一种二膦酸化合物及其制备方法与应用

一种二膦酸化合物及其制备方法与应用
【专利摘要】本发明公开了一种具有式Ⅱ结构的化合物，式中R为式中R1为H，OH或者卤素。R2为或者其中n1＝0～10，n2＝0～10，n3＝0～10；Ar为芳基、亚芳基或取代基R99取代的芳基、取代基R99取代的亚芳基，R3、R4、R5、R6中至少含有一个硒或者硫原子，其余是碳或者氮原子。R3、R4、R5、R6之间连接方式为单键或双键。对老年骨质疏松患者，可使骨细胞的骨形成和骨破坏维持一个较为理想的动态平衡。
【专利说明】
-种二麟酸化合物及其制备方法与应用
技术领域
[0001] 本发明设及一种新的二麟酸化合物，W及制备所述新的二麟酸盐化合物的方法， 属于生物医药领域。
【背景技术】
[0002] 骨质疏松症是一种W骨量低下，骨结构损坏，导致骨脆性增加，易发生骨折为特征 的全身性骨病。目前骨质疏松症在全球常见病、多发病中居第7位，患者总数超过2亿人，我 国超过9000万人患不同程度骨质疏松，60岁W上老人骨质疏松患病率约50%~60%。
[0003] 二麟酸类药物是近年发展起来的抗代谢骨病的一类新药，该药已成为用于治疗 Paget'S病、高巧血症、肿瘤导致的骨质溶解W及骨质疏松等骨疾病的一线用药。二麟酸类 药物发挥抗骨质疏松作用的机制在于具有很高的骨亲和性，在骨组织遭受侵蚀时抑制破骨 细胞骨吸收，从而有效减少骨质的流失。二麟酸是自然形成的无机焦憐酸的结构类似物，但 比焦憐酸更稳定，具有很强的抗生物降解能力。二麟酸结构中P-C-P骨架上的C可连接两个 侧链R'和R"，其结构如式I。
[0004]
[0005] 二麟酸中不同的侧链能带来药物活性极大改变。关于二麟酸类药物结构-活性关 系的研究表明：式I中R'主要为氨、径基或面素，R'对二麟酸类药物亲骨能力影响相对较小； 式I中r基团的变化，导致其抗骨吸收能力多达几个数量级的差别。在运些二麟酸类药物 中，R"侧链为氨基-烷基的第二代二麟酸药物(帕米麟酸、阿仑麟酸、伊班麟酸、因卡麟酸等） 抗骨吸收活性强于侧链上不含N的第一代二麟酸药物(依替麟酸、氯麟酸W及替鲁麟酸），而 R"侧链含N杂环的第=代二麟酸药物又强于第二代。根据目前的研究资料，抗骨质疏松活性 最强的二麟酸结构中R'必为径基，而R"为含N杂环，尤其是五元杂环。然而现今上市的二麟 酸药物，尽管对破骨细胞的抑制作用越来越强，但同时可能导致患者骨折的风险相应增加， 且促进成骨细胞的作用方面效果甚微。
[0006] 砸元素是生物不可或缺的微量元素，对于生物的生长、发育W及维持正常的生理 功能十分重要。现在，含砸化合物特别是有机砸已经引起了人们极大的关注和热情。在生物 有机体中，砸被摄入后同氨基酸结合形成多种形式的含砸蛋白，进而发挥其诸如清除自由 基、代谢激素等功能。砸蛋白对于骨代谢十分重要，缺砸往往同骨量减少W骨关节病密切相 关。

【发明内容】

[0007] 本发明的目的在于结合第=代二麟酸类药物和砸元素，开发出一种新的含砸和氮 杂环二麟酸盐，同时兼顾二麟酸独特的抗骨质疏松活性和砸的抗氧化能力。该新型化合物 具有更好的抗骨质疏松活性和更佳的生理效应，同时对肝肾等器官的毒副作用更小。
[0008] 为了实现上述发明目的，本发明提供了 W下技术方案：
[0009] -种二麟酸化合物，具有式n的结构：
[001 2] 式中Ri味tH. OH亦若访'妄_
[0010]
[0011]
[0013] R2 为 岸中，ni = 0 ~10,112 = 0 ~10，n3 =0~10;Ar为亚芳基、杂亚芳基或取代基R99取代的亚芳基。取代基R99选自Cl~C6的烷基、 Cl~C6的取代烷基、面素、-CN、-N02、-OH、氨基、C1-C6的烧氨基。优选的，其中m = 0~4，n2 = 0~1 ,M = O~5。更优选的，其中ni = 0~3，n2 = 0~1 ,M = O~4。所述取代基R99可W有一个或 多个，当有多个取代基R99时，各个取代基R99相互之间为独立选择，即多个取代基R99可W相 同，也可W不同。
[0014] 优选的，取代基R99选自甲基、乙基、丙基、异丙基、面素、-CN、-N02、-OH、氨基、Cl -C3 的烧氨基。最优选的，取代基R99选自甲基、面素、-CN、-NO2、-OH、氨基、甲基氨基、乙基氨基。
[0015] 进一步，其中R2为
在R2中ni、n2、n3处 的亚烷基可W是直链亚烷基，也可W是具有支链的亚烷基。
[0016] 1?3、1?4、1?5、1?6中至少含有一个砸或者硫原子，其余是碳或者氮原子。1?3、1?4、1?5、1?6之间 连接方式为单键或双键。
[0017] 在1?3、1?4、1?5、1?6上有取代基1?98，取代基1?98可^是一个或多个。当有多个取代基尺98 时，可W是相同的取代基，也可W是不同的。所述的取代基化8各自独立的选自：氨原子、氧原 子、砸原子、氨基、亚氨基、面素、-CN、-N02、-OH、-0R97、-C00R97、-0C00R97、C0R97、-CON (R97) 2，- 00)則化7)2、-51?96、-5〇21?96、-5〇2則化7)2、-501?97、(：1~(：10的烷基、(：1~(：10的取代烷基、〔2~〔6 的締基、C2~C6的取代締基、C2~C6的烘基、C2~C6的取代烘基、芳基或取代芳基。
[0018] 进一步，取代基R98可W优选自W下基团：氨、甲基、乙基、丙基、异丙基、正下基、异 下基、戊基、己基、环己基、径基、氯基、氨基、亚氨基、苯基、砸原子或氧原子。当取代基R98全 部为氨原子时，也可W认为是相当于出现了 R3、R4、化、Rs上没有取代的情况。
[0019] 其中，上述取代基R98中的Cl~CIO的取代烷基、C2~C6的取代締基、C2~C6的取代 烘基和取代芳基上的取代基团各自独立的选自：径基、面原子、簇基、氯基、氨基。即对于Cl- ClO的烷基、C2~C6的締基、C2~C6的烘基和芳基采用运些基团进行取代。相应的R98中所述 的芳基优选为苯基。
[0020] 更进一步的，所述的Cl~Cio的取代烷基、C2~C6的取代締基、C2~C6的取代烘基 和取代芳基是Cl~C4的取代烷基、C2~C3的取代締基、C2~C3的取代烘基和取代苯基。
[0021] 更进一步的，所述的Cl~Cio的取代烷基、C2~C6的取代締基、C2~C6的取代烘基 和取代芳基是选自W下之一的基团：径甲基、径乙基、氯甲基、簇甲基、=氣甲基、面取代乙 基、甲氧甲基、氯基甲基、氯基乙基、簇甲基、簇乙基、氨甲基、氨乙基、甲基苯基、乙基苯基、 二甲基苯基、甲基乙基苯基、面取代乙締、面取代丙締、面取代丙烘、面取代丙乙烘、径基苯 基、氯苯基、簇基苯基。
[00剖其中，R96和R97各自独立地选自：氨、Cl~C6的烷基、芳基、取代基R95取代的Cl~C6 的烷基或取代基R95取代的芳基。相应的，R96和R97中所述的芳基优选为苯基，含取代芳基中 的芳基。
[002；3 ] 其中，取代基R95独立地选自-OH、面原子、-畑2、-CN、Cl -C4的烷基，C2-C4的締基。
[0024] 进一步，取代基R上的1?3、1?4、1?5、1?6中有一个是砸原子或硫原子，1~2个氮;1?3、尺4、 Rs、R6之间连接方式为单键或双键。可W全部是单键，也可W包含部分双键。
[0025] 进一步，上述式n结构的二麟酸化合物中，Ri优选为H或0H。
[00%]进一步，上述式n结构的二麟酸化合物中，Ri优选为面素，更优选为F、C1、化或I。
