3-氨基-2-羟基-4-苯基-缬氨酰-异亮氨酸衍生物及其应用
【专利摘要】本发明公开了一种新的化合物，具有以下结构通式：其中，R选自：H、直链或支链C1-C4烷基、直链或支链的C1-C4羟烷基、直链或支链的C1-C4巯基烷基、直链或支链的C1-C4烷基羧基、以及C1-C4烷基酰胺基。本发明的化合物对于氨肽酶N具有较好的抑制活性，可用于制备氨肽酶N抑制剂。
【专利说明】
3-氨基-2-羟基-4-苯基-缬氨酿-异亮氨酸衍生物及其 应用
技术领域
[0001] 本发明属于化学合成技术领域，具体涉及3-氨基-2-羟基-4-苯基-缬氨酰-异 亮氨酸衍生物及其应用。
【背景技术】
[0002] 上海来益生物药物研究开发中心有限责任公司的ZL 201110076554. 6号中国发 明专利公开了从CGMCC No. 4027的代谢产物中分离得到了以下结构式（1)的化合物，命名 为：3_ 氨基-2-羟基-4-苯基-缴氨酰-异亮氨酸（3-amin〇-2-hydroxy-4_phenylbutano yl-valyl-isoleucine)：
[0003]
[0004] ZL 201110076555. 0号中国发明专利中，进一步公开了该化合物具有氨肽酶N抑 制活性，可用于制备氨肽酶N抑制剂。
【发明内容】
[0005] 本申请的发明人在进一步的研发中，在3-氨基-2-羟基-4-苯基-结|氨酰-异亮 氨酸，即结构式（1)的母体化合物，的基础上，合成了一系列衍生化合物，经过对这些衍生 物的氨肽酶N抑制活性进行研究后发现，这些衍生物的氨肽酶N抑制活性相比结构式（1) 的母体化合物均有了实质性的提高。
[0006] 因此，本发明的第一个目的，在于提供一种结构式（1)的化合物的衍生物，所述衍 生物具有以下结构通式：
[0007]
[0008] 其中，R选自：H、直链或支链C1-C4烷基、直链或支链的C1-C4羟烷基、直链或支链 的C1-C4巯基烷基、直链或支链的C1-C4烷基羧基、以及C1-C4烷基酰胺基。
[0009] 本发明的另一个目的，在于提供上述通式化合物的应用，用于制备氨肽酶N抑制 剂。
[0010] 本发明的上述结构式（1)的衍生物，对于氨肽酶N的抑制活性相比结构式（1)的 化合物均有显著的提升，IC 5。普遍提高了一个数量级以上，对于开发氨肽酶N抑制剂具有非 常重要的意义。
【具体实施方式】
[0011] 以下结合具体实施例，对本发明的3-氨基-2-羟基-4-苯基-缬氨酰-异亮氨酸 衍生物的合成以及氨肽酶N抑制活性作进一步详细说明。应理解，以下实施例仅用于说明 本发明而非用于限定本发明的范围。
[0012] 一、合成实施例
[0013] 以结构式⑴为母体化合物，合成一系列的衍生物，具体如下：
[0014] 实施例1
[0015] 反应式如下：
[0017] 合成步骤如下：
[0018] l、100ml三口烧瓶中，投入4.07g(0.01mol)化合物（l)，22ml四氢呋喃，冰水浴下 滴加22ml的氢氧化钠溶液（lmol/1)，搅拌20min，滴加0.0 llmol苄氧羰基氯，自然升温反 应，TLC跟踪，反应完毕后，倒入冰水中，乙酸乙酯提取，有机层用饱和盐水洗涤，干燥，抽滤， 滤液浓缩，得到化合物（2) 4g，摩尔收率为73. 9%。
[0019] 2、100ml三口烧瓶中，N2置换保护下，投入化合物（2) 4g和2. 9g L-异亮氨酸苄酯 对甲苯磺酸盐，2. 4gTBTU，60ml二氯甲烷，冰水浴下降温至0°C，缓缓滴入3. 4ml二异丙基乙 胺，滴加完毕后自然升温反应，TLC跟踪，反应完毕后倒入冰水中，分层，有机层用饱和盐水 洗涤，干燥，抽滤，滤液浓缩得到化合物（3) 4. 8g，摩尔收率为87 %。
