一种硫酸羟基氯喹聚谷氨酸聚合物及其制备方法和应用
【专利摘要】本发明公开了一种硫酸羟基氯喹聚谷氨酸聚合物及其制备方法和应用，所述硫酸羟基氯喹聚谷氨酸聚合物是由硫酸羟基氯喹与聚谷氨酸按照1:(1?6)的重量比发生酯化反应形成的聚合物。该硫酸羟基氯喹聚谷氨酸聚合物在用于治疗盘状红斑狼疮及系统性红斑狼疮疾病中的应用。本发明将聚谷氨酸与硫酸羟基氯喹进行交联得到硫酸羟基氯喹聚谷氨酸聚合物，对硫酸羟基氯喹的羟基进行修饰，改变其原有的某些理化性质，并提高了药物活性，增强其疗效，减少其副作用，提高药物的缓释作用，减少患者的服药频次；用于治疗盘状红斑狼疮及系统性红斑狼疮疾病时，聚谷氨酸在较缓慢的降解过程中能护送药物抵达目的病灶部位，达到精准治疗的目的具有一定的临床应用价值。
【专利说明】
-种硫酸哲基氯喧聚谷氨酸聚合物及其制备方法和应用
技术领域
[0001] 本发明设及技术领域，具体是设及一种硫酸径基氯哇聚谷氨酸聚合物及其制备方 法和应用。
【背景技术】
[0002] 硫酸径基氯哇，药品，主要成分是2-4-(7-氯-4-哇嘟基)氨基戊基乙氨基-乙醇硫 酸盐。为薄膜衣片，除去包衣后显白色或类白色。用于治疗盘状红斑狼疮及系统性红斑狼 疮。
[0003] 硫酸径基氯哇在长期治疗时可能发生下列反应，但不同化合物的不良反应其及类 型和发生率可能有所不同。（1)中枢神经系统反应:兴奋、神经过敏、情绪改变、梦魔、精神 病、头痛、头昏、眩晕、耳鸣、眼球震颤、神经性耳聋、惊厥、共济失调。（2)神经肌肉反应:眼外 肌麻搏、骨骼肌软弱、深肌腫反射消失或减退。（3)眼反应:①睫状体:调节障碍，伴视觉模糊 的症状。该反应具剂量相关性，停药后可逆转。②角膜:一过性水肿、点状至线状混浊、角膜 敏感度减小。常见可逆性伴或不伴症状(视觉模糊，在光线周围出现光晕、畏光）的角膜改 变。角膜沉着可能早在开始治疗后3周即已出现。径氯哇角膜改变及视觉副反应的发生率似 比氯哇低得多。③视网膜:黄斑水肿、萎缩，异常色素沉着[轻度色素小点出现"牛眼(bull' s-eye)"外观]，中屯、凹反射消失，在暴露于明亮光线(光应激试验)之后黄斑恢复时间增加， 在黄斑、黄斑旁及周围视网膜区对红光的视网膜阔提高。其他眼底改变包括视神经乳头苍 白和萎缩，视网膜小动脉变细，视网膜周围细颗粒状色素素乱W及晚期出现凸出型脉络膜。 ④视野缺损：中屯、周围或中屯、旁盲点、中屯、盲点伴视敏度下降、罕见视野狭窄。归因于视网 膜病变的最常见的视觉症状是：阅读及视物困难(遗漏词、字母或部分物体），畏光，远距视 觉模糊，中屯、或周围视野有区域消失或变黑，闪光及划线。视网膜病变似具有剂量相关性， 在每日1次治疗数月（罕见)至数年时出现;少数病例在抗追药治疗停止后数年报道。用4-氨 基哇嘟化合物治疗追疾每周给药1次，长期应用未见视网膜病变。视网膜改变患者可能有视 觉症状或者没有症状(伴或不伴视野改变），罕见不伴视网膜明显改变的视觉盲点或视野缺 损。视网膜病变即使停药后仍会进展。有许多患者早期的视网膜病变(黄斑色素沉着，有时 伴中屯、、视野缺损)在治疗中止后完全消失或缓解。对红色视标出现中屯、、旁盲点（有时称： 前黄斑病变)是早期视网膜机能障碍的征兆，停药后通常是可逆的。少数视网膜改变的病 例，据报道发生在仅接受径氯哇的患者，通常包括在定期眼科检查中发现的视网膜色素沉 着改变，某些病例也存在视野缺损，已报道1例延迟性视网膜病变伴随视觉缺失，发生在停 用径氯哇后。（5)皮肤反应:头发变白、脱发、痊痒、皮肤及粘膜色素沉着、皮疹(等麻疹、麻疹 样、苔薛样、斑丘疹、紫齋、离屯、形环形红斑和剥脱性皮炎）。（6)血液学反应:如再生障碍性 贫血、粒细胞缺乏、白细胞减少，血小板减少，葡萄糖-6-憐酸脱氨酶(G-6-PD)缺乏的个体发 生溶血。（7)肠胃道反应:食欲不振、恶屯、、呕吐、腹泻及腹部痛性疫李。（8)其他:体重减轻， 倦怠，化嘟症恶化或加速W及非光敏性牛皮癖。局部报道罕见屯、肌病变，其与径氯哇的关系 尚不明确。
