一种放射性c-met靶向亲和小分子化合物及其应用

一种放射性c-met靶向亲和小分子化合物及其应用
【专利摘要】本发明属于医学诊断治疗领域，特别涉及一种放射性C? MET靶向亲和小分子化合物及其应用。本发明通过放射性标记c?MET受体抑制剂，实现了肿瘤等病症的活体示踪成像。可用于监测肝细胞生长因子受体的生物化学变化特征，直观的显示c? MET的分布和数量，用于特异性的检测包括脑胶质瘤、肺癌、前列腺癌、乳腺癌、食管癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、卵巢癌、直肠癌和宫颈癌在内的多种癌症。也具有一定的抗癌活性，具有广阔的临床应用前景。
【专利说明】
一种放射性C-MET靶向亲和小分子化合物及其应用
技术领域
[0001] 本发明属于医学诊断治疗领域，特别涉及一种放射性C-MET靶向亲和小分子化合 物及其应用。
【背景技术】
[0002] 原癌基因肝细胞生长因子受体(c-MET)的编码产物是肝细胞生长因子(HGF)的细 胞膜受体，属酪氨酸激酶受体，当HGF与C-MET结合后，会引起受体二聚化并导致一系列信号 途径的激活，从而引起肿瘤血管生成、增殖、细胞运动性增强和侵袭，最终发生转移，因而C-MET及其配体HGF相互作用与人类多种肿瘤的发生、发展有关。现有研究发现，C-MET受体在 多种肿瘤中高表达，包括脑胶质瘤、肺癌、前列腺癌、乳腺癌、食管癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、卵 巢癌、直肠癌和宫颈癌等。HGF/C-MET信号通路参与了肿瘤与基质的相互作用，促进肿瘤细 胞增殖、肿瘤血管生成、抑制肿瘤细胞凋亡，从而促进肿瘤的侵袭和转移，因此HGF/C-MET已 成为肿瘤诊断中的分子标志物，更是肿瘤治疗中有效的分子靶点。由于C-MET在肿瘤中的重 要作用，因此以c-MET为靶点的肿瘤治疗及成像研究是热点方向。
[0003]目前已经开发多种治疗策略，包括单克隆抗体和小分子酪氨酸激酶抑制剂等。目 前，超过20个不同的治疗药物，包括HGF单克隆抗体、C-MET单克隆抗体以及C-MET激酶小分 子抑制剂，已进入临床研究阶段。因此，目前迫切需要C-MET检测方法，对病变的C-MET表达 水平进行检测，用于指导肿瘤治疗方案的设计和实施。
[0004] 由于在肿瘤患者中可存在C-MET基因的突变、扩增和过表达;故其相应的检测方法 有直接测序法、绝对荧光定量PCR、免疫荧光原位杂交(FISH)和免疫组织化学染色法(IHC)， 通过分析C-MET基因和C-MET蛋白筛选出适合C-MET抑制剂应用的获益人群。但是，这些体外 检测方法主要依靠对大量的、细胞水平或离体组织的实验结果的分析。体外检测方法虽可 判断、分析细胞或组织的C-MET表达水平，但从技术层面上分析，都存在着一定的局限性:① 需要通过细胞培养、活检或尸检取得标本，不能直接应用于人体;②体外实验结果可能与活 体状态下的真实情况不符:体外实验受实验条件、实验设备、实验方法的影响较大，在样品 的处理过程中，可能会遗失某些重要的成分，误差较大，使得实验结果与活体状态下的真实 情况不符;③体外实验不利于动态研究:体外实验需要在不同的时间点处死实验动物来获 取组织或反复活检取材，只能观察疾病的某一阶段，无法实现在同一动物体内真正的动态 研究，不易在如此复杂的、进展的疾病全过程得到准确的结论;④操作复杂，费时耗财，随机 性很大。因此，C-MET的活体可视化研究可能为解决这些问题，提供了一种新的思路，而分子 影像学技术的出现使之成为可能。
