一种鱼肝油提取物及其制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种鱼肝油提取物及其制备方法，包括萃取、盐析、酸洗、蒸馏、丙酮精制、分子蒸馏、柱层析、冷冻分离等步骤，去除鱼肝油提取物中的蛋白质、脂肪酸(游离脂肪酸、固体脂肪酸)、矿物质、不皂化物、磷脂、多肽、低沸点溶剂、胆固醇、多氯联苯、碳化物、大极性物质等杂质，脱色并提高不饱和脂肪酸的含量，从而制得高质量的鱼肝油提取物。本发明的鱼肝油提取物中的成分及其配比合理，成分之间具有协同增效作用，显著增加了鱼肝油制剂的有效性和安全性。
【专利说明】
一种鱼肝油提取物及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明属于药物制备技术领域，具体涉及一种鱼肝油提取物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 鱼肝油（COD LIVER OIL)为人类生长发育所必须的维生素（VA、VD)的主要来源， 主要用于防治维生素 A(VA)和维生素 D(VD)缺乏引起的皮肤干燥、毛囊角化、干眼病、夜盲 症、佝偻病等病症，对人类健康和生长发育有着十分重要的作用。
[0003] 鱼肝油的发展可追溯到20世纪六十年代，当时全国各地儿童佝偻病发病比例很 高，特别是北方地区的发病率尤其高，表现为囟门迟迟不闭合、方颅、鸡胸、罗圈腿等症状， 这些症状与钙吸收不足、骨头软有关，而VD为促进钙吸收必不可少的有效成分。佝偻病患 者服用含VA和VD的鱼肝油制剂后，并晒太阳，起到很好地预防和治疗效果。
[0004] 鱼肝油为自海产鱼肝脏中制得的鱼肝油提取物，将制得的鱼肝油粗品经o°c冷冻， 脱去部分固体脂肪后，用精炼食用植物油获取浓度较高的鱼肝油，其主要成分为VA和VD， 还含有其他维生素、ω-3脂肪酸（如DHA、EPA)、烷氧基甘油醚、角鲨烯等活性成分。
[0005]目前，按《中国药典》相关规定，市售药用鱼肝油或维生素 AD滴剂为高浓度鱼肝油 或维生素 A与维生素 D2或D3,加精炼食用植物油（在0°C左右脱去固体脂肪）或鱼肝油溶 解和调整浓度，并加适量稳定剂制成，以及植物油配制的维生素 AD制剂与传统鱼油配制的 维生素 AD制剂（也称鱼油型鱼肝油）。
[0006] 植物油基质型滴剂是鱼肝油的替代品，又称人工合成的鱼肝油或人工鱼肝油，其 优点在于：植物油与合成维生素 AD的原料资源丰富、来源稳定、加工简便，但存在营养性不 足、成分之间无协同增效作用等缺陷，几乎不具备促进智力发育、协同增强免疫力、协同改 善视网膜、增进健康等作用。
[0007] 传统的鱼油提取方法包括蒸煮法、蒸煮法、酶解法、超临界萃取、溶剂萃取等，并结 合超声波、微波、直流电、脉冲等辅助技术提尚提取效率。
[0008] 1、蒸煮法（鱼油提取方法研究进展，《水产科技》，2009年第三期：6-10):匀浆、混 匀，加入适量水，在40-60°C加热一段时间，热离心或过滤，得粗鱼油，用热水洗涤，离心，干 燥。
[0009] 2、淡碱水解法：匀浆，加入适量水，加入适量碱液，加热，加入适量盐，离心，制得粗 鱼油。
[0010] 3、酶解法：搅碎，一定温度下加热，加入蛋白酶或利用自身酶，酶解，离心，得到粗 鱼油。
[0011] 4、超临界萃取：鱼肝脏破碎物用乙酸乙酯浸提，粗提液脱水处理，浓缩后精制，得 到鱼油。
