地奥司明的药物组合物及其在生物医药中的应用
【专利摘要】本发明公开了地奥司明的药物组合物及其在生物医药中的应用，本发明提供的地奥司明的药物组合物中含有地奥司明和一种结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)，地奥司明、化合物(Ⅰ)单独作用时，对阿霉素肾病综合征具有治疗作用；地奥司明和化合物(Ⅰ)联合作用时，对阿霉素肾病综合征的治疗效果显著提高，可以开发成治疗阿霉素肾病综合征的药物，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
地奥司明的药物组合物及其在生物医药中的应用
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，设及地奥司明的新用途，具体设及地奥司明的药物组 合物及其在生物医药中的应用。
【背景技术】
[0002] 地奥司明具有维生素 P样作用，能降低血管脆性及异常的通透性，又用于防治高血 压及动脉硬化的辅助治疗，用于治疗毛细血管脆性效果较芦下、澄皮巧要强，而且具有毒性 低的特点。临床常用于治疗持疮和慢性静脉功能不全等。
[0003] 迄今为止，尚未见地奥司明及其药物组合物与阿霉素肾病综合征的相关性报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种地奥司明的药物组合物，该药物组合物中含有地奥司 明和一种结构新颖的天然产物，地奥司明和该天然产物可W协同治疗阿霉素肾病综合征。
[0005] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得W实现的：
[0006] -种具有下述结构式的化合物(I)，
[000；
[000引一种地奥司明的药物组合物，包括地奥司明、如权利要求1所述的化合物（I)和药 学上可W接受的载体，制备成需要的剂型。
[0009] 进一步地，药学上可W接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、 崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。
[0010] 进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、 膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
[00川上述化合物（I)的制备方法，包含W下操作步骤：（a)将四季青粉碎，用65~75%乙 醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋和水饱和的正下醇萃 取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b)步骤(a)中正下醇取物用 大孔树脂除杂，先用20 %乙醇洗脱9个柱体积，再用65 %乙醇洗脱10个柱体积，收集65 %洗 脱液，减压浓缩得65%乙醇洗脱浓缩物；（C)步骤(b)中65%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分 离，依次用体积比为65:1、35:1、15:1和7:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步 骤山）中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为12:1、7:1和1:1的二氯甲烧-甲醇梯 度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百 分浓度为58 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集11~15个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到 化合物(I)。
[0012] 进一步地，化合物(I)的制备方法中，所述大孔树脂为DlOl型大孔吸附树脂。
[0013] 上述化合物(I)在制备治疗阿霉素肾病综合征的药物中的应用。
[0014] 上述地奥司明的药物组合物在制备治疗阿霉素肾病综合征的药物中的应用。
[0015] 本发明的优点:本发明提供的地奥司明的药物组合物中含有地奥司明和一种结构 新颖的天然产物，地奥司明、化合物（I)单独作用时，对阿霉素肾病综合征具有治疗作用;地 奥司明和化合物（I)联合作用时，对阿霉素肾病综合征的治疗效果显著提高，可W开发成治 疗阿霉素肾病综合征的药物。
【具体实施方式】
[0016] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明保护范 围。