[0005] 分子影像学是指在活体状态下，应用影像学方法对人或动物体内的细胞和分子水 平生物学过程进行成像、定性和定量研究的一门学科。它以应用分子探针为显著特点，采用 多种成像手段，对体内特定靶点进行成像。成像手段包括:放射性核素成像(radionuclide imaging)、磁共振成像（magnetic resonance imaging，MRI )、磁共振波谱成像（MR spectroscopy，MRS)、光学成像（optical imaging，01)、超声成像（ultrasound imaging， US)及多模式融合成像（integration of multi-mode imaging)等。借助这些成像技术，生 命系统内部某些特定的生理或者病理过程，如基因表达，蛋白质之间相互作用，信号传导， 细胞的代谢以及细胞示踪等等可变为直观的图像显现出来。其中PET成像以其敏感性高，空 间分辨率高，定量准确等特点，目前成为临床应用范围广的分子成像技术。
[0006] 迄今为止，C-MET靶向性核医学成像探针主要是应用大分子进行放射性核素标记。 例如，通过长半衰期放射性核素89Zr或者 76Br(tl/2 = 16.2h)标记Onartuzumab，MAb DN30， anti cal in PRS-110和nanobodies等抗体分子。尽管这些方法表明通过PET活体评估肿瘤C_ MET表达的可行性，但是，基于生物大分子的探针需要等较长的时间（至少是注射后1天)才 能获得较好的图像对比度。有学者报道通过放射性 1251标记多肽，利用单光子发射断层成像 (SPECT)检测脑胶质瘤的C-MET表达。但是，所获得图像对比度很差。目前为止，基于多肽和 小分子化合物的分子成像探针的报道很少，亟需研发基于小分子物质的活体检测和定量C-MET的方法。

【发明内容】

[0007] 本发明所要解决的技术问题是提供一种放射性C-MET靶向亲和小分子化合物。
[0008] 使用本发明提供的放射性C-MET靶向亲和小分子化合物，通过活体分子成像技术 对C-MET进行过活体检测和定量，可在活体确定C-MET的表达数量、分布和疾病发展过程中 C-MET的动态变化情况，明确c-MET靶向治疗干预的最佳时间、剂量，并对C-MET靶向治疗的 疗效进行准确客观的评价。进一步的研究发现本发明的化合物具有抗癌活性，其抗脑胶质 瘤细胞U87MG的IC50在30nM至0.5μΜ之间。
[0009] 本发明提供的放射性c-MET靶向亲和小分子化合物的结构为：
[0010]
[0013]
[0014] R为连接cMET母体的部位。
[0015] 如上所述，Rhfc的放射性同位素1中，11(：， 758广7(^、1241、0(^、^^、^^6厶烷基取 代化合物为：
[0016] 7
[0017] 其中R8为连接Radio-cMET部位，其可以为0,3，(：，順。1? 8也可以为1当1?8为圆寸，其可 以连接另一个烷基取代基。n = 0~5J为1中，11(：，758匕7(^、 1241、0(/^、^^^勵0厶6厶中的一 种。
[0018] 如上所述，当R8为N时可连接另一个烷基取代基，其结构为：
[0019]
[0020]其中 cMET 为连接 Radio-CMET 部分。m，n2 = 0~5。乂1山可为 18F，nC，75Br、76Br、124I、 D0TA、N0TA、N0DAGA。
[0021 ]如上所述，当R2为苄基及其取代物时，其结构如下：
[0022]
[0023]其中 R9到R13 为Η，18F，nC，75Br、76Br、 124I、N〇2、OH、C00H、CF3、SO4H、PO3H2、D0TA、ΝΟΤΑ、 NODAGA。Ri，R3-7到 R9-13 不同时为Η。
[0024] 这些小分子化合物可作为肿瘤示踪物应用于临床前动物实验、临床试验和临床。 其药学特性为ΑΤΡ竞争性C-MET小分子抑制剂，可用于肿瘤成像及治疗。本发明提供的 Radio-CMET靶向性分子探针主要用于在活体内对生物过程进行成像、定量和测量研究。基 本结构一般分为两个部分：信号组件（signaling component)和亲和组件（affinity component)。信号组件是指能产生影像学信号且能被高精度的成像技术探测的造影剂或标 记物部分（如放射性核素、荧光素、顺磁性原子及超声微泡等），本发明中为放射性同位素 18F，nC，75Br、76Br、1241及可被D0TA、ΝΟΤΑ，、NODAGA螯合的放射性同位素 64Cu，68Ga等；亲和组 件即靶向分子，是与成像靶点特异性结合的部分(如配体或抗体等），本发明中为喹啉类C 一 MET抑制剂母体结构。