[0012] 5、溶剂萃取法（动物油脂提取及加工技术研究进展，《油脂加工》，2010年第35卷 第12期，8-11页；河豚鱼肝脏中鱼油的提取及EPA和DHA的检测，《辽宁中医杂志》，2009年 第36卷第3期，438-440页）：利用石油醚、乙醚等提取鱼油，并没有加入分子蒸馏和柱层析 技术。
[0013] 传统鱼油型鱼肝油制剂在有效成分或营养成分和其应用上存在成份组合不合理 等问题，并存在安全性、有效性等隐患，如婴幼儿人群过量使用EPA，会引起体内器官出血的 可能性。
[0014] 如何正确搭配鱼肝油中活性成分，以满足不同群体尤其是儿童人群的健康需求极 为重要。随着世界性资源不断衰退，海产鱼肝油原料变得越来越宝贵，如何有效利用鱼肝油 有效成分，成为迫切需要解决的技术问题。
【发明内容】
[0015] 本发明的目的在于提供一种鱼肝油提取物的制备方法，包括下述步骤：
[0016] 1)萃取：将鱼肝制成鱼肝衆，再在鱼肝浆中加入与水不互溶的有机溶剂，搅拌，萃 取，静置，分离，取有机溶剂层，其中，鱼肝：有机溶剂的质量体积比为1-2 : 2-4,所述的有 机溶剂选自乙酸乙酯、石油醚、正己烷、乙醚的任一种或其组合；
[0017] 2)盐析：在有机溶剂萃取层中加入酸碱调节剂，调节pH8-9,搅拌，静置，过滤，取 上清液，制得鱼肝浆盐析上清液；
[0018] 3)酸洗：将鱼肝浆盐析上清液用酸性物质的水溶液洗涤后，在其上清液中加入 酸碱调节剂，调节pH为6-9,制得鱼肝浆酸洗上清液；
[0019] 4)蒸馏：浓缩鱼肝浆酸洗上清液，制得鱼肝油蒸馏浓缩物；
[0020] 5)丙酮精制：在鱼肝油蒸馏浓缩物中加入丙酮，混合均匀后，冷却放置，过滤，滤 液浓缩，制得鱼肝油丙酮精制浓缩物；
[0021] 6)分子蒸馏：将鱼肝油提取浓缩物进行多级分子蒸馏，制得鱼肝油分子蒸馏浓缩 物；
[0022] 7)柱层析：将鱼肝油分子蒸馏浓缩物溶于流动相，用层析柱进行分离洗脱，收集 合并柱层析洗脱液，浓缩，制得鱼肝油柱层析浓缩物，其中，所述的流动相选自乙酸乙酯、丙 酮、异丙醇、乙醇、正己烷、乙醚的任一种或其组合，所述的层析柱填料选自氧化铝、硅胶、大 孔树脂、离子交换树脂的任一种或其组合，所述的洗脱液选自乙酸乙酯、丙酮、异丙醇、乙 醇、正己烷、乙醚的任一种或其组合；
[0023] 8)冷冻分离：将鱼肝油柱层析浓缩物在< 10°C条件下进行冷冻，放置，分离，收集 分离液体，即得。
[0024] 本发明的优选技术方案中，步骤1)中鱼肝：有机溶剂的质量体积比为1 : 1-2。
[0025] 本发明的优选技术方案中，步骤1)中所述的有机溶剂选自乙酸乙酯、丙酮的任一 种或其组合。
[0026] 本发明的优选技术方案中，步骤1)中所述的萃取次数不少于1次，优选为不少于 2次，更优选为不少于3次。
[0027] 本发明的优选技术方案中，步骤2)或步骤3)中所述的酸碱调节剂选自碳酸钠、硫 酸钠、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钾、硫酸钾、醋酸钠、醋酸钾、磷酸钠、磷酸钾的任一种或其 组合。
[0028] 本发明的优选技术方案中，步骤3)中所述的酸性物质选自盐酸、硫酸、硝酸、醋 酸、磷酸、柠檬酸的任一种或其组合。
[0029] 本发明的优选技术方案中，所述酸性水溶液的浓度< 0.1 N(当量）。
[0030] 本发明的优选技术方案中，步骤3)中酸性物质水溶液的洗涤次数不少于2次，优 选为不少于3次。
[0031] 本发明的优选技术方案中，步骤4)中的浓缩温度为30-100°C，优选为40-85Γ，更 优选为50-65 °C。
[0032] 本发明的优选技术方案中，步骤4)中所述的浓缩级数不少于2级，优选为不少于 3级。