[0004] 药物的化学结构修饰是基于药物原有的基本化学结构，仅对其中某些官能团进行 化学修饰，通过修饰可能会改变原有的理化性质，在临床应用上有极其重要的作用。药物在 研究和应用的过程中，常会出现一些影响药物发挥应有的作用和影响药物应用的因素。如 药代动力学性质不理想而影响药物的吸收，导致生物利用度低，或由于化学结构的特点引 起代谢速度过快或过慢等情况;也会由于药物作用的特异性不高，产生毒副作用;还有一些 其他原因，如化学稳定性差、溶解性能差、有不良的气味或味道、对机体产生刺激性或疼痛 等。运就需要对药物的化学结构进行修饰，W克服上述缺点，提高药物的活性和增强疗效。
[0005] 丫-聚谷氨酸是一种氨基酸聚合物，在自然界或人体内能生物降解成内源性物质 谷氨酸，不易产生蓄积和毒副作用。在临床领域应用较多，能够准确递送药物至指定组织， 是一种理想的药物载体，所W将T -聚谷氨酸与硫酸径基氯哇进行交联得到无副作用的药 物具有一定的临床应用价值。
【发明内容】
[0006] 本发明解决的技术问题是提供一种硫酸径基氯哇聚谷氨酸聚合物及其制备方法 和应用。
[0007] 本发明的技术方案是：
[000引一种硫酸径基氯哇聚谷氨酸聚合物，是由硫酸径基氯哇与聚谷氨酸按照1:(1-6) 的重量比发生醋化反应形成的聚合物。
[0009] 进一步地，所述硫酸径基氯哇的径基与聚谷氨酸的簇基发生醋化反应结合形成 的。
[0010] 进一步地，所述聚合物中硫酸径基氯哇的含量在14.28-50 % (重量比）范围内。
[0011] 进一步地，所述聚谷氨酸的分子量为30000-50000。
[0012] 进一步地，所述的聚谷氨酸为丫-聚谷氨酸。
[0013] -种硫酸径基氯哇聚谷氨酸聚合物，其制备方法为：
[0014] (1)按1:(1-6)的重量比称取硫酸径基氯哇与聚谷氨酸，备用；
[0015] (2)将聚谷氨酸溶于去离子水中，磁力揽拌，形成l-3mg/ml的聚谷氨酸水溶液；
[0016] (3)将硫酸径基氯哇溶于去离子水中，磁力揽拌，形成l-3mg/ml的硫酸径基氯哇水 溶液；
[0017] (4)将聚谷氨酸水溶液置于反应容器中，再将反应容器置于65-80°C的热水浴中至 恒溫，然后向反应容器中加入硫酸径基氯哇水溶液，W质量浓度为85-90%的浓硫酸溶液作 为催化剂，浓硫酸的加入量为所述合液的质量的5-12%，进行反应，先在65-80°C的热水浴 中反应5-lOmin，然后在调节热水浴溫度至85-90°C至反应完全；
[0018] (5)反应结束后向反应液中加入去离子水，静置分层，弃去上层清液，将底物洗涂， 干燥，得到硫酸径基氯哇聚谷氨酸聚合物。
[0019] -种硫酸径基氯哇聚谷氨酸聚合物在用于治疗盘状红斑狼疮及系统性红斑狼疮 疾病中的应用。
[0020] 本发明的有益效果是:本发明将聚谷氨酸与硫酸径基氯哇进行交联得到硫酸径基 氯哇聚谷氨酸聚合物，对硫酸径基氯哇的径基进行修饰，改变其原有的某些理化性质，，并 提高了药物活性，增强其疗效，减少其副作用，提高药物的缓释作用，减少患者的服药频次； 用于治疗盘状红斑狼疮及系统性红斑狼疮疾病时，聚谷氨酸在较缓慢的降解过程中能护送 药物抵达目的病灶部位，达到精准治疗的目的具有一定的临床应用价值。
【具体实施方式】
[0021] 实施例1:
[0022] -种硫酸径基氯哇聚谷氨酸聚合物，是由硫酸径基氯哇与聚谷氨酸按照1:1的重 量比发生醋化反应形成的聚合物。所述硫酸径基氯哇的径基与聚谷氨酸的簇基发生醋化反 应结合形成的。所述聚合物中硫酸径基氯哇的含量在50% (重量比）范围内。所述聚谷氨酸 的分子量为30000。所述的聚谷氨酸为丫 -聚谷氨酸。
[0023] 该硫酸径基氯哇聚谷氨酸聚合物的制备方法为：
[0024] (1)按1:1的重量比称取硫酸径基氯哇与聚谷氨酸，备用；
[0025] (2)将聚谷氨酸溶于去离子水中，磁力揽拌，形成Img/ml的聚谷氨酸水溶液；
[0026] (3)将硫酸径基氯哇溶于去离子水中，磁力揽拌，形成Img/ml的硫酸径基氯哇水溶 液；
[0027] (4)将聚谷氨酸水溶液置于反应容器中，再将反应容器置于65°C的热水浴中至恒 溫，然后向反应容器中加入硫酸径基氯哇水溶液，W质量浓度为85%的浓硫酸溶液作为催 化剂，浓硫酸的加入量为所述合液的质量的5%，进行反应，先在65°C的热水浴中反应5min， 然后在调节热水浴溫度至85°C至反应完全；
[0028] (5)反应结束后向反应液中加入去离子水，静置分层，弃去上层清液，将底物洗涂， 干燥，得到硫酸径基氯哇聚谷氨酸聚合物。
[0029] 将该硫酸径基氯哇聚谷氨酸聚合物在用于治疗盘状红斑狼疮及系统性红斑狼疮 疾病中的应用，疗效显著，副作用小。
[0030] 实施例2:
[0031] -种硫酸径基氯哇聚谷氨酸聚合物，是由硫酸径基氯哇与聚谷氨酸按照1:3.5的 重量比发生醋化反应形成的聚合物。所述硫酸径基氯哇的径基与聚谷氨酸的簇基发生醋化 反应结合形成的。所述聚合物中硫酸径基氯哇的含量在22.22% (重量比）范围内。所述聚谷 氨酸的分子量为40000。所述的聚谷氨酸为丫 -聚谷氨酸。
[0032] 该硫酸径基氯哇聚谷氨酸聚合物的制备方法为：
[0033] (1)按1:4.5的重量比称取硫酸径基氯哇与聚谷氨酸，备用；
[0034] (2)将聚谷氨酸溶于去离子水中，磁力揽拌，形成2mg/ml的聚谷氨酸水溶液；
[0035] (3)将硫酸径基氯哇溶于去离子水中，磁力揽拌，形成2mg/ml的硫酸径基氯哇水溶 液；
[0036] (4)将聚谷氨酸水溶液置于反应容器中，再将反应容器置于72.5°C的热水浴中至 恒溫，然后向反应容器中加入硫酸径基氯哇水溶液，W质量浓度为87.5 %的浓硫酸溶液作 为催化剂，浓硫酸的加入量为所述合液的质量的8.5%，进行反应，先在72.5°C的热水浴中 反应7.5min，然后在调节热水浴溫度至87.5 °C至反应完全；
[0037] (5)反应结束后向反应液中加入去离子水，静置分层，弃去上层清液，将底物洗涂， 干燥，得到硫酸径基氯哇聚谷氨酸聚合物。
[0038] 将该硫酸径基氯哇聚谷氨酸聚合物在用于治疗盘状红斑狼疮及系统性红斑狼疮 疾病中的应用，疗效显著，副作用小。
[0039] 实施例3:
[0040] -种硫酸径基氯哇聚谷氨酸聚合物，是由硫酸径基氯哇与聚谷氨酸按照1:6的重 量比发生醋化反应形成的聚合物。所述硫酸径基氯哇的径基与聚谷氨酸的簇基发生醋化反 应结合形成的。所述聚合物中硫酸径基氯哇的含量在14.28% (重量比）范围内。所述聚谷氨 酸的分子量为50000。所述的聚谷氨酸为丫 -聚谷氨酸。
[0041 ]该硫酸径基氯哇聚谷氨酸聚合物的制备方法为：
[0042] (1)按1:6的重量比称取硫酸径基氯哇与聚谷氨酸，备用；
[0043] (2)将聚谷氨酸溶于去离子水中，磁力揽拌，形成3mg/ml的聚谷氨酸水溶液；
[0044] (3)将硫酸径基氯哇溶于去离子水中，磁力揽拌，形成3mg/ml的硫酸径基氯哇水溶 液；