[0025] 本发明提供的分子探针由信号组分和靶向亲和组分两部分组成，所述信号组分为 可供正电子发射断层显像设备检测的部分，具体为放射性核素 D0TA、ΝΟΤΑ，、NODAGA螯合的放射性同位素64Cu，68Ga等;所述靶向亲和组分为本专利涉及的、 对c-MET靶向亲和小分子化合物。引入该类探针，应用正电子发射断层显像(PET)，可在活体 内检测到正常生理及病理情况下，感兴趣区域的C-ΜΕΤ的数量、分布，及其在疾病发展的不 同阶段的变化特征。对于肿瘤的成像即基于此原理，放射性C-MET抑制剂向C-MET受体过表 达的肿瘤部位聚集，通过PET及其相关设备即可检测到。
[0026] 本发明开发的C-MET靶向性影像学诊断类药物(分子探针），具有良好的药代动力 学特征和生物学分布特征，检测结果更加准确，应用更加方便，以图像的形式直观反映多种 肿瘤的生物化学特征。
[0027] 本发明的靶向特异性探针具有如下优点：
[0028] 1)、具有C-MET受体靶向特异性，确保C-MET分子成像靶向检测的准确性。一般影像 学和核医学检查所用的非特异性探针不能特异性识别并结合体内的生物分子，因此只能提 供疾病分子改变下游的信息(解剖、病理和生理学改变），或者疾病的整体形态和功能信息， 例如血流量的改变、血流灌注的改变。若想准确检测疾病发展过程中的关键标志物分子，则 要求探针可特异性识别并结合体内分子标志物，提供疾病分子水平的信息，加深对疾病生 物过程的理解。另外，利用靶向特异性探针，可有效地减少探针与其他非成像靶点的非特异 性结合，更加有助于对成像靶点进行准确的定量。自身阻断实验和商品化C-MET靶向性小分 子抑制剂Crizonitib和Cabozantinib阻断实验均证实探针对C-MET受体具有革E向特异性。
[0029] 2)、C-MET的活体可视化，确保c-MET分子成像检测的安全、无创和直观性。实现疾 病发展过程中关键分子标志物的活体可视化，要求探针具有发射影像学信号，可供无创的 影像学设备在体外检测的性能，通过图像直观的显示出分子标志物的分布情况。因为影像 学检查具有安全、无创、直观的特点。
[0030] 3)、分子探针与靶点c-MET的高亲和力。实现C-MET活体检测，获得理想的分子成像 图像的前提是分子探针在成像靶点的高浓度聚集，即要求探针到达靶区后就与靶点结合， 解离的时间相对较晚，确保在几个血液循环周期后，探针在靶点达到理想的聚集状态。经实 验证实，分子探针的 IC5Q为98.75 ± 7.6 InM，Bmax为6842，Kd为0.9523mo 1/L。
[0031] 4)、分子探针检测C-MET的高敏感性。在疾病早期，或者治疗干预的早期检测到分 子标志物的变化情况，通常要求探针可检测到非常少量的生物标志物，即具有高度敏感性。 另外，与治疗药物不同，理想的分子探针必须确保其产生的生物学影响或药理学作用尽量 低，因此需要探针的敏感性足够高，只需要少量的探针就可获得理想的图像，尽量减少引入 体内探针的数量，降低探针引发的药理学作用。
[0032] 5)、C_MET活体分子成像的高对比度。高对比度的图像要求病变区域的信号强度足 够高，即靶/背景比值(实验证实：探针的肿瘤/肌肉比值达到3.4:1;肿瘤/脑组织比值约为 4.67:1)和信号/噪声比值很高(实验证实:探针的肿瘤/噪声比值达到3.7:1)。这就要求探 针具有理想的生物学分布特征，即探针在靶区浓聚的量大，停留的时间长，而在正常组织器 官内摄取率低，清除速度快。
[0033] 6)、分子探针在活体内高度稳定。尽管分子探针的引入量可能很少，但是维持分子 探针在活体内的稳定性和完整性依然是一个难题，因为血浆内或者靶组织内存在许多酶， 可将探针降解。图像质量和定量研究的准确性依赖于探针在活体内的稳定性。实验证实，探 针在离体血浆中的稳定性很高，共孵育4小时后，有95%以上的探针结构保持完整。活体稳 定性结果表明：经静脉注射后1小时后，在血液、肝脏、肿瘤和肾脏中，有60%以上的探针结 构保持完整。