[0027] 讲一击.户沐古11结娩的^.臟瞒化合物中，关于其中的取代基1?2，1?2为 -
优选Ar为亚芳基，更优选Ar为苯环，即Ar为 亚苯基。或者优选Ar为取代基R94取代的亚芳基，最好是取代基R94取代的亚苯基，取代基R94 可W有一个或多个，取代基R94可W相同也可W不同。取代基R94各自独立的选自：Cl~C6的 烷基、Cl~C6的任选被取代的烷基、面素、-CN、-N02、-OH、氨基、C1-C6烷基氨基。
[002引进一步，上述式n结构的二麟酸化合物中，关于取代基R上的1?3、1?4、1?5、1?6中含有一 个砸，1~2个氮。R3、R4、Rs、Rs之间连接方式有单键或双键。
[0029] 进一步，上述式n结构的二麟酸化合物中，R3、R4、Rs、Rs上的取代基R98优选为:氨、 径基、-CN、氨基、亚氨基或氧原子中的一个或多个。取代基R98最好是选自W下基团：氨、径 基、氨基、亚氨基或氧原子。
[0030] 进一步，上述式n结构的二麟酸化合物中，R为W下几种结构通式之一，品质较佳。
[0031]
[0032] 进一步，上述化合物中R?~Ri6选自：氨、氧、氨基、亚氨基、面素、-CN、-N02、-OH、- 0R97、-C00R97、-0C00R97、C0R97、-CON( R97 ) 2，-OCON ( R97 ) 2、-SR96、-SO2R96、-SO2N( R97 ) 2、-S0R97、 Cl~C9的烷基、取代基R95取代的Cl~C9烷基、C2~C6的締基、取代基R95取代的C2~C6締基、 C2~C6的烘基、取代基R95取代的C2~C6烘基、芳基或取代基化5取代的芳基。
[0033] 其中，R96和R97各自独立地选自氨、C1~C6的烷基、芳基、取代基R95取代的C1~C6的 烷基或取代基R95取代芳基。
[0034] 其中，取代基R95独立地选自-OH、面原子、-畑2、-CN、C1-C4的烷基，C2-C4的締基。优 选的，取代基R95独立地选自-OH、面原子、-N出、-CN、甲基、乙基。
[0035] 进一步，上述式n化合物中化~化6与5元环连接方式可W为单键，也可W为双键。
[0036] 进一步，上述式n化合物中R?~Ri6为C1-C5的烷基，氨基，亚氨基，氧原子、径基、簇 基。
[0037] 进一步，上述式n化合物中化~Ri6为甲基，乙基，丙基，异丙基，氨基，亚氨基，氧原 子，径基。
[0038] 进一步，上述式n化合物中R优选为W下取代基之一，品质表现最佳。
[0039；
[0040]进一步，优选的所述式n化合物为下列化合物之一：
[0041]
[0042] 或者，所述化合物为下列化合物之一：
^r\r\A A I
[0045] 本发明还提供了上述具有式n结构的二麟酸化合物的=种制备方法。
[0046] -种制备上述具有式n结构的二麟酸化合物的方法，先合成一种含砸五元杂环的 有机簇酸TY .结放加下.
[0047]
[004引然后，通过式K化合物合成含砸五元杂环的二麟酸化合物。
[0049] 方法一：
[0050] 含砸五元杂环的有机簇酸K中加入棚烧类的酸类溶液，将有机簇酸上面的氨取代 反应，时间约30min~120min，反应溫度为(TC~60°C，K与棚烧的摩尔比为1:1~1: 5。再加 入烷基类亚憐酸醋进行亲核取代，反应时间为化~2地，得到麟酸烷基醋，K与烷基类亚憐 酸醋的摩尔比为1:2~1:6。最后加入醇，继续反应化~4h，完成醇水解反应。最终得到含砸 杂环的二麟酸化合物。
[0051] 上述方法一中，优选的，制备具有式n结构的二麟酸化合物，所述的棚烧的酸类溶 液中的酸类为四氨巧喃或1,4-二氧六环。
[0052] 上述方法一中，优选的，制备具有式n结构的二麟酸化合物，所述的醇水解中的醇 为甲醇、乙醇、丙醇W及下醇中的一种或几种。
[0化3]按照上述制备方法一，可W制备得到Ri为OH的具有式n结构的二麟酸化合物。上 述制备方法的过程如下：
[0化4]
[0055] 通过式K合成含砸五元杂环的二麟酸化合物。
[0化6] 方法二：
[0化7]将式K化合物与亚憐酸、=氯化憐在80°C~120°C溫度下反应化~化，向反应物中 加入水，Ig化合物K中加入1血~40mL水，于90°C~120°C回流比~化，化合物K与亚憐酸的 摩尔比为1:1~1:6，化合物K与=氯化憐摩尔比为1:2~1:6，反应液过滤，滤液中加入醇溶 液，并于-5 °C~5 °C放置1化~4她，抽滤，固体用水洗涂，60°C~120°C真空干燥地~1 Oh，得 到具有式n结构的二麟酸。
[005引上述方法二中，优选的，制备具有式n结构的二麟酸化合物，滤液中加入醇溶液中 的醇为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、下醇试剂中的一种或几种。
[0059] 按照上述制备方法二，可W制备得到Ri为OH的具有式n结构的二麟酸化合物。上 述制备方法的过程如下：
[0060]
[0061] 另外一种制备具有式n结构的二麟酸的制备方法，先合成一种含砸五元杂环的面 代烧控X，结构如下： 1
[0063] '乂一[0064] 式中化7为面素。[0065] 通过式X化合物合成具有式n结构二麟酸，[0066] 方法
[0067] (I)亚甲基的质子活化：
[0068] 亚甲基二麟酸四异丙醋与强碱进行亚甲基质子活化反应，反应时间为化~地，反 应溫度为-5°C~40°C，强碱与亚甲基二麟酸四异丙醋的摩尔比为1:1~1:4,优选为1:1~1: 3。
[0069] (2)烷基化反应：
[0070] 向上述所得反应液中加入具有式X结构面代烧控进行烷基化反应，反应溫度为60 °C~150°C，反应时间为化~化，X与亚甲基二麟酸四异丙醋的摩尔比为1:1~1:3;反应完 毕后加入有机溶剂至反应液中萃取，收集有机相并减压蒸馈得到含五元砸杂环的二麟酸四 异丙醋化合物。
[0071] (3)水解反应：
[0072] 将含有五元砸杂环的二麟酸四异丙醋化合物中加入醇和浓盐酸，lg化合物中加入 SmL~50ml醇溶液和SmL~60mL浓盐酸，于60°C~110°C，优选60-105°C，反应化~lOh，减压 蒸馈除去溶剂，残余物用醇洗涂，得到固体于50°C~100°C真空干燥4h~lOh，得到二麟酸化 合物。
[0073] 上述方法S中，优选的，制备具有式n结构的二麟酸化合物，步骤（1)中强碱为氨 化钢、甲醇钢、乙醇钢等盐类。
[0074] 上述方法S中，优选的，制备具有式n结构的二麟酸化合物，步骤(2)中所述有机 溶剂为二氯甲烧、=氯甲烧、乙酸乙醋或石油酸等中小极性试剂。
[0075] 上述方法S中，优选的，制备具有式n结构的二麟酸化合物，步骤(3)中所述醇为 甲醇、乙醇或丙醇等醇类试剂。
[0076] 按照上述方法=制备方法，可W制备得到Ri为H的具有式n结构的二麟酸化合物。 具体过程如下：
[0077
[0078] 上述二麟酸化合物在制备治疗骨代谢性疾病的药物中的应用。
[0079] 二麟酸盐类药物用于治疗骨质疏松其主要作用是通过抑制破骨细胞活性、诱导破 骨细胞的调亡起到抑制骨吸收，阻止骨吸收及骨微结构的破坏。尽管上市的二麟酸类化合 物对破骨细胞的抑制作用越来越强，但其对成骨细胞增殖作用的影响较弱，运可能会导致 患者骨折的风险相应地增加。本发明的二麟酸化合物能够有效的避免现有技术中使用的二 麟酸盐类化合物的不良影响，确保本发明的二麟酸化合物对于中老年人群的骨细胞状态控 制在一个较为理想的平衡状态。
