。
[0017] 上述盐酸氨漠索的药物组合物在制备治疗肾血管性高血压的药物中的应用。
[0018] 本发明的优点:本发明提供的盐酸氨漠索的药物组合物中含有盐酸氨漠索和一种 从弟活的干燥根及根茎中分离得到的结构新颖的天然产物，盐酸氨漠索和该天然产物单独 作用时，对肾血管性高血压具有治疗作用;二者联合作用时，对肾血管性高血压的治疗效果 进一步提高，可W开发成治疗肾血管性高血压的药物。
【具体实施方式】
[0019] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明保护范 围。
[0020] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0021] 分离方法：（a)将弟活的干燥根及根茎(3kg)粉碎，用75%乙醇热回流提取(2^X3 次），合并提取液，浓缩至无醇味(化），依次用石油酸(化X3次）、乙酸乙醋(化X3次)和水饱 和的正下醇(化X3次)萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b) 步骤(a)中正下醇萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用6%乙醇洗脱8个柱体积，再用70%乙 醇洗脱8个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（C)步骤(b)中70% 乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为50 :1 (8个柱体积）、25 :1 (8个柱体积）、 15:1(8个柱体积)和5:1(10个柱体积)的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(C) 中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为10:1(8个柱体积）、5:1(10个柱体积)和2: 1(5个柱体积）的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基娃 烧键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱体 积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物（I) (370mg，HPLC归一化纯度大于98 % )。
[0022] 结构确证：白色粉末，烙点136~138°C;HR-ESI-MS显示[M+化]+为m/z 387.2514， 结合核磁特征可得分子式为C22出6〇4,不饱和度为5。核磁共振氨谱数据SH(ppm，DMS0-d6， 500MHz):H-l(0.86，m)，H-l(1.58，dt，J=13.5,5.0)，H-2(1.29，m)，H-2(1.44，m)，H-3 (l.〇l，m)，H-3(1.25，m)，H-5(0.84，d，J=11.6)，H-6(l.ll，m)，H-6(1.49，m)，H-7(1.27，m)， H-7(1.68，dt，J=12.8,4.3)，H-9(1.21，m)，H-ll(1.22，m)，H-ll(1.40，m)，H-12(1.29，m)， H-12(1.46，m)，H-15(5.20，s，2H)，H-16(1.16，s)，H-17(1.14，s)，H-18(0.79，s)，H-19 (0.71，S)，H-20 (0.72，S)，15-OAc (2.17，S);核磁共振碳谱数据Sc(ppm，DMSO-ds，125MHz): 39.2(CH2，1-C)，18.1(CH2,2-C)，41.4(CH2,3-C)，32.8(C，4-C)，55.5(CH，5-C)，20.0(C 出，6- C)，43.6(Ol2,7-C)，81.1(C，8-C)，61.5(CH，9-C)，38.7(C，10-C)，17.9(ai2，ll-C)，38.8 (C 此，12-C)，87.2(C，13-C)，210.8(C，14-C)，67.1(Ol2，15-C)，26.3(CH3，16-C)，23.8(ai3， 17-C)，31.8(CH3，18-C)，22.2(Ol3，19-C)，15.1(CH3,20-C)，170.1(C，15-0AC)，20.3(CH3， 15-OAC)。红外光谱表明该化合物含有醋基（1740細-1)。咕-匪R谱显示了五个甲基信号5 册.71(3，出-19)，0.72(3，出-20)，0.79(3，曲-18)，1.14(3，曲-17)和1.16(3，出-16)，一个乙 酷氧基姐2.17 (3H，S)。I3C-NMR谱显示出22个碳信号，包括六个甲基，八个亚甲基(一个连氧 亚甲基），两个次甲基，W及六个季碳(两个幾基碳，两个含氧季碳）。根据HMB村普中此-12与 C-13，Me-16与C-12和C-13，Me-17与C-7、C-8和C-9，Me-18与C-5，Me-19与C-3和C-4，Me-20与 C-I、C-5和C-9的相关性可W构建该化合物的立体结构。歷BC谱中此-15(如5.20)和甲基质 子信号（SH2.17)与幾基碳(SC170.1)的相关性表明乙酷氧基位于C-15位。N犯SY谱中，Me-20 (姐 0.72)、Me-17(姐 1.14)和 H-Iie(姐 1.22)，护110、]?6-16(姐1.16)与]\16-17，^及16-17和 H-70(SH1.68)的相关性表明Me-17，Me-20和Me-16为0构型。综合氨谱、碳谱、HMBC谱和N犯SY 谱，W及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如下所示，立体构型进一步通过 EC的式验确定，理论值与实验值基本一致。该化合物化学式及碳原子编号如下：
[002；
[0024] 实施例2:药理作用 [002引1、材料与方法
[0026] 1.1 动物
[0027] SD大鼠，体重200~250g，购于中南大学湘雅医学院动物部。实验前在本实验室喂 养Iwk，测定其基础血压。
[002引1.2试剂与样品
[0029] 盐酸氨漠索购自中国药品生物制品检定所。化合物（I)自制，制备方法见实施例1。 血管紧张素 n、肾素活性检测试剂盒购于解放军总院放射免疫研究所;其余均为市售分析 纯。
[0030] 1.3 仪器
[0031] 高速离屯、机(法国产）；电泳系统(北京六一仪器产）；鼠尾测压仪化X-I型）购于中 南大学湘雅医学院；生理记录二道仪由成都仪器厂生产。
[0032] 1.4大鼠分组及模型制备