[0034] 7)、分子探针的免疫源性和毒性低。应用于人体的分子探针必须安全、没有免疫源 性和毒性。产生的药理学作用尽量低。
[0035] 8)、分子探针的生产过程简便易行，成本低。分子探针的制备过程方便易行，成本 低廉，有助于在临床广泛的应用。如果生产过程复杂，成本高则势必会影响分子探针的临床 转化。经研究已经证实该探针在活体内稳定性良好，C-MET靶向分子成像特异性高，准确性 高，图像的对比度佳，适用于脑胶质瘤、肺癌的肿瘤的诊断、明确C-MET靶向治疗的受益人 群，明确治疗干预的最佳时间、剂量，并对治疗的疗效进行准确客观的评价。同时，也为肿瘤 的基础研究提供了有效的方法，为研究C-MET与疾病的发生、发展特征之间的相关性提供了 新的手段。
[0036] 9)、本发明的c-MET分子探针具有良好的抗癌活性，其抗癌IC50在30nM至0.5μΜ之 间。
【附图说明】
[0037]图1，18F-cMET-l与脑胶质细胞瘤细胞存在明显的特异性结合。
[0038]图2,脑胶质瘤18F-cMET - 1PET活体分子成像。
[0039] 图 3，18F-cMET - 1 对U87MG细胞的 IC50 值。
[0040] 图4，脑胶质瘤686&-勵0六6六-〇1^1'-1活体分子成像。
[0041 ]图5,686&-勵0厶6厶-。]\^1'一1对1]87]\^细胞的1〇50值。
[0042] 图6，18F-cMET - 2在正常小鼠中的生物分布图。
[0043]图7，脑胶质瘤18F-cMET - 2PET活体分子成像。
[0044]图8，原位脑胶质瘤18F-cMET - 2PET活体分子成像。
[0045] 图9，肺癌的18F-cMET - 2PET活体分子成像。
[0046]图 l〇，18F-cMET -2 对 U87MG 细胞的 IC50 值。
【具体实施方式】
[0047] 本发明公开了一类放射性标记的ATP竞争性C-MET小分子抑制剂，作为分子成像探 针用于活体PET分子成像方法。为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下 面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。
[0048] 由于放射性核素18F是当前临床应用最为广泛的核医学成像放射性核素，具有：1) 释放正电子的效率高（97%)，没有散射线；（2)易于生产，各大医院可以通过自有的加速器 自行生产；（3)具有合适的物理半衰期（110min)，（4)具有较低的正电子能量(0.635MeV)，安 全性高；（5)标记方法简单，对于小分子化合物可通过亲核取代等化学合成方法简单标记 上。本发明列举两例 18F标记的CMET放射性抑制剂对本发明进行具体案例阐释。但本发明不 只局限于以下表述。
[0049] 实施例1:
[0050] 1)18F-cMET-1探针的合成与表征；
[0051]
[0052]反应试剂:4mg cMET-Ι，K18F，K222/K2C03溶液( 18F标记用，含 15mgK222和3 · 5mgK2C03每 _升），干燥DMS0。
[0053]操作过程：
[0054]使用标准18F放射性标记反应仪进行标记。具体为粒子加速器现制备的K18F(K 2C03 中和H18F产生），加入lmLK222/K2C〇3溶液，加入lmL乙腈并搅拌，通N 2，加热至85°C吹干溶剂，再 重复加入lmL乙腈并吹干两次(共3次），除去所用K18F中的水。取4mgCMET-l反应物，溶于lmL 无水DMS0中，混合均匀后N2保护下加入反应仪，加热至110°C反应30min。制备HPLC分离纯化 得 18F -cMET-1</H NMR(300MHz，CDC13)S8.85((1, J = 2.6Hz, 1H) ,8.31(s，lH) ,8.24-8.10 (m,lH),7.84-7.67(m,2H),7.57(t,J=7.9Hz,lH),7.35(s,lH),6.66(s,lH),5.45-5.17(m, lH),4.96(d ,J = 6.1Hz,lH),4.66(d ,J = 5.1Hz,2H),3.98-3.75(m,4H),3.47-3.28(m,4H), 1.65(d，J = 5.8Hz，3H).ESI-MS(m/z)505.2(M+H+).制备过程中用乙醇及水反复冲洗C-18柱 子洗脱产物，最终产物加热至60 °C并用氮气吹干。最后，18F标记的cMET - 1溶于roS中并通 过0.22μπι超微过滤到消毒剂量瓶中，用于体外和活体实验。同样，用分析型HPLC测定标记 率，放射化学纯，比活度等。