[0080] 与现有技术相比，本发明的有益效果：
[0081] 本发明提供了一种新型二麟酸盐化合物W及制备所述化合物的方法和用途，并且 已经鉴别出该化合物的结构特征。在细胞药理实验中，使用已经上市并广泛使用的阿伦麟 酸钢和挫来麟酸作为阳性对照药。通过系列XC化合物对体外成骨细胞和破骨细胞功能的评 价研究表明，XC化合物不仅保持与阿伦麟酸钢和挫来麟酸相似的抑制破骨细胞活力，还具 有比阿仑麟酸钢和挫来麟酸较好的促进成骨细胞增殖作用。故可W初步推断，对老年骨质 疏松患者，可使骨细胞的骨形成和骨破坏维持一个较为理想的动态平衡。
【具体实施方式】
[0082] 下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细描述。但不应该将此理解为本发明 上述主题范围仅限于W下的实施例，凡基于本
【发明内容】
所实现的技术均属于本发明的范 围。本发明中未特别说明的百分比均为重量百分比。
[0083] 实施例1:化合物XC-I
[0084] 本实施例举二麟酸化合物为：1-径基-2-(2-氨基-1,3-砸挫-5-基)-亚乙基-1,1- 二麟酸。结构式如下
[0085]
[0086] 该化合物具体制备方法如下：
[0087] 将1.43g(26.5mmol)甲醇钢溶于40mL无水甲醇中，室溫下向溶液中滴加1.14g (13.25mmol) 丫-下内醋，滴加完成后反应30min。反应完后浓缩，然后加入20mL水，用2mol/L 的盐酸调节pH至3~4,然后用乙酸乙醋萃取，收集乙酸相，并减压浓缩即得产物4-径基下酸 甲醋。
[008引将1. 18g(10mmol)4-^基下酸甲醋溶于30mL二氯甲烧中，然后加入0.13g (1.6mmol)乙酸钢和3.27旨（1511111101)氯铭酸化晚，室溫反应化。然后加入300血乙酸，继续揽 拌30min，然后过滤，滤液浓缩，减压蒸馈(80°C，0.2mmHg)即得4-幾基下酸甲醋。
[0089] 将1.16g(l〇mmol)4-幾基下酸甲醋溶于50mL乙酸/二氯甲烧/1,4-二氧六环/氯仿 中，加入9mL 1，4-二氧六环，缓慢滴加1. Sg(1 Immol)漠素，滴加时间超过化，滴加完毕后继 续反应化。然后将反应液倒入50血二氯甲烧中，加入2.5g(25mmol)碳酸巧和0.8g(9.5mmol) 碳酸氨钢，揽拌化。反应完毕后抽滤除去无机物，滤液减压浓缩即得3-漠-4-幾基下酸甲醋。
[0090] 6.46g(33. llmmol)3-漠-4-幾基下酸甲醋悬浮于IOSmL水中，迅速揽拌下加入 4.16g(33.1Immol)砸脈，室溫揽拌4h。然后将反应液倾入冰块中，用氨水(25%)中和，然后 减压过滤收集沉淀，用冷水洗涂3次。滤液经减压浓缩后可得2-(2-氨基-1,3-砸挫-5-基）乙 酸甲醋。
[0091] 称取4.38g(20mmol)2-(2-氨基-1,3-砸挫-5-基）乙酸甲醋于烧瓶中，加入50mL甲 醇溶解，揽拌下加入20mL 2mol/L的NaO田容液，室溫下反应化，反应完毕。过滤，浓缩，用酸调 节pH值，产生白色沉淀，静置后，过滤，沉淀用少量水清洗后，烘干得到2-(2-氨基-1,3-砸 挫-5-基）乙酸。
[0092] 将2-(2-氨基-1,3-砸挫-5-基）乙酸0.46g加入SOmLS 口瓶中。加入四氨巧喃 6.25g，揽拌后加入儿茶酪棚烧0.45g，反应化，再加入甲基娃烷基）亚憐酸醋1.4mL， 反应化后，加入甲醇7.4血反应化。减压蒸馈至油状物产生，再加入55mL乙酸析出沉淀，沉淀 用水重结晶得到白色固体1-径基-2-(2-氨基-1,3-砸挫-5-基)-亚乙基-1,1-二麟酸。
[00W]该白色固体鉴定：
[0094] IH-醒R(400MHz，DMS0)化.13(S，lH)，S2.71(S，2H)，S7.10(S，2H)DMS(ESI，m/z) 352.88(+H)
[00巧]经上述鉴定可W确定该化合物为1-径基-2-(2-氨基-1,3-砸挫-5-基)-亚乙基-1， 1-二麟酸。
[0096] 实施例2:化合物XC-2
[0097] 本实施列举二麟酸化合物为：1-径基-2-(2-甲基-1,3-砸挫-5-基)-亚乙基-1,1- 二麟酸。结构式如下：
[009引
[0099] 该化合物具体制备方法如下：
[0100] 将1.43g(26.5mmol)甲醇钢溶于40mL无水甲醇中，室溫下向溶液中滴加1.14g (13.25mmol) 丫-下内醋，滴加完成后反应30min。反应完后浓缩，然后加入20mL水，用2mol/L 的盐酸调节抑至3-4,然后用乙酸乙醋萃取，收集乙酸相，并减压浓缩即得产物4-径基下酸 甲醋。
[0101] 将1.18邑（10111111〇1)4-径基下酸甲醋溶于301111^二氯甲烧中，然后加入0.13邑 (1.6mmol)乙酸钢和3.27g(15mmol)氯铭酸化晚，室溫反应30min。然后加入SOOmL乙酸，过 滤，滤液浓缩，然后减压蒸馈(80°C，0.2mmHg)即得产物4-幾基下酸甲醋。
[0102] 将1.16g( IOmmol )4-幾基下酸甲醋溶于50血乙酸中，加入9mL 1，4-二氧六环，缓慢 滴加1. Sg(Ilmmol)漠素，滴加时间超过化，再反应化。然后将反应液倒入50mL二氯甲烧中， 加入2.5g(25mmol)碳酸巧和0.8g(9.5mmol)碳酸氨钢，然后揽拌化。反应完后抽滤除去无机 物，滤液减压浓缩即得3-漠-4-幾基下酸甲醋
[0103] 6.46g(33.11mmol)3-漠-4-幾基下酸甲醋悬浮于IOSmL水中，迅速揽拌下加入 4.16g(33.1 ImmoI)砸代乙酷胺，室溫揽拌4h。然后将反应液倾入冰块中，用氨水（25 % )中 和，然后减压过滤收集沉淀，用冷水洗涂3次。滤液经减压浓缩后可得少量同纯度的产品2- (2-甲基-1,3-砸挫-5-基）乙酸甲醋。
[0104] 称取4.38g(20mmol)2-(2-甲基-1,3-砸挫-5基）乙酸甲醋于烧瓶中，加入50血甲醇 溶解，揽拌下加入20mL Imol/L的NaO田容液，室溫下反应化，反应完毕。过滤，浓缩，用酸调节 pH值，产生白色沉淀，静置后，过滤，沉淀用少量水清洗后，烘干得到产品2-(2-甲基-1,3-砸 挫-5-基）乙酸。
[0105] 将2-(2-甲基-1,3-砸挫-5-基）乙酸0.46g加入SOmLS 口瓶中。加入四氨巧喃 6.25g，揽拌后加入儿茶酪棚烧0.45g，反应化，再加入甲基娃烷基）亚憐酸醋1.4mL， 反应化后，加入甲醇7.4血反应化。减压蒸馈至油状物产生，再加入55mL乙酸析出沉淀，沉淀 用水重结晶得到白色固体1-径基-2-(2-甲基-1,3-砸挫-5-基)-亚乙基-1,1-二麟酸。
[0106] 该白色固体鉴定：
[0107] IH-醒R(400MHz，DMS0)扣.20(S，lH)，S2.75(S，2H)，S0.98(S，3H)〇MS(ESI，m/z) 351.95(+H)
[0108] 经上述鉴定可W确定该化合物为1-?基-2-(2-甲基-I，3-砸挫-5-基)-亚乙基-I， 1-二麟酸。
[0109] 实施例3:化合物XC-3
[0110] 本实施列举二麟酸化合物为：1-径基-2-( 2-亚氨基-4-氧代-1,3-砸挫烧-5-基)- 亚乙甚-1胃1-^臟酸"结放古加下.