[0020] 3、100ml单口烧瓶中，投入4. 8g化合物（3)，50ml甲醇，0.24g钯碳，氢气球置换三 次，在氢气保护条件下常温搅拌反应，TLC跟踪，反应完毕后，抽滤滤掉钯碳，甲醇洗涤两次， 滤液浓缩，二氯甲烷打浆得到2. 6g化合物（4)，摩尔收率为77. 5%。4 NMR(500MHz，DMS0) δ :〇· 8 (m，18H)，1. 4 (m，2H)，1. 7 (m，2H)，2. 0 (m，2H)，2. 5 (m，3H)，2. 8 (m，1H)，3. 2 (m，1H)， 3. 8 (s，1H)，4. 0 (m，1H)，4. 3 (m，2H)，7. 3 (m，5H)，7. 8 (s，2H)，8. 0 (m，1H) ;ESI-MS m/z : 521[M+H+] 〇
[0021] 实施例2
[0022] 反应式如下：
[0024] 合成步骤如下：
[0025] l、100ml三口烧瓶中，投入4. 07g(0.0 lmol)化合物（l)，22ml四氢呋喃，冰水浴下 滴加22ml的氢氧化钠溶液（lmol/1)，搅拌20min，滴加0.0 llmol苄氧羰基氯，自然升温反 应，TLC跟踪，反应完毕后，倒入冰水中，乙酸乙酯提取，有机层用饱和盐水洗涤，干燥，抽滤， 滤液浓缩，得到化合物（2) 4g，摩尔收率为73. 9%。
[0026] 2、100ml三口烧瓶中，N2置换保护下，投入化合物（2) 4g和2. 9g L-亮氨酸苄酯对 甲苯磺酸盐，2. 4gTBTU，60ml二氯甲烷，冰水浴下降温至0°C，缓缓滴入3. 4ml二异丙基乙 胺，滴加完毕后自然升温反应，TLC跟踪，反应完毕后倒入冰水中，分层，有机层用饱和盐水 洗涤，干燥，抽滤，滤液浓缩得到化合物（5) 5g，摩尔收率为90 %。
[0027] 3、100ml单口烧瓶中，投入5g化合物（5)，50ml甲醇，0.25g钯碳，氢气球置换三 次，在氢气保护条件下常温搅拌反应，TLC跟踪，反应完毕后，抽滤滤掉钯碳，甲醇洗涤两次， 滤液浓缩，二氯甲烷打浆得到2. 7g化合物（6)，摩尔收率为77 %。4 NMR (500MHz，DMS0) δ :〇· 8 (m，18H)，1. 5 (m，2H)，1. 7 (m，2H)，2. 0 (m，2H)，2. 5 (m，3H)，2. 8 (m，1H)，3. 2 (m，1H)， 4. 0 (m，1H)，4. 1 (m，1H)，4. 2 (m，2H)，7. 3 (m，5H)，7. 8 (s，2H)，8. 0 (m，1H) ;ESI-MS m/z : 521[M+H+] 〇
[0028] 实施例3
[0029] 反应式如下：
[0031] 合成步骤如下：
[0032] l、100ml三口烧瓶中，投入4. 07g(0.0 lmol)化合物（l)，22ml四氢呋喃，冰水浴下 滴加22ml的氢氧化钠溶液（lmol/1)，搅拌20min，滴加0.0 llmol苄氧羰基氯，自然升温反 应，TLC跟踪，反应完毕后，倒入冰水中，乙酸乙酯提取，有机层用饱和盐水洗涤，干燥，抽滤， 滤液浓缩，得到化合物（2) 4g，摩尔收率为73. 9%。
[0033] 2、100ml三口烧瓶中，N2置换保护下，投入化合物（2)4g和2. 8g L-缬氨酸苄酯对 甲苯磺酸盐，2. 4gTBTU，60ml二氯甲烷，冰水浴下降温至0°C，缓缓滴入3. 4ml二异丙基乙 胺，滴加完毕后自然升温反应，TLC跟踪，反应完毕后倒入冰水中，分层，有机层用饱和盐水 洗涤，干燥，抽滤，滤液浓缩得到化合物（7) 4. 8g，摩尔收率为89 %。