[0055] 2)离体实验证明
[0056] a.细胞系：C-MEΤ阳性不同级别人脑胶质细胞瘤U87MG [ WHO IV级]，U251 MG [ WHO III-1V级]和Hs683[WHO I-II级]。C-MET阴性人前列腺癌LnCap细胞用做阴性对照。
[0057] b.细胞结合和阻断实验:C-MET阳性不同级别人胶质细胞瘤和对照组LnCap细胞， 0.5X106/孔，实验前一天铺于12孔板，共四组:A组:U87MG细胞组;B组：U251MG细胞组；C组： Hs683细胞组，D组:LnCap细胞组。每组分阻断和非阻断两个亚组，各3孔，实验重复3次。每孔 加入18F-cMET-l，浓度为luCi/wel 1，200ul。阻断组加入没标记的c-META，浓度为lyg/200ul。
[0058]结果显示：18F-cMET-l与脑胶质细胞瘤细胞存在明显的特异性结合，与对照组 LnCap细胞则无结合。引入过量未经标记的CMET-1阻断后，18F-cMET-l与脑胶质细胞瘤的结 合明显的大大减低。引入商品化C-MET的革E1向特异性小分子抑制剂Cr i ζ οn i t i b和 Cabozantinib阻断后，18F-cMET-l与脑胶质细胞瘤的结合明显的大大减低（图1)。
[0059] 3)脑胶质瘤18F-cMET - 1PET活体分子成像
[0060]建立裸鼠脑胶质瘤(U87MG)皮下移植瘤模型，探针18F-cMET-l注射后一小时，行5 分钟静态PET成像扫描，并结合CT扫描。结果如图2。18?-cMET - 1在静脉注射后1小时后在肿 瘤部位现明显聚集，而探针在对照组LnCap肿瘤(C-MET表达阴性）中未见聚集。经大量未标 记的 19F-cMET - 1阻断后，探针在肿瘤中的聚集量明显减少，说明探针在肿瘤中聚集的靶向 特异性。
[0061] 4)18F-cMET-1 对 U87MG 细胞的 IC50
[0062] 使用10 %FBS，加双抗的细胞培养液DMEM，在96孔板中孵育U87MG细胞5000个/孔。 孵育24h后，在96孔板的第一竖排加入500μΜ的18F -cMET-1，剩下各排分别等倍稀释后加 入。药品加入完毕后孵育48h，接着进行MTT试验得到该化合物对U87MG细胞的半数有效浓度 IC50。经检测18F-cMET- 1的IC50约为250nM，如图3所示。
[0063] 实施例2:
[0064] 1 )68Ga-NODAGA-cMET- 1 探针的合成与表征；
[0065]
[0066] 把NODAGA-cMET - 1加入至含有68Ga放射性同位素的乙醇溶液中，调节pH至合适的 值，反应30min，然后用C18淋洗柱淋洗出产品，放射性检测器检测标记成功。
[0067] 2)脑胶质瘤68Ga-NODAGA-cMET - 1活体分子成像
[0068] 建立裸鼠脑胶质瘤(U87MG)皮下移植瘤模型，探针68Ga-NODAGA-cMET - 1注射后一 小时，行5分钟静态PET成像扫描，并结合CT扫描。结果如图4。686&-NODAGA-cMET-1在静脉 注射后2小时后在肿瘤部位现明显聚集，而探针在对照组0VCAR3肿瘤(C-MET表达阴性）中未 见聚集。经大量未标记的NODAGA-cMET - 1阻断后，探针在肿瘤中的聚集量明显减少，说明探 针在肿瘤中聚集的靶向特异性。
[0069] 3) 68Ga-NODAGA-cMET - 1 对U8 7MG细胞的 IC50