[0111
[0112] 该化合物具体制备方法如下：
[0113] 将20.3g k天冬氨酸，4.3g K化，44g浓硫酸，400mL水一并加入ILS口瓶中，装上 溫度计，冰盐浴中揽拌降溫至(TC W下，向瓶内缓慢滴加8. Sg NaN〇2的150mL水溶液，控制反 应瓶中溫度在(TC W下，有栋色气体产生，滴毕后，保持溫度反应化，得到浅黄色反应液。用4 X 1 OOmL乙酸乙醋萃取，干燥有机相化，减压蒸馈有机相，得白色固体产品漠代下二酸。
[0114] 将7g漠代下二酸，150mL乙醇，5mL皿r溶液一并加入到250mL单口瓶中，室溫揽拌 反应8h，固体完全溶解，减压蒸馈溶剂，残余物中加入200mL乙酸充分溶解，再用10 %碳酸氨 钢液洗涂乙酸相至无气泡产生为止。用无水硫酸儀干燥乙酸相，减压蒸馈得到黄色油状物 漠代下二酸二乙醋。
[0115] 将6.2g中间体漠代下二酸二乙醋和砸脈溶解到200mL乙醇中。然后加入ImL化晚， 加热回流30min。抽滤，除去多余砸粉，溶液减压蒸馈。得到浅黄色固体2-(2-亚氨基-4-氧 代-1，3-砸挫烧-5-基）乙酸乙醋。
[0116] 将2g中间体2-(2-亚氨基-4-氧代-1，3-砸挫烧-5-基）乙酸乙醋加入40mL 4mol/L 溶液中，40°C反应化，再加入活性炭反应Ig，反应完后，将反应液过滤，收集滤液，减压蒸馈 成油状物，再加入丙酬IOOmL,析出白色固体。过滤，60°C真空干燥得到产品2-(2-亚氨基-4- 氧代-1，3-砸挫烧-5-基）乙酸。
[0117] 将2-(2-亚氨基-4-氧代-1,3-砸挫烧-5-基）乙酸0.5g加入SOmLS口瓶中。加入四 氨巧喃6.25g，揽拌后加入儿茶酪棚烧0.45g，反应化，再加入= -( =甲基娃烷基)亚憐酸醋 1.4mL，反应化后，加入甲醇7.4mL反应2h。减压蒸馈至油状物产生，再加入55mL乙酸析出沉 淀，沉淀用水重结晶得到产品1-径基-2-(2-亚氨基-4-氧代-1,3-砸挫烧-5-基)-亚乙基-1， 1-二麟酸。
[011引该白色固体鉴定：
[0119] lH-NMR(400MHz，DMS0)S9.80(S，lH)，S7.35(S，lH)，S2.41(T，lH)，S2.32(D，2H)〇MS (ESI，m/z)368.88(+H)
[0120] 经上述鉴定可W确定该化合物为1-?基2-(2-氨基-4-氧代-I，3-砸挫烧-5-基)- 亚乙基-1,1-二麟酸。
[0121] 实施例4:化合物XC-4
[0122] 本实施列举二麟酸化合物为：1-径基-2-(2,4-二氧代-1,3-砸挫烧-5-基)-亚乙 基-1 . 1 滕酸。结构击血下！
[0123
[0124]该化合物具体制备方法如下：
[01巧]将20.3g k天冬氨酸，4.3g K化，44g浓硫酸，400mL水一并加入ILS口瓶中，装上 溫度计，冰盐浴中揽拌降溫至(TC W下，向瓶内缓慢滴加8. Sg NaN〇2的150mL水溶液，控制反 应瓶中溫度在(TC W下，有栋色气体产生，滴毕后，保持溫度反应化，得到浅黄色反应液。用4 X IOOmL乙酸乙醋萃取，干燥有机相化，减压蒸馈有机相，得白色固体产品漠代下二酸。
[01 %] 将7g漠代下二酸，150mL乙醇，5mL皿r溶液一并加入到250mL单口瓶中，室溫揽拌 反应过夜化，固体完全溶解，减压蒸馈溶剂，残余物中加入200mL乙酸充分溶解，再用10 %碳 酸氨钢液洗涂乙酸相至无气泡产生为止。用无水硫酸儀干燥乙酸相，减压蒸馈得到黄色油 状物漠代下二酸二乙醋。
[0127]将6.2g中间体漠代下二酸二乙醋和砸脈溶解到200mL乙醇中。然后加入ImL化晚， 加热回流30min。抽滤，除去多余砸粉，溶液减压蒸馈。得到浅黄色固体2-(2-氨基-4-氧代- 1,3-砸挫烧-5-基）乙酸乙醋。
[012引将2g中间体2-(2-氨基-4-氧代-1,3-砸挫-5-基）乙酸乙醋加入40mL 8mol/L盐酸 溶液中，80°C反应化，再加入活性炭反应Ig，反应完后，将反应液过滤，收集滤液，减压蒸馈 成油状物，再加入丙酬lOOmL，析出白色固体。过滤，60°C真空干燥得到产品2-(2,4-二氧代- 1,3-砸挫烧-5-基）乙酸。
[0129] 将2-(2，4-二氧代-1，3-砸挫烧-5-基）乙酸0.5g加入50血S 口瓶中。加入四氨巧喃 6.25g，揽拌后加入儿茶酪棚烧0.45g，反应化，再加入甲基娃烷基）亚憐酸醋1.4mL， 反应化后，加入甲醇7.4mL反应化。减压蒸馈至油状物产生，再加入55m L乙酸析出沉淀，沉 淀用水重结晶得到产品1-径基-2-(2,4-二氧代-1,3-砸挫烧-5-基)-亚乙基-1,1-二麟酸。
[0130] 该白色固体鉴定：
[0131] lH-NMR(400MHz，DMS0)Sl2.20(S，lH)，S2.45(T，lH)，S2.30(D，2HKMS(ESI，m/z) 369.69(+H)
[0132] 经上述鉴定可W确定该化合物为1-?基-2-(2,4-二氧代-I，3-砸挫烧-5-基)-亚 乙基-1,1-二麟酸。
[0133] 实施例5:化合物XC-5
[0134] 本实施列举二麟酸化合物为：1-径基-1-( 2-甲基-1,3-砸挫烧-4-基)-亚甲基-1， 1，-二麟酸。结构式如下：
[0135]
[0136] 该化合物具体制备方法如下：
[0137] 室溫下将3.Og砸粉加入IOmL水中，将3.Og棚氨化钢溶于19mL水中，然后揽拌下缓 慢滴加砸粉水溶液中。再加入等量的3.Og砸粉，揽拌15分钟。将反应瓶置于短暂的蒸气浴中 1到2分钟使反应完成。3.?氯代丙氨酸的盐酸盐溶于20mL水中调节pH值到9。2小时内将此 溶液缓慢滴加到上述砸的溶液中。在37°C下继续揽拌过夜。调节反应溶液抑值到2,再加入 218mg盐酸径胺。抽滤除去过量的砸粉，滤液调节pH值6~6.5,然后放置在4°C条件下3~5天 结晶。抽滤得到澄黄色晶体，然后溶于Imol/L的盐酸溶液20mL中。再抽滤掉多余的固体，调 节滤液抑值6~6.5,再放置3~5天结晶。最后抽滤得到黄色晶体，真空干燥过夜得产品心砸 代脫氨酸。
[013引 0.13g，0.3911111101的心砸代脫氨酸溶于0.05mol/L的化OH溶液5mL，再加入1.5mL乙 醇混合于圆底烧瓶中。IOmin内缓慢加入0.05g棚氨化钢于上述反应中，混合溶液再额外揽 拌20min直至溶液变成无色，再将溶液至于冰浴中，调节pH值到5~6，0.24mL乙醒分S次 SOmin内每次80化加入，然后将反应溶液揽拌化。然后，加入20mL的乙醇溶液于上述混合反 应溶液中，冰箱中放置过夜。抽滤得黄色固体，真空干燥得产品1-(2-甲基-1,3-砸挫烧-4- 基）甲酸。