[0017] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0018] 分离方法：（a)将四季青(化g)粉碎，用70%乙醇热回流提取（1化X3次），合并提取 液，浓缩至无醇味（3L)，依次用石油酸（化X3次）、乙酸乙醋（化X3次）和水饱和的正下醇 (化X3次）萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b)步骤(a)中 乙酸乙醋萃取物用DlOl型大孔树脂除杂，先用20%乙醇洗脱9个柱体积，再用65%乙醇洗脱 10个柱体积，收集65%洗脱液，减压浓缩得65%乙醇洗脱浓缩物；（C)步骤(b)中65%乙醇洗 脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为65:1(9个柱体积）、35:1(10个柱体积）、15:1(8 个柱体积)和7:1(8个柱体积)的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤k)中组分4 用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为12:1(6个柱体积）、7:1(7个柱体积)和1:1(6个柱 体积)的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的 反相硅胶分离，用体积百分浓度为58 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集11~15个柱体积洗脱 液，洗脱液减压浓缩得到化合物(IKHPLC归一化纯度大于98% )。
[0019] 结构确证:HR-ESI-MS显示[M+H]+为m/z 329.1826,结合核磁特征可得分子式为 Cl讯24化〇3，不饱和度为9。核磁共振氨谱数据SH(ppm，CDCb，500MHz): H-3 (3.23，m)，H-5 (3.95，m)，H-6a(2.38，dd，J=14.1，8.2Hz)，H-^(2.08，d，J=14.1Hz)，H-9(7.63，d，J = 8.2Hz)，H-10(7.16，td，J = 8.2,2.3Hz)，H-ll(7.37，td J = 8.2,2.3Hz)，H-12(6.88，d J = 2.3Hz)，H-14a(1.87，ddd，J=14.2,8.3,3.2Hz)，H-14b(1.62，ddd，J=14.2,8.3,5.3Hz)，H- 15(2.86，m)，H-16(2.42，m)，H-17(9.85，br，s)，H-18(1.29，dJ = 6.1Hz)，H-19(3.90，m)，H- 20a( 1.72，m)，H-20b( 1.77，m)，化-Me(3.19, s);核磁共振碳谱数据 Sc(ppm，CDCl3,125MHz): 182.8(C，2-C)，63.2(CH，3-C)，46.0(CH，5-C)，41.4(afe，6-C)，57.4(C，7-C)，129.3(C，8- C)，124.7(CH，9-C)，122.5(CH，10-C)，128.4(C，11-C)，108.3(CH，12-C)，144.7(CH，13-C)， 34.3(CH2，14-C)，12.5(CH，15-C)，55.7(CH，16-C)，204.3(CH，17-C)，24.5(Ol3，18-C)，65.3 (CH，19-C)，42.3(C此，20-C)，26.3(CH3，化-Me)。红外波谱中在3375cm-i、3282cm-i、1644cm-i 吸收峰分别由该化合物中的径基、NH、幾基产生，在1?-醒R谱中，Sc65.3，182.8，204.3信号 确认了径基，内酷胺与幾基片段;且UV谱图表明在213nm、258与286nm有紫外吸收，显示该化 合物含有径吗I噪发色基团。I3C-NMR、DEPT和HSQC谱中显示有19个碳信号，包括两个甲基，S 个亚甲基，十个次甲基(一个醒基），W及四个季碳(一个幾基），W上功能结构再结合不饱和 数表明该化合物为四环结构。Ih-NMR谱显示一组无取代径吗I噪质子信号SH-97.63(lH，d，J = 8.2化）、如-1〇7.16(1山1(1，1 = 8.2,2.3化），如-117.37(1山1(1，1 = 8.2,2.3化）与如-126.88(1山 d，J = 2.3Hz);-个醒基质子信号 ?-l79.85aH，br，s);-个甲基质子信号?-l8l.29(3H，d，J =6 . IHz，Me); -个N-C曲质子信号Sh3.19(3H，S，化-Me); S组亚甲基质子信号Sh-63 2.38 (巧，(1(1^=14.1，8.2化）与如-66 2.08(1山(1^=14.1化）、如-143 1.87(1山(1(1(1^=14.2， 8.3,3.2Hz)与SH-l4bl.62aH，ddd，J=14.2,8.3,5.3Hz)W及SH-20al.72(lH，m)与SH-20b 1.77(化111)。1化-醒时普、06?1'谱显示该化合物中存在径吗|噪结构片段6。-2182.8(〇、知757.4 (C)、Sc-8l29.3(C)、Sc-9l24. T(CH)、Sc-i〇122.5(CH)、Sc-iil28.4(CH)、5。-12108.3(細）与扣- 13144.7(C)，一个N-甲基信号Sc26.3(C出，化-Me)，一个醒基信号Sc-17204.3(CH)，一个连氧次 甲基信号Sc-1965.3(C)。