[0033] 大鼠腹腔注射戊己比妥钢(60mg ? kg-i)麻醉后，从腹部左侧切口，分离左侧肾动 脉，用直径为0.3mm的银夹夹住肾动脉使其狭窄后，放回腹腔，脏器恢复原位，关闭腹腔。假 手术组只实行相同的手术程序，而不结扎肾动脉。待术后3d，动物恢复后，从尾动脉测定收 缩压，连续观察血压的变化。高血压模型W术后4wk，选取血压维持在160mmHg(21.3kPa)W 上动物用于实验。大鼠分为6组，分别为正常对照组、假手术组、模型对照组、盐酸氨漠索组 (60mg ? kg-i)、化合物（I)组(60mg ? kg-i)、盐酸氨漠索与化合物（I)组合物组【30mg ? kg-i盐 酸氨漠索+30mg ? kg-i化合物（I)】。
[0034] 1.5血管紧张素 n浓度测定
[0035] 实验结束时，颈动脉插管连接压力感受器于生理二道仪测定平均动脉压，然后取 血4ml置于含有抑肤酶的试管中，于4°C离屯、3000r .min-iaOmin，取血浆保存于-20°C备用。 取冰冻的血浆标本在流动的冷水浴中快速融化，取样放入冰水浴中。试管分组编号，加样步 骤参照试剂盒程序说明表进行。放射性标记物为125IAngn。技术特性指标为：灵敏度为 IOng ? L-1;曲线范围为25~SOOng ? L-1;精密度为：批内变异（CVwK5%，批间变异（CVbK 10%。
[0036] 1.6肾素活性测定
[0037] 通过单位时间内生成血管紧张素 I的速率来确定。取双份血浆，一份直接与抗血清 反应，测定其血管紧张素 I的浓度(对照管），另一份在37°C溫育一定时间，再与抗血清反应， 测定其血管紧张素 I的浓度(测定管）。测定管的浓度减去对照管的浓度，再除于被溫育时 间，则为单位时间内血管紧张素 I的产生速率，即为肾素活性。
[003引1.7统计学方法
[0039] 数据资料用x±s表示。数据分析采用方差分析及化wman-Keuls多重比较t检验。
[0040] 2、实验结果
[0041 ] 2.1对高血压大鼠模型血浆血管紧张素 n的变化
[0042] 与正常对照组比较，模型对照组大鼠血浆血管紧张素 n水平显著升高(P<0.01); 与模型对照组比较，盐酸氨漠索与化合物（I)组合物组血浆血管紧张素 n水平显著降低(P< 0.01);与模型对照组比较，盐酸氨漠索组、化合物（I)组血浆血管紧张素 n水平降低（p< 0.05)。
[0043] 试验结果见表1。
[0044] 2.2对高血压大鼠模型血浆肾素活性的变化
[0045] 与正常对照组比较，模型对照组大鼠血浆肾素活性在高血压组升高(P<0.05);与 模型对照组比较，盐酸氨漠索与化合物（I)组合物组大鼠血浆肾素活性明显降低(P<〇.01); 与模型对照组比较，盐酸氨漠索组、化合物（I)组血浆肾素活性降低(P<〇.05)。见表1。
[0046]表1对高血压大鼠模型血浆血管紧张素 n和血浆肾素活性的变化 r00471
[0048] 肾素-血管紧张素系统(RAS)活性增高是造成血压升高的重要机制之一，其中血管 紧张素 n (Angn )与血压升高有直接关系。在肾动脉狭窄后，肾血流量减少促使肾素释放增 多，血浆中血管紧张素原生成血管紧张素 n增多。循环系统的血管紧张素 n通过促进醒固 酬的分泌影响水电解质平衡，增加血管张力等因素而发挥作用。随着血压的持续长时间升 高，局部组织（屯、、脑、血管)增多的血管紧张素 n与其它生长因子刺激屯、血管壁发生向屯、性 血管重构是维持血压升高的病理基础。抑制高血压大鼠模型的血管紧张素 n浓度和肾素活 性可W控制高血压病情的进一步发展。本发明提供的盐酸氨漠索与化合物（I)组合物可W 显著降低高血压大鼠模型的血管紧张素 n浓度和肾素活性，且组合物的效果优于盐酸氨漠 索或化合物（I)单独的作用效果。盐酸氨漠索与化合物（I)组合物可W开发成治疗肾血管性 高血压的药物。
[0049] 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可W对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物α)，2. -种盐酸氨溴索的药物组合物，其特征在于:包括盐酸氨溴索、如权利要求1所述的 化合物(I)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。3. 根据权利要求2所述的盐酸氨溴索的药物组合物，其特征在于:药学上可以接受的载 体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载 体或润滑剂。4. 根据权利要求2所述的盐酸氨溴索的药物组合物，其特征在于:所述剂型包括片剂、 胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射 剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。5. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含以下操作步骤：（a)将羌 活的干燥根及根茎粉碎，用65~85 %乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用 石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁 醇萃取物；（b)步骤(a)中正丁醇萃取物用大孔树脂除杂，先用6%乙醇洗脱8个柱体积，再用 70%乙醇洗脱8个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b) 中70 %乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比 为10:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基 硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱 体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(I)。6. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)用75%乙醇热回 流提取，合并提取液。7. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为AB-8型 大孔吸附树脂。8. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯进行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 权利要求1所述的化合物（I)在制备治疗肾血管性高血压的药物中的应用。10. 权利要求2~4任一所述的盐酸氨溴索的药物组合物在制备治疗肾血管性高血压的 药物中的应用。
【文档编号】A61K31/352GK105924421SQ201610257851
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年4月23日
【发明人】何华琼
【申请人】何华琼