[0139] 将0.26g 1-(2-甲基-1,3-砸挫烧-4-基）甲酸，2g THF，0.29g儿茶酪棚烧一并加入 到SOmLS 口瓶中，产生大量气泡，固体溶解，室溫反应化，向瓶内加入1.32mLS-(S甲基娃 烷基）亚憐酸醋，室溫反应16h，再加入甲醇反应化。旋蒸溶剂，得到浅黄色油状固体，加入 10血甲醇溶解，再加入50mL乙酸析出白色沉淀，放置化，倒去上清液，60°C真空干燥化，得到 浅黄色固体1-径基-1-(2-甲基-1,3-砸挫烧-4-基)-亚甲基-1，1，-二麟酸。
[0140] 该白色固体鉴定：
[0141] lH-NMR(400MHz，DMS0)Sl2.20(S，lH)，S2.45(T，lH)，S2.30(D，2H)〇MS(ESI，m/z) 369.69(+H)
[0142] 经上述鉴定可W确定该化合物为1-?基-1-(2-甲基-I，3-砸挫烧-4-基)-亚甲基- 1，1，-二麟酸。
[0143] 实施例6:化合物XC-6
[0144] 本实施列举二麟酸化合物为：1-径基-2-( 1，2，3-砸二挫-4-基)-亚乙基-1，1，-二 麟酸。结构式如下：
[0145；
[0146] 该化合物具体制备方法如下：
[0147] 单口瓶中加入2，5-二甲基四氨巧喃（18.6mL，0.144mol)，再加入盐酸72mL( Imol/ L)，混合在室溫下揽拌IOmin，加入碳酸氨钢调节抑为6~6.5。水相用乙酸乙醋(6 X70血)进 行萃取，水相中再加入氯化钢至饱和，再用乙酸乙醋（3X60mL)萃取。有机相合并后用硫酸 儀干燥后过滤，减压蒸馈得到产品下二醒。
[0148] 在研体上将等量的盐酸氨基脈和无水醋酸钢磨碎后加入到烧瓶中，再加入10倍体 积的无水乙醇，煮沸趁热过滤。然后将等量的下二醒加入到上述滤液中水浴加热30min~ 60min，然后冷却，加水到刚刚出现浑浊，使其缓慢冷却。缩氨基脈结晶出来后，过滤，晶体用 乙醇或稀乙醇(70%)重结晶，得化合物化)-1-(4-氧代亚下基)氨基脈。
[0149] 在装有揽拌器、冷凝管和溫度计的S 口瓶中加入0.0 OSmol的化)-1-(4-氧代亚下 基)氨基脈，60mL冰醋酸，然后在冷却揽拌下分批加入6.6g(0.06mol)升华二氧化砸，加完后 室溫揽拌4h，过滤，滤液中加入50mL水，氯仿萃取，饱和碳酸钢洗涂，无水硫酸钢干燥。除去 溶剂，残余物用石油酸(沸点60°C~90°C)重结晶，得产物2-(1,2,3-砸二挫-4-基）乙醒。 [0150] 于250mL烧杯中加入IOOmL水，将17g(0 . Imol)硝酸银溶于水中，揽拌下加入 4.4gNaOH的50mL水溶液，揽拌5min，滤除氧化银并用水洗涂。将此氧化银置于SOOmL烧杯中， 加入250mL水，剧烈揽拌下加入20g固体化0H。将混合物加热至60°C，继续揽拌，加入18 . Sg (0 . Imol)2-( 1，2，3-砸二挫-4-基）乙醒，继续揽拌lOmin。过滤，母液用盐酸调节抑为酸性， 过滤或萃取，并用冰水洗涂，烘干得到2-( 1，2，3-砸二挫-4-基）乙酸。
[0151] 将2-( 1，2，3-砸二挫-4-基）乙酸O . 4：3g加入SOmLS 口瓶中，通氮气。加入四氨巧喃 6.25g，揽拌后加入儿茶酪棚烧0.85g，反应化，再加入甲基娃烷基）亚憐酸醋3.4mL， 反应化后，加入甲醇7.4mL，反应化。减压蒸馈至油状物产生，再加入55mL乙酸析出沉淀，沉 淀用水重结晶得到产品1-?基-2-(1,2,3-砸二挫-4-基)-亚乙基-I，1-二麟酸。
[0152] 该白色固体鉴定：
[0153] lH-NMR(400MHz，DMS0)S5.16(S，lH)，?.68(S，2H)。MS化SI，m/z)338.94(+H)
[0154] 经上述鉴定可W确定该化合物为1-径基-2-(1,2,3-砸二挫-4-基)-亚乙基-1,1- 二麟酸。
[01巧]实施例7:化合物XC-7
[0156] 本实施列举二麟酸化合物为：1-径基-1-(2-氧代-1,3-砸挫烧-4-基)-亚甲基-1， 1，-二麟酸。结构式如下：
[0157
[01化」 该化令、倒具体制爸力保观h :
[0159] 室溫下将3.Og砸粉加入IOmL水中，将3.Og棚氨化钢溶于19mL水中，然后揽拌下缓 慢滴加砸粉水溶液中。再加入等量的3.Og砸粉加入W上反应，揽拌15分钟。将反应瓶置于短 暂的蒸气浴中1到2分钟使反应完成。3.?氯代丙氨酸的盐酸盐溶于20mL水中调节抑值到9。 2小时内将此溶液缓慢滴加到上述砸的溶液中。在37°C下继续揽拌过夜。调节反应溶液pH值 到2，再加入21 Smg盐酸径胺。抽滤除去过量的砸粉，滤液调节抑值6~6.5，然后放置在4 °C条 件下3~5天结晶。抽滤得到澄黄色晶体然后溶于Imol/L的盐酸溶液20mL中。再抽滤掉多余 的固体，调节滤液pH值6~6.5,再放置3~5天结晶。最后抽滤得到黄色晶体，真空干燥过夜 得产品k砸代脫氨酸。
[0160] 0.25g，0.075mmol k砸代脫氨酸加入盛有10血0.05mol/L的NaOH和3mL乙醇溶液 的单颈烧瓶中，将0.1 g,2.6mmol的棚氨化钢IOmin内缓慢加入上述溶液中。将此黄色溶液继 续揽拌20分钟至无色，然后至于冰浴中，调节溶液抑值5~6，将0.2g，1.2mmol的1,1幾基二 咪挫加入上述溶液中时间30min，然后揽拌反应1小时。假设溶液又变成黄色，将上述加入二 幾咪挫的步骤重复再做。反应完后将溶液酸化至pH值等于2,然后用15mL乙酸乙醋萃取S 次。合并有机相，并用饱和氯化钢溶液15mL洗2次。用无水硫酸儀干燥有机相，旋干后真空干 燥得产品1-(2-氧代-1，3-砸挫烧-4-基）甲酸。
[0161 ] 将0.26g中间体1-( 2-氧代-1，3-砸挫烧-4-基）甲酸，2g THF，0.29g儿茶酪棚烧一 并加入到SOmL= 口瓶中，产生大量气泡，固体溶解，室溫反应化，向瓶内加入1.32mL = -( = 甲基娃烷基)亚憐酸醋，室溫反应16h，再加入甲醇反应比。旋蒸溶剂，得到浅黄色油状固体， 加入IOmL甲醇溶解，再加入50血乙酸析出白色沉淀，放置化，倒去上清液，60°C真空干燥化， 得到浅黄色固体1-径基-1-(2-氧代-1,3-砸挫烧-4-基)-亚甲基-1，1，-二麟酸。
[0162] 该白色固体鉴定：
[0163] IH-醒 R(400MHz，DMS0)S8.16(D，lH)，S3.85(Q，lH)，Sl.94(D，2H)〇MSUSI，m/z) 341.90(+H)
[0164] 经上述鉴定可W确定该化合物为1-?基-1-(2-氧代-I，3-砸挫烧-4-基)-亚甲基- 1，1，-二麟酸。
[01化]实施例8:化合物XC-8
[0166] 本实施列举二麟酸化合物为：1-径基-2-(2-氨基-1,3-砸挫-4-基)-亚乙基-1,1- 二麟醇娃说前n 了.