[0033] 本发明的优选技术方案中，步骤4)中所述的浓缩温度不低于40°C，优选为不低于 50°C，更优选为不低于60°C。
[0034] 本发明的优选技术方案中，步骤5)中所述的多级分子蒸馏的蒸馏级数不少于2 级，优选为不少于3级。
[0035] 本发明的优选技术方案，步骤5)中第一级分子蒸馏温度为80°C -170°C。
[0036] 本发明的优选技术方案，步骤5)中第二级分子蒸馏温度为90°C _195°C。
[0037] 本发明的优选技术方案，步骤5)中第三级分子蒸馏温度为100°C _205°C。
[0038] 本发明的优选技术方案中，步骤8)中所述的冷冻温度< 5°C，优选为< 0°C。
[0039] 本发明的另一目的在于提供一种鱼肝油提取物，所述鱼肝油提取物的制备方法包 括下述步骤：
[0040] 1)萃取：将鱼肝制成鱼肝衆，再在鱼肝浆中加入与水不互溶的有机溶剂，搅拌，萃 取，静置，分离，取有机溶剂层，其中，鱼肝：有机溶剂的质量体积比为1-2 : 2-4,所述的有 机溶剂选自乙酸乙酯、石油醚、正己烷、乙醚的任一种或其组合；
[0041] 2)盐析：在有机溶剂萃取层中加入酸碱调节剂，调节pH8-9,搅拌，静置，过滤，取 上清液，制得鱼肝浆盐析上清液；
[0042] 3)酸洗：将鱼肝浆盐析上清液用酸性物质的水溶液洗涤后，在其上清液中加入酸 碱调节剂，调节pH为6-9,制得鱼肝浆酸洗上清液；
[0043] 4)蒸馏：浓缩鱼肝浆酸洗上清液，制得鱼肝油蒸馏浓缩物；
[0044] 5)丙酮精制：在鱼肝油蒸馏浓缩物中加入丙酮，混合均匀后，冷却放置，过滤，滤 液浓缩，制得鱼肝油丙酮精制浓缩物；
[0045] 6)分子蒸馏：将鱼肝油提取浓缩物进行多级分子蒸馏，制得鱼肝油分子蒸馏浓缩 物；
[0046] 7)柱层析：将鱼肝油分子蒸馏浓缩物溶于流动相，用层析柱进行分离洗脱，收集 合并柱层析洗脱液，浓缩，制得鱼肝油柱层析浓缩物，其中，所述的流动相选自乙酸乙酯、丙 酮、异丙醇、乙醇、正己烷、乙醚的任一种或其组合，所述的层析柱填料选自氧化铝、硅胶、大 孔树脂、离子交换树脂的任一种或其组合，所述的洗脱液选自乙酸乙酯、丙酮、异丙醇、乙 醇、正己烷、乙醚的任一种或其组合；
[0047] 8)冷冻分离：将鱼肝油柱层析浓缩物在< 10°C条件下进行冷冻，放置，分离，收集 分离液体，即得。
[0048] 本发明的优选技术方案中，步骤1)中鱼肝：有机溶剂的质量体积比为1 : 1-2。
[0049] 本发明的优选技术方案中，步骤1)中所述的有机溶剂选自乙酸乙酯、丙酮的任一 种或其组合。
[0050] 本发明的优选技术方案中，步骤1)中所述的萃取次数不少于1次，优选为不少于 2次，更优选为不少于3次。
[0051] 本发明的优选技术方案中，步骤2)或步骤3)中所述的酸碱调节剂选自碳酸钠、硫 酸钠、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钾、硫酸钾、醋酸钠、醋酸钾、磷酸钠、磷酸钾的任一种或其 组合。
[0052] 本发明的优选技术方案中，步骤3)中所述的酸性物质选自盐酸、硫酸、硝酸、醋 酸、磷酸、柠檬酸的任一种或其组合。
[0053] 本发明的优选技术方案中，所述酸性水溶液的浓度< 0. 1N(当量）。
[0054] 本发明的优选技术方案中，步骤3)中酸性物质水溶液的洗涤次数不少于2次，优 选为不少于3次。
[0055] 本发明的优选技术方案中，步骤4)中的浓缩温度为30_100°C，优选为40-85Γ，更 优选为50-65 °C。