[0045] (4)将聚谷氨酸水溶液置于反应容器中，再将反应容器置于80°C的热水浴中至恒 溫，然后向反应容器中加入硫酸径基氯哇水溶液，W质量浓度为90%的浓硫酸溶液作为催 化剂，浓硫酸的加入量为所述合液的质量的12 %，进行反应，先在80°C的热水浴中反应 IOmin，然后在调节热水浴溫度至90°C至反应完全；
[0046] (5)反应结束后向反应液中加入去离子水，静置分层，弃去上层清液，将底物洗涂， 干燥，得到硫酸径基氯哇聚谷氨酸聚合物。
[0047] 将该硫酸径基氯哇聚谷氨酸聚合物在用于治疗盘状红斑狼疮及系统性红斑狼疮 疾病中的应用，疗效显著，副作用小。
[004引药物治疗实验：
[0049] 本发明硫酸径基氯哇聚谷氨酸聚合物对系统性红斑狼疮MRL/lpr小鼠的影响。
[0050] 1.实验动物:8周龄健康雌性昆明小鼠20只，8周龄系统性红斑狼疮(SLE)M化/Ipr 雌性小鼠60只，由广东省医学实验动物中屯、提供。
[0化1] 2.实验药物
[0052] (1)本发明实施例1、实施例2制备得到的药物组合物；
[0化3] (2)硫酸径基氯哇。
[0化4] 3.实验方法
[0055] 8周龄健康雌性昆明小鼠20只为空白对照组，将100只的8周龄系统性红斑狼疮 (SLE)M化/Ipr雌性小鼠按体重随机分为5组，每组20只，分别为空白对照组、SLE小鼠模型 组、本发明实施例1组、本发明实施例2组、本发明实施例3组和阳性对照组。
[0056] 所有小鼠适应性饲养一周后，各组大鼠按如下剂量灌胃给予相应的受试物:本发 明实施例1组、本发明实施例2组、本发明实施例3组分别相应灌入各实施例制备的聚合物 3.Og/kg;阳性对照组灌胃3.Og/kg的硫酸径基氯哇，空白对照组与SLE小鼠模型组均W等体 积的蒸馈水灌胃。
[0057] 所有试验组每天给药1次，连续给药20天，于给药结束时取血备用，摘取脾脏。
[005引 4.实验方法和结果
[0059] 4.1本发明药物组合物对SLE小鼠T淋己细胞亚群的影响
[0060] ?85液的制备：称取8.5邑化(：1，0.2化(：1，2.85邑化2册04.12肥0和0.27化肥？04，用 IL双蒸水定容后即得；
[0061 ] 红细胞裂解液的制备：称取化is20.5Mg溶于500-700ml蒸馈水中，再用IMHCl调 抑7.65至1L，配制成tr i S溶液;再将0.83 % NH4C1与tr i S溶液按9:1比例混合后即得；
[0062] 脾细胞单细胞悬液的制备:把各组小鼠的脾脏放入盛有冷PBS液的培养皿中清洗， 在玻璃匀浆器中加入3mlPBS研磨，再用200目不诱钢网过滤，把脾匀浆液离屯、W转速 1500rpm/min离屯、10分钟，弃上清液，并加入红细胞裂解液2.5ml，混匀，静置5分钟后再加入 PBS液2ml终止裂解反应，再W1500巧m/min离屯、10分钟，弃去上清液，用PBS洗S次后加入 PBS，在巧光显微镜下计算细胞数。W上的操作均需在冰上。
[0063] 用W上脾细胞单细胞悬液，计细胞数后，把细胞浓度调整为5X106cells/ml。每一 组取其中一只小鼠脾细胞样本做亚群分析，把已调整浓度的小鼠脾细胞样本加入流式细胞 分析专用管，每只小鼠脾细胞样本制备两管，每管加入样本10化1。
[0064] 在含有样品专用管的第一管加扣1抗小鼠巧光标记单克隆抗体CD3(FITC)和化1抗 小鼠巧光标记单克隆抗体CD4(PE)，第二管加扣1CD3(FITC)和化1抗小鼠巧光标记单克隆抗 体CD8 (PE)。室溫闭光解育30min，各管加入50化1銷液，振荡混匀。进行上机分析。实验结果 见表1。
[0065] 表1本发明对SLE小鼠T淋己细胞亚群的影响 rOOAAi