[0167]
[016引U下…" 一，《户" ,.
[0169] 将10邑(23111111〇1)乙酷乙酸乙醋溶于301111^乙酸中，揽拌降溫至0°(：^下后，向反应瓶 内缓慢滴加12.5g(78mmo 1)Bn，控制反应瓶内溫度在-5°C~(TC之间，加毕，反应化，得褐黄 色液体。反应完毕后向反应液中加入100mL水，再用C此Cl2(100mLX3)萃取，干燥有机化旋 干溶剂，得浅黄色液体4漠乙酷乙酸乙醋。
[0170] 取78g(68mmol)e-CD溶于1360mL水中，将其加热至50°C，并不断揽拌，使其溶解呈 无色透明状。取16g(SOmmol M-漠乙酷乙酸乙醋，溶于SOmL丙酬中。将4-漠乙酷乙酸乙醋的 丙酬溶液快速滴加至e-CD的50°C水溶液中，并不断揽拌，向其中迅速加入1?砸脈。将上述 混合溶液在氮气保护下50°C反应化。反应完毕后，用乙酸乙醋（200mLX 5)萃取，合并有机 相，用无水MgS〇4干燥过夜，过滤，旋干得浅黄色固体2-(2-氨基-1,3砸挫-4-基)-乙酸乙醋。 [0171 ] 取2.35g(0 . Olmol)的2-(2-氨基-1，3砸挫-4-基）-乙酸乙醋，加入90mL二氯甲烧 中，再加入100血Imol/L的BBn二氯甲烧溶液(O.lmol BBr3)，-5°C~0°C条件下揽拌反应化， 旋干。用甲醇溶解，浓缩，加入4~5倍的体积的乙酸，静置析出淡黄色沉淀，即得水解产物2- (2-氨基-1,3砸挫-4-基)-乙酸。
[0172] 将2-(2-氨基-1,3砸挫-4-基)-乙酸0.46g加入50血S口瓶中，通氮气。加入四氨巧 喃6.25g，揽拌后加入儿茶酪棚烧0.85g，反应化，再加入甲基娃烷基）亚憐酸醋 3.4mL，反应16h后，加入甲醇7.4mL反应2h。减压蒸馈至油状物产生，再加入55血乙酸析出沉 淀，沉淀用水重结晶得到白色固体1-径基-2-(2-氨基-1,3-砸挫-4-基)-亚乙基-1,1-二麟 酸。
[0173] 该白色固体鉴定：
[0174] IH-醒R(400MHz，DMS0)扣.19(S，lH)，S2.61(S，2H)，S7.25(S，2H)〇MS(ESI，m/z) 352.95(+H)
[01巧]经上述鉴定可W确定该化合物为1-径基-2-(2-氨基-1,3-砸挫-4-基)-亚乙基-1， 1-二麟酸。
[0176] 实施例9:化合物XC-9
[0177] 本实施列举二麟酸化合物为1-径基1-(2-氨基-4-甲基-1,3-砸挫-5-基)-亚甲基- 1,1-二麟酸。结构式如下：
[0178
[0179- ___________________________________________
[0180] 将8g(50mmol)NBS和0.05g对甲基苯横酸加入至150mL二氯甲烧中，然后向其中加 入6.5g巧Ommol)乙酷乙酸乙醋，揽拌冰浴降溫至(TC左右反应地，后常溫反应过夜，TLC监测 反应，反应完毕后旋干，用正己烧溶解，过滤，将滤液旋干，得无色油状物2-漠乙酷乙酸乙 醋。
[0181] 取3.42g(3mmol)e-环糊精溶于60血水中，将其加热至50°C，并不断揽拌，使其溶解 呈无色透明状。取0.7g(3.3mmo 1)2-漠乙酷乙酸乙醋，溶于3血丙酬中。将2-漠乙酷乙酸乙醋 的丙酬溶液快速滴加至e-环糊精的50°C水溶液中，并不断揽拌，向其中迅速加入0.5g (4mmol)砸脈。将上述混合溶液在氮气保护下50°C反应化。反应完毕后，用乙酸乙醋（200mL X 5)萃取，合并有机相，用无水MgS〇4干燥过夜，过滤，旋干得白色固体1- (2-氨基-4-甲基- 1,3-砸挫-5-基）甲酸乙醋。
[0182] 取2.35g(0.Olmol)的1-(2-氨基-4-甲基-1,3-砸挫-5-基）甲酸乙醋，加入90mL二 氯甲烧中，再加入100血Imol/L的BBn二氯甲烧溶液(0.1molB化3)，-5°C~0°C条件下揽拌反 应化，旋干。用甲醇溶解，浓缩，加入4~5倍的体积的乙酸，静置析出淡黄色沉淀，即得水解 产物1-(2-氨基-4-甲基-1,3-砸挫-5-基）甲酸。
[0183] 将1-(2-氨基-4-甲基-1，3-砸挫-5-基）甲酸0.46g加入SOmLS 口瓶中，通氮气。加 入四氨巧喃6.25g，揽拌后加入儿茶酪棚烧0.85g，反应化，再加入= -( =甲基娃烷基）亚憐 酸醋3.4m L，反应化后，加入甲醇7.4m L反应化。减压蒸馈至油状物产生，再加入55mL乙酸 析出沉淀，沉淀用水重结晶得到白色固体1-径基1-(2-氨基-4-甲基-1,3-砸挫-5-基)-亚甲 基-1,1-二麟酸。
[0184] 该白色固体鉴定：
[0185] lH-NMR(400MHz，DMS0)S7.22(S，2H)，S2.02(S，3H)〇MS(ESI，m/z)352.87(+H)
[01化]经上述鉴定可W确定该化合物为1-径基1-(2-氨基-4-甲基-1,3-砸挫-5-基)-亚 甲基-1,1-二麟酸。
[0187] 实施例10:化合物XC-IO
[0188] 本实施例举二麟酸化合物为:2-(2,4-二氧代-1,3-砸挫烧-5-基)-亚乙基-1,1-二 麟酸。结构式如下：
[018(
[0190] 该化合物具体制备方法如下：
[0191] 将206g亚甲基二麟酸四异丙醋缓慢滴加至25.2g氨化钢600mL DMF中并揽拌，滴加 完毕后室溫反应化。
[0192] 在上述溶液中加入186.4g 5-漠甲基-1，3-砸挫烧-2，4-戊二酬，加毕升溫至80°C 反应4h，反应完毕，向反应液中加入250mL乙酸乙醋萃取，收集有机相并减压蒸馈，得到2- (2,4-二氧代-1,3-砸挫烧-5-基)-亚乙基-1，1-二麟酸四异丙醋
[0193] 向33g 2-(2,4-二氧代-1,3-砸挫烧-5-基)-亚乙基-1,1-二麟酸四异丙醋中加入 SOOmL甲醇和ieOOmL浓盐酸于Iior回流化。反应完毕后将反应液过滤，滤液蒸干，残余物用 甲醇洗涂并105 °C真空干燥1化得到白色固体。
[0194] 该白色固体鉴定：
[01 巧]1H-NMR(400MHZ，DMS0)S10.20(S，1H)，S2.45(T，1H)，S1.75(T，2H)，S1.63(T，1H)。 MS 化SI，m/z)353.8(+H)
[0196] 经上述鉴定可W确定该化合物为2-(2,4-二氧代-1,3-砸挫烧-5-基)-亚乙基-1， 1-二麟酸。
[0197] 实施例11:化合物XC-Il
[019引本实施列举二麟酸化合物为：2-(2-甲基-1,3-砸挫烧-4-基)-亚乙基-1,1，-二麟 酸。结构井々n下.