核磁数据表明该化合物为macroline类型径吗I噪生物碱类。在Ih-Ih COSY 中，H-3/H2-14/H-15/此-20/H-19/H3-18 与 H-5/H-16/H-15/出-20/H-19/H3-18W 及 H-16/ H-17的相关信号，结合HMBC谱中的H-17与C-15和C-16的相关信号W及HSOC谱中19-OH与C- 19的相关信号构建了该化合物中的部分结构，确认了醒基连接的位置(与C-16位相连）W及 连氧次甲基的连接方式。通过观察选择性NOE谱中H-9与H-15的相关信号，可W判断螺环C-7 的相对构型为S型。综合氨谱、碳谱、HMB幻普和NOESY谱，W及文献关于相关类型核磁数据，可 基本确定该化合物如下所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本一 致。该化合物化学式及碳原子编号如下：
[0020]
1234 实施例2:药理作用 2 本实施例使用阿霉素（14.5mg ? kg-i)按渗透累灌注要求填充，手术植入大鼠腹腔， 通过渗透压恒释阿霉素诱发肾病综合征模型制备阿霉素肾病综合征(NS)大鼠模型，观察药 物减少NS大鼠尿蛋白，降低大鼠血清尿素氮(BUN)、肌酢（SCr)等方面的抗阿霉素肾病综合 征作用。 3 1、材料与方法 4 1.1 动物
[00巧]SPF级SD大鼠，雄性，体重180~200g，购自广东省医学实验动物中屯、。所有大鼠均 行动活跃、毛发光泽，两次尿蛋白定性试验阴性(试纸条法）。
[0026] 1.2试剂与样品
[0027] 地奥司明购自中国药品生物制品检定所。化合物（I)自制，制备方法见实施例1。盐 酸阿霉素(深圳万乐药业有限公司），氯化钢(广东总华化药厂有限公司），水合氯醒(天津津 南区咸水沾工业园区），多项尿液检测试纸条(干式化学法）（艾康生物科技有限公司），考马 斯亮蓝试剂盒(南京建成科技有限公司）,FITC巧光素标记兔抗大鼠 IgG(北京博奥森生物科 技有限公司）。
[002引1.3仪器
[0029] ALZET2004型渗透缓释累(美国DURECT公司），代谢笼(苏州市艾可林实验动物器材 厂），T6新世纪紫外-可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司），TlOOO型电子天平 (常熟市双杰测试仪器厂），化204型电子分析天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司）， 65-12manul动物无创血压测试仪(美国IITC公司），全自动生化分析仪（日立-7180);冰冻切 片机化eicaCMlSOO);巧光倒置显微镜(NIK0NTE2000-S)。
[0030] 1.4大鼠分组及模型制备
[0031] 1.4.1阿霉素渗透累的准备4山6120040渗透累（0.25±5)化.11-1，28(1)。填充前称 取各渗透累质量并记录，按渗透累填充要求灌充阿霉素生理盐水溶液（14.5mg ? kg-i)，称量 灌注后各渗透累质量并记录，W灌注前后渗透累质量的差值计算灌注体积，灌注体积小于 要求填充体积90%，抽空重新填充;填充合格的透累浸入37°C无菌生理盐水中，备用。
[0032] 1.4.2渗透累的植入SD大鼠60只，雄性，适应性喂养1周，随机挑选50只大鼠 W10% 水合氯醒麻醉，大鼠背部朝上固定，于右肾下方2cm位置开口并将阿霉素渗透累植入肾脏上 方，缝合肌肉层及皮层，术后每只老鼠肌注青霉素〇.2mL/只；另外10只，同样操作，仅置入渗 透累同样大小塑胶，假手术处置作为空白对照组。造模期间W尿蛋白试纸监测造模情况，造 模两周后，收集24h尿液，考马斯亮蓝法测定尿蛋白含量，造模组和正常组比较无差异的予 W剔除，造模成功大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组(地塞米松组，50mg- kg-i)和地奥司明组(SOmg ? kg-i)、化合物（I)组(SOmg ? kg-i)、地奥司明与化合物（I)组合物 组【40mg ? kg-i地奥司明+40mg ? kg-i化合物（I)】。适应环境1周后，连续灌胃给药7d，空白对 照组和模型对照组大鼠 ig等量的生理盐水。
[0033] 1.524h尿蛋白测定实验
[0034] 给药4周后将各组大鼠装入代谢笼收集24h尿液，考马斯亮蓝法定量测定24h尿蛋 白量，观察各组大鼠尿蛋白变化。
[0(X3日]1.6血清指标测定实验
[0036] 末次给药后化，麻醉大鼠，腹主动脉取血，分离血清，全自动生化分析仪检测血液 生化指标:尿素氮(BUN)和肌酢(化）。
[0037] 1.7统计学方法
[0038] 实验数据用均数±标准差(x±s)表示，应用SPSS18.0版统计软件进行单因素方差 分析和t检验，WP<0.05为差异有统计学意义。
[0039] 2、实验结果
[0040] 2.1对NS模型大鼠对NS尿蛋白的影响
[0041] 与空白对照组比较，模型对照组大鼠24h尿蛋白显著升高(P<0.01);与模型对照 组比较，地奥司明与化合物（I)组合物组和阳性对照组尿蛋白显著降低(P<〇.01);与模型 对照组比较，地奥司明组、化合物（I)组尿蛋白降低(P<〇.05)。结果见表1。