[0056] 本发明的优选技术方案中，步骤4)中所述的浓缩级数不少于2级，优选为不少于 3级。
[0057] 本发明的优选技术方案中，步骤4)中所述的浓缩温度不低于40°C，优选为不低于 50°C，更优选为不低于60°C。
[0058] 本发明的优选技术方案中，步骤5)中所述的多级分子蒸馏的蒸馏级数不少于2 级，优选为不少于3级。
[0059] 本发明的优选技术方案，步骤5)中第一级分子蒸馏温度为80°C -170°C。
[0060] 本发明的优选技术方案，步骤5)中第二级分子蒸馏温度为90°C _195°C。
[0061] 本发明的优选技术方案，步骤5)中第三级分子蒸馏温度为100°C _205°C。
[0062] 本发明的优选技术方案中，步骤8)中所述的冷冻温度< 5°C，优选为< 0°C。
[0063] 本发明的另一目的在于提供鱼肝油提取物用于制备补充维生素 A和D的营养剂或 药品中的应用。
[0064] 为了清楚地表述本发明的保护范围，本发明对下述术语加以界定：
[0065] 本发明所述的分子蒸馏是指一种在高真空下操作的蒸馏方法，蒸气分子的平均自 由程大于蒸发表面与冷凝表面之间的距离，利用料液中各组分蒸发速率的差异来分离液体 混合物。
[0066] 本发明所述的ω 3不饱和脂肪酸是指多不饱和脂肪酸中第一个不饱和键出现在 碳链甲基端的第三位。
[0067] 除非另有说明，本发明涉及液体与液体之间的百分比时，所述的百分比为体积/ 体积百分比；本发明涉及液体与固体之间的百分比时，所述百分比为体积/重量百分比；本 发明涉及固体与液体之间的百分比时，所述百分比为重量/体积百分比；其余为重量/重量 百分比。
[0068] 与现有技术相比，本发明具有下述有益技术效果：
[0069] 1、本发明通过萃取、盐析、酸洗、蒸馏、丙酮精制、分子蒸馏、柱层析、冷冻分离等步 骤，去除鱼油提取物中的蛋白质、脂肪酸（游离脂肪酸、固体脂肪酸）、矿物质、不皂化物、磷 月旨、多肽、低沸点溶剂、胆固醇、多氯联苯、碳化物、大极性物质等杂质，脱色并提高不饱和脂 肪酸的含量，从而制得高质量的鱼肝油提取物。本发明的鱼肝油提取物中的成分及其配比 合理，成分之间具有协同增效作用。
[0070] 2、与传统的鱼肝油制剂相比，本发明的鱼肝油提取物具有促进儿童的智力发育、 增强免疫力、利于胎儿、婴儿健康成长和脑细胞发育，促进视觉发育等功效，显著增加了鱼 肝油制剂的有效性和安全性。
【附图说明】
[0071] 图1金枪鱼肝油的指纹图谱。
【具体实施方式】
[0072] 以下将结合实施例具体说明本发明，本发明的实施例仅用于说明本发明的技术方 案，并非限定本发明的实质。
[0073] 实施例1金枪鱼鱼肝油提取物的制备
[0074] 1)萃取：称取200kg绞碎的金枪鱼鱼肝，加入400kg乙酸乙酯，搅拌，萃取80分钟， 取乙酸乙酯层；再次用240kg乙酸乙酯萃取80分钟，取乙酸乙酯层；合并，制得乙酸乙酯萃 取相625L ;
[0075] 2)盐析：在乙酸乙酯萃取相中加入125L饱和Na2C03，调PH到8,搅拌5分钟，静置 0. 5h ；
[0076] 3)酸洗：用0· 1NHCL洗涤三次后，按照1kg Na2S04/50L乙酸乙酯加入Na2S04,过夜；
[0077] 4)蒸馏：40-50°C条件下，蒸馏浓缩10h，得40L鱼油；在85°C条件下，旋转蒸发蒸 馏12h，制得5. 3L鱼油粗品；
[0078] 5)丙酮精制：在鱼油粗品中加入10L丙酮，混合均勾，在0_5°C条件下，静置2. 5h 后，过滤，滤液蒸馏浓缩，得4. 7L鱼油；