[0199]
[0200] 将206g亚甲基二麟酸四异丙醋缓慢滴加至25.2g氨化钢600mL DMF中并揽拌，滴加 完毕后室溫反应化。
[0201] 在上述溶液中加入157.4g 4-(2-漠乙基)-2-甲基-1,3-砸挫烧，加毕升溫至80°C 反应4h，反应完毕，向反应液中加入250mL乙酸乙醋萃取，收集有机相并减压蒸馈，得到2- (2-甲基-1,3-砸挫烧-4-基)-亚乙基-1，1，-二麟酸四异丙醋。
[0202] 向28g 1-(2-甲基-1,3-砸挫烧-4-基）-亚甲基-1,1，-二麟酸四异丙醋中加入 SOOmL甲醇和ieOOmL浓盐酸于Iior回流化。反应完毕后将反应液过滤，滤液蒸干，残余物用 甲醇洗涂并105 °C真空干燥I化得到白色固体2-( 2-甲基-I，3-砸挫烧-4-基)-亚乙基-I，I，- 二麟酸。
[020引该白色固体鉴定：
[0204] IH-醒R(400MHz，DMS0)S10.20(S，1H)，S2.9(M，1H)，S2.72(M，1H)，S1.72(T，1H)，5 1.65(D，2H)，Sl.47(T，2H)，Sl.05(D，3H)。MS化SI，m/z)339.87(+H)
[02化]经上述鉴定可W确定该化合物为2-(2-甲基-1,3-砸挫烧-4-基)-亚乙基-1，1，-二 麟酸。
[0206] 二麟酸化合物的功能试验例
[0207] 受试药物:XC-I~11，自制，见实施例。
[0208] 阳性对照药:阿仑麟酸钢，中国食品药品检定研究院（批次：100901-21302);挫来 麟酸，中国食品药品检定研究院(批次:100778-200501)
[0209] 空白对照:为除去受试药物、阿仑麟酸钢W及挫来麟酸外的药物溶媒。
[0210] 通过细胞实验评价系列XC化合物的抗骨质疏松能力。
[0211] 采用成骨细胞(OBs)及破骨细胞(OCs)两种体外细胞模型对运11种XC化合物的体 外抗骨质疏松能力进行初步评价，并W目前临床上被公认治疗骨质疏松药物阿仑麟酸钢和 挫来麟酸作为阳性对照；系列XC化合物对成骨细胞功能的影响用昆明种24h内新出生乳鼠 烦盖骨为原代的成骨细胞，评价药物对促成骨细胞增殖能力和促成骨细胞矿化能力影响。 系列XC化合物对破骨细胞功能的影响用购自日本C0SM0BI0公司的大鼠破骨细胞前体试剂 盒，评价药物对抑制破骨细胞活力的影响。
[0212] 对成骨细胞功能的影响实验研究
[0213] 成骨细胞的分离培养，取2地内新出生乳鼠10只左右，拉颈处死后投入盛有75%乙 醇的烧杯内消毒5min。成骨细胞原代培养采用通用的培养方法，培养出符合实验要求数量 和质量的成骨细胞。
[0214] 实验分为空白对照组(CTL组）、挫来麟酸组(Z化组）、阿仑麟酸组(ALN组)和11个XC 化合物组，各实验组浓度为l(T8mol/L。数据分析采用SPSS软件的t检验进行分析，P<0.05认 为与对照组(CTL组)有显著性差异。
[0215] 促成骨细胞增殖能力
[0216] 大鼠成骨细胞W3 X 10^孔接种于96孔培养板中，每孔体积10化L，每组设6个平行 孔进行测定。过夜培养后(37°C，5%C02)，待细胞贴壁完全，吸干培养基，按照实验分组情况 每孔分别加入含对应药物的培养基10化L，继续培养后第1、2、3天取每组6孔样本进行检测。 增殖能力测定采用CCK-8试剂盒在测定，原理为CCK-8溶液中的WST-8可被活细胞内的脱氨 酶氧化还原后生成的澄黄色甲贈染料溶解在培养基中，生成的甲贈量与活细胞的数量成正 比，测定溶液的吸光度值(0.D)即可间接反应细胞的数量，即增殖能力。W成骨细胞增殖促 进率为评价结果。成骨细胞增殖促进率=[(0.曲^/0. D础.?)-1 ] X 100 %。结果见下表1。
[0217] 表1促成骨细胞增殖平均促进率（％ )
[021 引 [(
[0220] 促成骨细胞矿化能力
[0221] 每组设3个平行孔进行测定，大鼠成骨细胞W4X10シ孔接种于24孔培养板中，每 孔体积50化L。过夜培养后（37 °C，5 %C〇2 )，待细胞贴壁完全，吸干培养基。每孔分别加入含 对应药物浓度的培养基50化L，向加样培养基中加入矿化诱导剂(含2mM0-甘油憐酸钢(0- GP) ,WnM地塞米松和50iig/mL抗坏血酸），每3d换液一次，继续培养至第21天，每组3孔样本 进行检测。
[0222] 矿化能力测定用细胞的茜素红染色，其中矿化结节被染成橘红色。再向染色的成 骨细胞中加入10 %西化氯胺溶液，每孔加20化L，静置30min，橘红色红色结节逐渐被溶解， 溶液呈现紫红色。将溶液转入96孔板中，每孔10化L，于570nm波长处测定各孔吸光度(0.D)。 矿化结节形成促进率（％ ) = [ (0.曲捕/0.曲顺)-1 ] X 100%。结果见下表2:
[0223] 表2促成骨细胞矿化能力平均促进率（％ )
[0224]
[0225]
[0226] 系列XC化合物药物对促成骨细胞增殖能力和促成骨细胞矿化能力影响结果表明， 对成骨细胞增殖能力第1天除XC2、X 口和XC8外，其它药物与Z化和ALN比较，皆具有一定的促 进成骨细胞增殖作用，第2天除XC2外皆促进增殖，而第3天各XC药物皆具有促进成骨细胞增 殖作用。各XC药物组与ZOL组和ALN组比较，皆能促进成骨矿化能力。从上述结果表明，系列 XC化合物皆有促成骨能力。
[0227] 对破骨细胞功能影响的实验研究
[02%]破骨细胞的骨吸收能力测定采用日本C0SM0BI0公司的破骨细胞骨吸收检测试剂 盒进行测定。取出骨吸收检测试剂盒中的48孔板，每孔小屯、沿孔壁加入0.25mL试剂盒中的 BO肥RESORPTION ASSAY FACS，每孔接种细胞悬液500化，每孔接种细胞6.5X103cells/ mL。每孔加入100 X药物母液各扣L。连续培养4~7天，中间不换液。连续培养4天后，从骨吸 收检测板各孔中取100化细胞培养上清至96孔板中。96孔板各孔中加入50化试剂盒中的 BONE RESORPTION ASSAY BUFFER,轻轻混匀。用巧光酶标仪检测各孔的吸光度值，若骨吸收 效果不明显，可将骨吸收检测板全部更换新鲜无酪红的培养基，再相应加入药物，再连续培 养至7d后重复检测。抑制破骨细胞活力抑制率（％) = [1-(0.曲端/0.D础,S)] X 100%。结果见 下表3:
[0229]表3抑制破骨细胞活力平均抑制率（％ )
[0?301
[0：
[0232] 系列XC化合物药物对破骨细胞抑制活力，从表3结果可见，各XC药物无论是第4天 还是第7天皆有一定的抑制破骨细胞活力，其中，XC4作用比ZOL稍强。
[0233] 总之，通过系列XC化合物对体外成骨细胞和破骨细胞功能的评价研究，表明，XC化 合物不仅保持与ZOL和ALN相似的抑制破骨细胞活力，还具有比ZOL和ALN较好的促进成骨细 胞增殖作用。故可W初步推断，对老年骨质疏松患者，可使骨细胞的骨形成和骨破坏维持一 个较为理想的动态平衡。
[0234] 进一步，按照本发明方法一或二合成下列化合物：



【主权项】