[0042] 2.2对NS模型大鼠肾功能指标的影响
[0043] 与空白对照组比，模型对照组大鼠 BUN，化水平明显上升(P<0.0 l)。与模型对照组 比，地奥司明与化合物（I)组合物组和阳性对照组大鼠 BUN，Cr水平明显下降（P<0.01);与 模型对照组比，地奥司明组、化合物（I)组大鼠 BUN，化水平下降(P<0.05)。
[0044] 实验结果见表1。
[0045] 表1对NS模型大鼠尿蛋白和肾功能指标的影响 「nn/i Al
[0047]肾病综合征常见的病理组织学改变是局灶节段性肾炎、膜性肾病和微小病变，近 年来成人肾病综合征中微小病变肾病综合征及膜增殖性肾炎呈减少趋势，而系膜性IgA肾 病呈增加趋势。阿霉素诱发大鼠肾病综合征是一个经典模型，阿霉素在体内相关酶的作用 下，使细胞膜和细胞器生物膜脂质过氧化，对肾小球和肾小管上皮产生直接毒性作用而产 生大量蛋白尿。
[004引渗透压缓释累技术是一种新型的恒速缓释给药方式，由药物、渗透压剂和半透膜 组成，通过渗透压提供药物释放的驱动力，将所需试剂溶液按要求持续的、定量定点缓释到 需要给药的部位。渗透累植入实验动物体内针对特定部位给药（如脊髓、烦腔、肝脏、脾脏 等），已成功运送上百种药剂，包括蛋白质、多肤、生长因子、抗生素、化疗药、激素、类固醇、 siRNA。在动物给药、动物模型构建、药物筛选等众多领域发挥着不可替代的作用。本实验采 用微渗累技术恒释阿霉素诱发肾病综合征模型，将阿霉素装入微渗累里植入到大鼠腹腔， 对阿霉素进行长期恒速微量释放，延长阿霉素在动物体内的作用时间，避免因注射引起的 浓度波动。
[0049] 上述结果表明，地奥司明、化合物（I)单独作用时，对阿霉素肾病综合征具有治疗 作用;地奥司明和化合物（I)联合作用时，对阿霉素肾病综合征的治疗效果显著提高，可W 开发成治疗阿霉素肾病综合征的药物。
[0050] 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可W对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物α)，2. -种地奥司明的药物组合物，其特征在于:包括地奥司明、如权利要求1所述的化合 物(I)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。3. 根据权利要求2所述的地奥司明的药物组合物，其特征在于:药学上可以接受的载体 包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体 或润滑剂。4. 根据权利要求2所述的地奥司明的药物组合物，其特征在于:所述剂型包括片剂、胶 囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、 栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。5. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含以下操作步骤：（a)将四 季青粉碎，用65~75%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙 酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步骤(a)中正丁醇取物用大孔树脂除杂，先用20%乙醇洗脱9个柱体积，再用65%乙醇洗脱 10个柱体积，收集65%洗脱液，减压浓缩得65%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中65%乙醇洗 脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为65:1、35:1、15:1和7:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为12:1、7:1和 1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反 相硅胶分离，用体积百分浓度为58 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集11~15个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到化合物(I)。6. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为D101型 大孔吸附树脂。7. 权利要求1所述的化合物（I)在制备治疗阿霉素肾病综合征的药物中的应用。8. 权利要求2~4任一所述的药物组合物在制备治疗阿霉素肾病综合征的药物中的应 用。
【文档编号】A61P13/12GK105924442SQ201610474671
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年6月22日
【发明人】陈露
【申请人】陈露