[0079] 6)分子蒸馏：将步骤5)制得的鱼油进行二级分子蒸馏，其中，一级分子蒸馏，低温 为80°C，高温为170°C，蒸馏8h ;二级分子蒸馏，低温为80°C，高温为195°C，蒸馏9h，得到 4. 3L鱼油；
[0080] 7)柱层析：将步骤6)制得的鱼油溶于4. 3L乙酸乙酯后，进行玻璃层析柱处理后， 取乙酸乙酯层析物，蒸馏浓缩，制得鱼肝油4L。
[0081] 8)冷冻分离：将步骤7)制得的鱼油放置于5°C下冷冻5小时，在5°C下，用板框压 滤机压滤，制得鱼肝油3. 9L。
[0082] 实施例2鲨鱼肝油提取物的制备
[0083] 1)萃取：称取100kg绞碎的鲨鱼肝，加入250kg乙酸乙酯，搅拌，萃取60分钟，取 乙酸乙酯层；加入140kg乙酸乙酯，搅拌，萃取60分钟，取乙酸乙酯层，合并，制得乙酸乙酯 提取物320L ;
[0084] 2)盐析：在乙酸乙酯提取物中加入70L饱和Na2C03，调PH到9,搅拌10分钟，静置 lh ；
[0085] 3)酸洗：用0. 2NHCL洗涤三次后，按照1. 5kg Na2S04/50L乙酸乙酯加入Na2S04,过 夜；
[0086] 4)蒸馏：在40-50°C条件下，蒸馏浓缩10h，得25L鱼油溶液，在85°C条件下，旋转 蒸发蒸馏12h，制得3L鱼油粗品；
[0087] 5)丙酮精制：在3L鱼油粗品中加入8L丙酮，混合均勾，在0_4°C静置3h后，过滤， 滤液旋转蒸发，制得2. 5L鱼油；
[0088] 6)分子蒸馏：将步骤5)制得的鱼油进行二级分子蒸馏，其中，一级分子蒸馏，低温 为80°C，高温为170°C，蒸馏8h ;二级分子蒸馏，低温为80°C，高温为195°C，蒸馏9h，得到 2. 3L鱼油；
[0089] 7)柱层析：将步骤6)制得的鱼油溶于3L乙酸乙酯后，进行玻璃层析柱处理后，取 乙酸乙酯层析物，蒸馏浓缩，制得鱼肝油2L。
[0090] 8)冷冻分离：将步骤7)制得的鱼油放置于10°C下冷冻5小时，在10°C下，用高速 离心机过滤，去除滤渣，制得鱼肝油3. 8L。
[0091] 实施例3鲐鱼鱼肝油提取物的制备
[0092] 1)萃取：称取200kg绞碎的鲐鱼鱼肝，加入400kg乙酸乙酯，搅拌，萃取100分钟， 取乙酸乙酯层；再用250kg乙酸乙酯萃取100分钟，取乙酸乙酯层；合并，制得乙酸乙酯层 650L ；
[0093] 2)盐析：在乙酸乙酯层中加入130L饱和Na2C03，调PH到8,搅拌10分钟，静置 0. 5h ；
[0094] 3)酸洗：用0· 1NHCL洗涤三次后，按照1kg Na2S04/50L乙酸乙酯加入Na2S04,过夜；
[0095] 4)蒸馏：在50-60°C条件下，蒸馏浓缩5h，得38L鱼油；在95°C条件下，旋转蒸发蒸 馏6h，制得6L鱼油粗品；
[0096] 5)丙酮精制：在制得的鱼油粗品中加入12L丙酮，混合均勾，在0_4°C静置lh后， 过滤，滤液旋转蒸发，制得5L鱼油；
[0097] 6)分子蒸馏：将步骤5)制得的鱼油进行二级分子蒸馏，其中，一级分子蒸馏，低温 为80°C，高温为170°C，蒸馏8h ;二级分子蒸馏，低温为80°C，高温为195°C，蒸馏9h，得到 4. 5L鱼油；
[0098] 7)柱层析：将步骤6)制得的鱼油溶于3L乙酸乙酯后，进行玻璃层析柱处理后，取 乙酸乙酯层析物，蒸馏浓缩，制得鱼肝油4. 2L。
[0099] 8)冷冻分离：将步骤7)制得的鱼油放置于0°C下冷冻5小时，在0°C下，过滤，制 得鱼肝油3. 9L。
[0100] 实施例4本发明鱼肝油提取物的质量检测