1. 一种二膦酸化合物，具有式Π 的结构：Ri为Η、ΟΗ或者卤素；其中，ηι = 0 ~10，η2 = 0 ~10，η3 = 0 ~ 10; Ar为亚芳基、杂亚芳基或取代基R99取代的亚芳基;取代基R99选自C1~C6的烷基、C1~C6 的取代烷基、卤素 、-CN、-N02、-OH、氨基或C1-C6的烷氨基； R3、1?4、1?5、1?6中至少含有一个硒或者硫原子，其余是碳或者氮原子； 此、1?4、1?5、1?6之间连接方式为单键或双键； 在尺3、1?4、1^、1?6上有取代基1?98，取代基1?98可以是一个或多个；当有多个取代基1?98时，可以 是相同的取代基，也可以是不同的； 所述的取代基R98各自独立的选自：氢原子、氧原子、硒原子、氨基、亚氨基、卤素、-^- N〇2、-OH、-OR97、-COOR97、-OCOOR97、⑶R97、-⑶N( R97 ) 2，-0⑶N( R97 ) 2、-SR96、-S02R96、-S〇2N (R97)2、-S0R97、C1~CIO的烷基、Cl~CIO的取代烷基、C2~C6的烯基、C2~C6的取代烯基、C2 ~C6的炔基、C2~C6的取代炔基、芳基或取代芳基； 其中，R96和R97各自独立地选自：氢、C1~C6的烷基、芳基、取代基R95取代的C1~C6的烷 基或取代基R95取代的芳基； 其中，取代基R95独立地选自-OH、卤原子、-NH2、-CN、C1-C4的烷基，C2-C4的烯基。2. 根据权利要求1所述的化合物，其特征在于:RiSH、OH、F、Cl、Br或I。3. 根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：_或者其中，m = 0 ~4，ri2 = 0~1，Π3 = 0~5。4. 根据权利要求1所述的化合物，其特征在于:所述取代基R99可以有一个或多个； 当有多个取代基R99时，各个取代基R99相互之间为独立选择，即多个取代基R99可以相 同，也可以不同； 取代基R99选自甲基、乙基、丙基、异丙基、卤素、-^-勵2、-0!1、氨基、(：1-03的烷氨基。最 优选的，取代基R99选自甲基、卤素、-CN、-N02、-OH、氨基、甲基氨基或乙基氨基。5. 根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：或者在尺2中111、112、113处的亚烷基可以是直链亚烷基，也可以是具有支链的亚烷基。 ，.6. 根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：Ar为苯环，即Ar为亚苯基； 或者Ar为取代基R94取代的亚芳基，取代基R94可以有一个或多个，取代基R94可以相同也 可以不同； 取代基R94各自独立的选自：C1~C6的烷基、C1~C6的任选被取代的烷基、卤素、-CN、-N〇2、-OH、氛基、C1 -C6的烷基氛基。7. 根据权利要求1所述的化合物，其特征在于： 取代基R上的1?3、1?4、1^、1?6中有一个是硒原子或硫原子，1~2个氮;1?3、1?4、1?5、 R6之间连接方式为单键或双键。8. 根据权利要求1所述的化合物，其特征在于： 取代基R98中的所述的C1~CIO的取代烷基、C2~C6的取代烯基、C2~C6的取代炔基和取 代芳基，是C1~C4的取代烷基、C2~C3的取代烯基、C2~C3的取代炔基和取代苯基。9. 根据权利要求1所述的化合物，其特征在于： 取代基R98中的C1~C10的取代烷基、C2~C6的取代烯基、C2~C6的取代炔基和取代芳基 上的取代基团各自独立的选自：羟基、卤原子、羧基、氰基、氨基。10. 根据权利要求1所述的化合物，其特征在于： 取代基R98中所述的C1~C10的取代烷基、C2~C6的取代烯基、C2~C6的取代炔基和取代 芳基是选自以下之一的基团：羟甲基、羟乙基、氯甲基、羧甲基、三氟甲基、齒取代乙基、甲氧 甲基、氰基甲基、氰基乙基、羧甲基、羧乙基、氨甲基、氨乙基、甲基苯基、乙基苯基、二甲基苯 基、甲基乙基苯基、齒取代乙烯、齒取代丙烯、齒取代丙炔、齒取代丙乙炔、羟基苯基、氰苯 基、羧基苯基。11. 根据权利要求1所述的化合物，其特征在于： 所述式Π 结构的二膦酸化合物中，R为以下几种结构通式之一：上述化合物中R"?~Ri6选自：氢、氧、氨基、亚氨基、|^i^、-CN、-N〇2、-OH、-〇R97、 -COOR97、-OCOOR97、COR97、-CON (R97) 2，-OCON (R97) 2、-SR96、-SO2R96、-SO2N (R97) 2、-SOR97、C1 ~C9 的烷基、 取代基R95取代的C1~C9烷基、C2~C6的烯基、取代基R95取代的C2~C6烯基、C2~C6的炔基、 取代基R 95取代的C2~C6炔基、芳基或取代基R95取代的芳基； 其中，R96和R97各自独立地选自氢、C1~C6的烷基、芳基、取代基R95取代的C1~C6的烷基 或取代基R95取代芳基； 其中，取代基R95独立地选自-OH、卤原子、-NH2、-CN、C1-C4的烷基，C2-C4的烯基。12. 根据权利要求11所述的化合物，其特征在于： 化合物中R?~Ri6与5元环连接方式可以为单键，也可以为双键。13. 根据权利要求11所述的化合物，其特征在于： 式Π 化合物中R优选为以下取代基之一：14. 根据权利要求1所述的化合物，其特征在于:所述二膦酸化合物为以下化合物之一：15.-种制备上述具有式Π 结构的二膦酸化合物的方法，先合成一种含硒五元杂环的 有机羧酸Κ，结构如下：然后，通过式IX化合物合成含硒五元杂环的二膦酸化合物； 含硒五元杂环的有机羧酸式IX中加入硼烷类的醚类溶液，将有机羧酸上面的氢取代反 应，时间约30min~120min，反应温度为0°C~60°C，IX与硼烷的摩尔比为1:1~1:5;再加入 烷基类亚磷酸酯进行亲核取代，反应时间为2h~24h，得到膦酸烷基酯，IX与烷基类亚磷酸 酯的摩尔比为1:2~1:6;最后加入醇，继续反应lh~4h，完成醇水解反应;最终得到含硒杂 环的二膦酸化合物；16.-种制备上述具有式Π 结构的二膦酸化合物的方法，先合成一种含硒五元杂环的 有机羧酸K，结构如下：然后，通过式IX化合物合成含硒五元杂环的二膦酸化合物； 将式IX化合物与亚磷酸、三氯化磷在80°C~120°C温度下反应2h~8h，向反应物中加入 水，lg化合物IX中加入lmL~40mL水，于90°C~120°C回流lh~6h，化合物IX与亚磷酸的摩尔 比为1:1~1:6,化合物IX与三氯化磷摩尔比为1: 2~1:6,反应液过滤，滤液中加入醇溶液， 并于-5 °C~5 °C放置12h~48h，抽滤，固体用水洗涤，60 °C~120 °C真空干燥4h~1 Oh，得到具 有式Π 结构的二膦酸；17. -种制备具有式Π 结构的二膦酸的制备方法，先合成一种含硒五元杂环的卤代烷 烃X，结构如下：式中Rl7为卤素； 通过式X化合物合成具有式Π 结构二膦酸， (1) 亚甲基的质子活化： 亚甲基二膦酸四异丙酯与强碱进行亚甲基质子活化反应，反应时间为lh~4h，反应温 度为-5°C~40°C，强碱与亚甲基二膦酸四异丙酯的摩尔比为1:1~1:4,优选为1:1~1:3; (2) 烷基化反应： 向上述所得反应液中加入具有式X结构卤代烷烃进行烷基化反应，反应温度为60°C~ 150°C，反应时间为2h~5h，X与亚甲基二膦酸四异丙酯的摩尔比为1:1~1:3;反应完毕后 加入有机溶剂至反应液中萃取，收集有机相并减压蒸馏得到含五元硒杂环的二膦酸四异丙 酯化合物； (3) 水解反应： 将含有五元硒杂环的二膦酸四异丙酯化合物中加入醇和浓盐酸，lg化合物中加入5mL ~50ml醇溶液和5mL~60mL浓盐酸，于60°C~110°C，优选60-105°C，反应2h~10h，减压蒸馏 除去溶剂，残余物用醇洗涤，得到固体于50°C~100°C真空干燥4h~10h，得到二膦酸化合 物；18.具有式Π 结构的二膦酸化合物在制备治疗骨代谢性疾病的药物中的应用。
【文档编号】A61P19/10GK105924470SQ201610541497
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年7月11日
【发明人】李明起, 曾永龙, 邓启民, 蒋雪, 段玉春, 潘俊男, 程作用, 王翰, 曹刚, 文德仲, 刘媛媛
【申请人】成都云克药业有限责任公司