[0034] 3、100ml单口烧瓶中，投入4. 8g化合物（7)，50ml甲醇，0.25g钯碳，氢气球置换三 次，在氢气保护条件下常温搅拌反应，TLC跟踪，反应完毕后，抽滤滤掉钯碳，甲醇洗涤两次， 滤液浓缩，二氯甲烷打浆得到2. 6g化合物（8)，摩尔收率为78 %。4 NMR (500MHz，DMS0) δ :〇· 8 (m，18H)，1. 4 (m，1H)，1. 7 (m，1H)，2. 0 (m，2H)，2. 5 (m，3H)，2. 8 (m，1H)，3. 2 (m，1H)， 3. 9 (s，1H)，4. 0 (m，1H)，4. 3 (m，2H)，7. 3 (m，5H)，7. 8 (s，2H)，8. 1 (m，1H) ;ESI-MS m/z : 507. 3 [M+H+] 〇
[0035] 参照以上方法合成了一系列衍生物，具体如表1所示。
[0036] 对于本领域的技术人员来说，参照以上实施例1-3的方法很容易获得表1中所列 结构式（9)~（24)的化合物，因此这里不再逐一描述。另外，虽然以上实施例在第二步反 应中均使用了 L-型氨基酸基团，但D-型氨基酸基团同样适用，这对于本领域的技术人员来 说是显而易见的，因此同样属于本发明涵盖的范围。
[0037] 二、氨肽酶N抑制活性实施例
[0038] 实施例4
[0039] 本实施例以上述合成的结构式（4)、（6)、（8)~（24)的化合物（表1所列）为例， 验证这些化合物对氨肽酶N的抑制活性，同时以母体化合物（结构式（1)的化合物）为对 照，具体如下：
[0040] 测定方法（参照ZL201110076555. 0号中国发明专利）
[0041] 在96孔板中加入底物（L-亮氨酰对硝基苯胺）100 μ 1 (lmg/ml，溶于0. 1M 1^8-!1(：1，？!17.0)，不同浓度梯度的待测化合物2(^1(0.邡1^8-!1(：1，？!17.0)，37°(：， 3min 反应，再加入氨肽酶 N(L5006-25UN，Sigma)溶液 20yl(2mU，0· 1M Tris-HCl，pH 7.0)， 37°C，反应30min，后于405nm波长处测定吸收值。
[0042] 按照如下公式计算抑制率：
[0043] 抑制率=(A_B)/A*100%
[0044] 其中A为不含抑制剂的反应体系测得的吸收度，B为含有不同浓度待测化合物的 反应体系测得的吸收度，用0. 1M Tris-HCl，pH 7.0的缓冲液调零。在所得数据系列中找出 抑制率在50%左右所对应的各化合物浓度，即为其半数抑制浓度IC5。。
[0045] 按上述方法试验获得的一系列衍生物的氨肽酶N抑制活性结果如表2所示：
[0046] 表2、氨肽酶N抑制活性
[0047]
[0049] *平均值，取自3组重复实验结果
[0050] 由以上表1的结果可见，本发明合成的结构式（1)的一系列衍生物，其氨肽酶N抑 制活性相比母体化合物（结构式（1))都有了显著的提升，IC 5。普遍提高了一个数量级以上， 对于开发新的氨肽酶N抑制剂具有非常重要的意义。
[0051]
【主权项】
1. 一种新化合物，其特征在于，所述化合物具有W下结构通式：其中，R选自：H、直链或支链C1-C4烷基、直链或支链的Cl-C4^烷基、直链或支链的 C1-C4琉基烷基、直链或支链的C1-C4烷基簇基、W及C1-C4烷基酷胺基。2. 如权利要求1所述的化合物的应用，其特征在于，用于制备氨肤酶N抑制剂。
【文档编号】C12N9/48GK105985405SQ201510076300
【公开日】2016年10月5日
【申请日】2015年2月13日
【发明人】戈梅, 王涛, 铙敏, 罗敏玉, 夏兴
【申请人】上海来益生物药物研究开发中心有限责任公司