1234 由表1可知，与空白对照组对比，SLE小鼠模型组CD3+CD4+淋己细胞水平显著下降， SLE小鼠模型组CD3+CD8+淋己细胞水平显著上升。与SLE模型组对比，本发明聚合物和阳性 对照组都能使化E小鼠CD3+CD4巧淋己细胞显著上升，使CD3+CD8巧淋己细胞显著下降，其中 实施例3组聚合物的效果较好。而CD3+CD4+淋己细胞是辅助性T细胞(Th)，CD3+CD8+淋己细 胞主要起抑制性调节作用，故表明，本发明的聚合物能够纠正化E小鼠T细胞亚群的失衡状 态。 2 4.2本发明聚合物对血清IL-10、抗ds-DNA抗体含量的影响 3 按试剂盒操作说明操作方法，采用IL-10、抗ds-DNA抗体试剂盒（上海柯丰生物试 剂有限公司），测定各组小鼠血清IL-10、抗ds-DNA抗体的含量，实验结果见表2。 4 表2本发明对SLE小鼠血清IL-IO、抗ds-DNA抗体含量的影响
L0072J 注：与空日对脫組比较，*p<0.05，林P<0 . Ol;与化E模型組比较，#P<0.05，##P< 0.01;与阳性对照组比较，AP<0.05。
[0073] 由表2可知，与空白对照组相比，SLE模型小鼠的IL-IO和抗ds-DNA抗体水平明显升 高；与SLE模型组相比，本发明聚合物治疗的化E小鼠血清比-10和抗ds-DNA抗体水平含量显 著降低，其中实施例2组和实施例3组效果极为显著且优于阳性对照组，实施例3组尤为显 著。运表明，本发明的聚合物对于SLE小鼠治疗效果显著。
[0074] W上述依据本发明的理想实施例为启示，通过上述的说明内容，相关工作人员完 全可W在不偏离本项发明技术思想的范围内，进行多样的变更W及修改。本项发明的技术 性范围并不局限于说明书上的内容，必须要根据权利要求范围来确定其技术性范围。
【主权项】
1. 一种硫酸羟基氯喹聚谷氨酸聚合物，其特征在于，是由硫酸羟基氯喹与聚谷氨酸按 照1:(1-6)的重量比发生酯化反应形成的聚合物。2. 如权利要求1所述的一种硫酸羟基氯喹聚谷氨酸聚合物，其特征在于，所述硫酸羟基 氯喹的羟基与聚谷氨酸的羧基发生酯化反应结合形成的。3. 如权利要求1所述的一种硫酸羟基氯喹聚谷氨酸聚合物，其特征在于，所述聚合物中 硫酸羟基氯喹的含量在14.28-50 % (重量比）范围内。4. 如权利要求1所述的一种硫酸羟基氯喹聚谷氨酸聚合物，其特征在于，所述聚谷氨酸 的分子量为30000-50000。5. 如权利要求1所述的一种硫酸羟基氯喹聚谷氨酸聚合物，其特征在于，所述的聚谷氨 酸为γ-聚谷氨酸。6. 如权利要求1-5任意一项所述的一种硫酸羟基氯喹聚谷氨酸聚合物，其特征在于，制 备方法为： (1) 按1: (1-6)的重量比称取硫酸羟基氯喹与聚谷氨酸，备用； (2) 将聚谷氨酸溶于去离子水中，磁力搅拌，形成l-3mg/ml的聚谷氨酸水溶液； (3) 将硫酸羟基氯喹溶于去离子水中，磁力搅拌，形成I-3mg/ml的硫酸羟基氯喹水溶 液； (4) 将聚谷氨酸水溶液置于反应容器中，再将反应容器置于65-80°C的热水浴中至恒 温，然后向反应容器中加入硫酸羟基氯喹水溶液，以浓硫酸溶液作为催化剂，进行反应，先 在65-80°C的热水浴中反应5-10min，然后在调节热水浴温度至85-90°C至反应完全； (5) 反应结束后向反应液中加入去离子水，静置分层，弃去上层清液，将底物洗涤，干 燥，得到硫酸羟基氯喹聚谷氨酸聚合物。7. 根据权利要求1-6任意一项所述的一种硫酸羟基氯喹聚谷氨酸聚合物在用于治疗盘 状红斑狼疮及系统性红斑狼疮疾病中的应用。
【文档编号】A61P17/02GK105924641SQ201610393690
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年6月6日
【发明人】陈卫锋, 孟永宏, 徐升运, 秦涛
【申请人】陕西省科学院酶工程研究院