[0101] 检测方法：
[0102] 色谱柱：Diamonsil C18 柱 5 μπι 250X4. 6mm
[0103] 流动相：乙腈：异丙醇=6 : 4
[0104] 流速：1.0ml/min
[0105] 检测波长：258nm
[0106] 经检测，本发明金枪鱼的鱼肝油提取物（其指纹图谱见图1)中的主要成分为天然 维生素（VA、VD)组成，其中，VA主要由VA-DHA酯（结构如式I所示）、VA-EPA酯（结构如 式II所示）组成，VA-DHA酯：VA-EPA酯的质量比为6 : 4 ;VD主要由VD-DHA酯（结构如 式III所示）、VD-EPA酯（结构如式IV所示）组成，其中VD-DHA酯：VD-EPA酯的质量比为 8-9 : 2-1〇
[0107]
[0108] 实施例5本发明金枪鱼肝油提取物对小鼠免疫功能的影响研究
[0109] 30只ICR小鼠，随机分为三组，每组10只。分别给予自制金枪鱼肝油20ml/kg体 重（高剂量组）、l〇ml/kg体重（低剂量组），对照组给予普通市售金枪鱼肝油（20ml/kg体 重）。每天灌胃一次，连续7天，于第7天记录小鼠血清溶血素含量、脾脏及胸腺重量。
[0110] 表1本发明金枪鱼肝油提取物对小鼠免疫功能的影响
[0111]
[0112] *P < 0· 05, #P < 0· 01，与市售金枪鱼肝油对照组比较。
[0113] 由表1可见，与普通市售金枪鱼肝油相比，本发明的金枪鱼肝油提取物中富含 VA-DHA、VA-EPA、VD-DHA、VD-EPA等生物活性物质，具有增强体质，助长发育，健脑、益智，提 高免疫功能，促进小鼠免疫器官重量增加和血清溶血素增加等作用，具有提高免疫功能作 用。
[0114] 实施例6本发明鲨鱼肝油提取物对小鼠视觉发育的影响研究
[0115] 40只雌性小鼠，在傍晚时以2 : 1比例，20只雄性小鼠同笼交配，次晨查到阴栓者 记为孕0天。
[0116] 将孕鼠随机分为四组，每组10只。分别给予鲨鱼肝油2. 5ml/kg体重（高剂量 组）、0.5ml/kg体重（中剂量组）、0· lml/kg体重（低剂量组）（相当于DHA1000mg/kg体重、 200mg/kg体重、40mg/kg体重），对照组给予市售植物油维生素 AD制剂（2. 5ml/kg体重）。 每天灌胃一次。每组母鼠自孕0天起，饲以合成饲料。孕5天起，每两天按体重相应调整灌 胃量。分娩后，母鼠灌胃量增为孕期的1.5倍。
[0117] 记录仔鼠开眼日龄，视觉发育实验于16日龄进行，抓住仔鼠尾部，头朝下，使之面 部和前腿朝向一个平面的边缘，逐渐缩短距离，如果在触须触及边缘之前用前爪抓住了边 缘，证明视觉发育正常，反之为不正常，记录各组仔鼠视觉发育正常数。
[0118] 表2本发明鲨鱼肝油提取物对仔鼠视觉发育的影响
[0119]
[0120] *P < 0. 05,与植物油维生素 AD制剂对照组比较。
[0121] 与市售植物油维生素 AD制剂对比，本发明的鲨鱼肝油的高、中剂量组仔鼠的开眼 日龄早于低剂量组和对照组，差异有显著性（P < 〇. 05);高、中、低剂量组16日龄视觉发育 正常百分比高于对照组，差异亦有显著性意义（P< 0.05)。说明本发明的鲨鱼肝油提取物 能显著促进仔鼠视觉发育。
【主权项】
1. 一种鱼肝油提取物的制备方法，包括下述步骤： 1) 萃取：将鱼肝制成鱼肝浆，再在鱼肝浆中加入与水不互溶的有机溶剂，搅拌，萃取， 静置，分离，取有机溶剂层，其中，鱼肝：有机溶剂的质量体积比为1-2 : 2-4,所述的有机溶 剂选自乙酸乙酯、石油醚、正己烷、乙醚的任一种或其组合； 2) 盐析：在有机溶剂萃取层中加入酸碱调节剂，调节pH8-9,搅拌，静置，过滤，取上清 液，制得鱼肝浆盐析上清液； 3) 酸洗：将鱼肝浆盐析上清液用酸性物质的水溶液洗涤后，在其上清液中加入酸碱调 节剂，调节pH为6-9,制得鱼肝楽;酸洗上清液； 4) 蒸馏：浓缩鱼肝浆酸洗上清液，制得鱼肝油蒸馏浓缩物； 5) 丙酮精制：在鱼肝油蒸馏浓缩物中加入丙酮，混合均匀后，冷却放置，过滤，滤液浓 缩，制得鱼肝油丙酮精制浓缩物； 6) 分子蒸馏：将鱼肝油提取浓缩物进行多级分子蒸馏，制得鱼肝油分子蒸馏浓缩物； 7) 柱层析：将鱼肝油分子蒸馏浓缩物溶于流动相，用层析柱进行分离洗脱，收集合并 柱层析洗脱液，浓缩，制得鱼肝油柱层析浓缩物，其中，所述的流动相选自乙酸乙酯、丙酮、 异丙醇、乙醇、正己烷、乙醚的任一种或其组合，所述的层析柱填料选自氧化铝、硅胶、大孔 树脂、离子交换树脂的任一种或其组合，所述的洗脱液选自乙酸乙酯、丙酮、异丙醇、乙醇、 正己烷、乙醚的任一种或其组合； 8) 冷冻分离：将鱼肝油柱层析浓缩物在< 10°C条件下进行冷冻，放置，分离，收集分离 液体，即得。2. 根据权利要求1所述的制备方法，步骤1)中鱼肝：有机溶剂的质量体积比为 1 ： 1-2〇3. 根据权利要求1或2所述的制备方法，步骤1)中所述的有机溶剂选自乙酸乙酯、丙 酮的任一种或其组合。4. 根据权利要求1-3任一项所述的制备方法，步骤1)中所述的萃取次数不少于1次， 优选为不少于2次，更优选为不少于3次。5. 根据权利要求1-4任一项所述的制备方法，步骤2)或步骤3)中所述的酸碱调节剂 选自碳酸钠、硫酸钠、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钾、硫酸钾、醋酸钠、醋酸钾、磷酸钠、磷酸钾 的任一种或其组合。6. 根据权利要求1-5任一项所述的制备方法，步骤3)中所述的酸性物质选自盐酸、硫 酸、硝酸、醋酸、磷酸、柠檬酸的任一种或其组合。7. 根据权利要求1-6任一项所述的制备方法，所述酸性水溶液的浓度< 0. 1N。8. 根据权利要求1-7任一项所述的制备方法，步骤3)中酸性物质水溶液的洗涤次数不 少于2次，优选为不少于3次。9. 根据权利要求1-8任一项所述的制备方法，步骤4)中的浓缩温度为30-100°C，优选 为 40-85°C，更优选为 50-65°C。10. 根据权利要求1-9任一项所述的制备方法，步骤4)中所述的浓缩温度不低于 40°C，优选为不低于50°C，更优选不低于60°C。11. 根据权利要求1-10任一项所述的制备方法，步骤5)中所述的多级分子蒸馏的蒸馏 级数不少于2级，优选为不少于3级。12. 根据权利要求1-11任一项所述的制备方法，步骤5)中第一级分子蒸馏温度为 80°C -170°C，优选第二级分子蒸馏温度为90°C -195Γ，更优选第三级分子蒸馏温度为 10(TC -205°C〇13. 根据权利要求1-12任一项所述的制备方法，步骤8)中所述的冷冻温度< 5°C，优 选为彡0°C。14. 一种鱼肝油提取物，由权利要求1-13任一项所述的方法制备得到。15. 由权利要求1-13任一项所述的方法制备鱼肝油提取物用于制备补充维生素 A和D 的营养剂或药品中的应用。
【文档编号】A61P3/02GK105985859SQ201510059109
【公开日】2016年10月5日
【申请日】2015年1月30日
【发明人】郑海辉, 陈文波, 金晴昊, 迟玉峰, 乐盛, 董芮娟
【申请人】海力生集团有限公司