[0070] 使用10 %FBS，加双抗的细胞培养液DMEM，在96孔板中孵育U87MG细胞5000个/孔。 孵育24h后，在96孔板的第一竖排加入500μΜ的68Ga-NODAGA-cMET- 1，剩下各排分别等倍 稀释后加入。药品加入完毕后孵育48h，接着进行MTT试验得到该化合物对U87MG细胞的半数 有效浓度IC50。经检测68Ga-NODAGA-cMET - 1的IC50约为30nM，如图5所示。
[0071] 实施例3
[0072] 1)18F-cMET -2探针的合成与表征；
[0073]
[0074] 反应试剂:4mg cMET-2，K18F，K222/K2C03溶液( 18F标记用，含 15mgK222和3 · 5mgK2C03每 _升），干燥DMS0。
[0075]操作过程：
[0076]使用标准18F放射性标记反应仪进行标记。具体为粒子加速器现制备的K18F(K 2C03 中和H18F产生），加入lmLK222/K2C〇3溶液，加入lmL乙腈并搅拌，通N 2，加热至85°C吹干溶剂，再 重复加入lmL乙腈并吹干两次(共3次），除去所用K18F中的水。取4mgCMET-2反应物，溶于lmL 无水DMS0中，混合均匀后N2保护下加入反应仪，加热至110°C反应30min。制备HPLC分离纯化 得Μρ - ΟΙΕΤ - 〗。1!! Mffi(300MHz,Chloroform-d)S8.78((1, J = 2.7Hz，1H) ,7.71 (s，lH)， 7.24-7.21(m，1H)，6.87(s，1H),5.35-5.19(m，lH)，4.19(s，2H)，3.83(d，J=28.6Hz，4H)， 3.30(d，J = 9.1Hz，4H)，1.63-1.52(m，3H) .ESI-MS(m/z)370.1(M+H+).制备过程中用乙醇及 水反复冲洗C-18柱子洗脱产物，最终产物加热至60°C并用氮气吹干。最后， 18F标记的cMET - 2溶于PBS中并通过0.22μπι超微过滤到消毒剂量瓶中，用于体外和活体实验。同样，用分析型 HPLC测定标记率，放射化学纯，比活度等。
[0077] 2)探针活体生物学分布特征：18F - cMET - 2在正常小鼠中的生物分布尾静脉注 射18F-cMET - 1二小时后，处死小鼠，取出器官，进行离体主要器官伽玛计数器测量，结果显 示:探针18F - cMET - 1主要分布于脑胶质瘤、肝脏，胃肠道，主要经肝肠道排泄，部分经肾脏， 泌尿系统排泄。尤其是其较高的脑胶质瘤摄取，这是和脑胶质瘤表达较高C-MET受体是非常 一致的（图6)。
[0078] 3)脑胶质瘤18F-cMET - 2PET活体分子成像
[0079]建立裸鼠脑胶质瘤(U87MG)皮下移植瘤模型，探针18F-cMET - 2注射后一小时，行5 分钟静态PET成像扫描，并结合CT扫描。结果如图了。1# 一 cMET - 2在静脉注射后1小时后在肿 瘤部位现明显聚集，而探针在对照组LnCap肿瘤(C-MET表达阴性）中未见聚集。经大量商品 化(3_]\^1'的祀向特异性小分子抑制剂〇12011；[1：；[13和0313023111：；[11；[13阻断后阻断后，探针在肿 瘤中的聚集量明显减少，说明探针在肿瘤中聚集的靶向特异性。
[0080] 4)原位脑胶质瘤18F-cMET - 2PET活体分子成像
[0081 ] 建立裸鼠原位不同级别脑胶质瘤模型：U87MG，WH0 IV;U251MG，WH0 III-IV和 Hs683，WH0 I-II。探针18F - cMET - 2注射后一小时，行5分钟静态PET成像扫描，并结合CT扫 描。结果如图8。邴一cMET -2在静脉注射后1小时后在肿瘤部位现明显聚集，且肿瘤对探针 的摄取量与肿瘤级别呈正相关。Western bLot结果表明：C-MET的表达水平与胶质瘤的级别 呈正相关，即胶质瘤级别越高，C-MET的表达水平越高。该实验结果表明： 18F-cMET - 2PET可 用于检测脑胶质瘤，并对脑胶质瘤的C-MET表达水平进行定量，同时判断脑胶质瘤的预后。 (实验证实:探针的肿瘤/肌肉比值达到3.4:1;肿瘤/脑组织比值约为4.67:1)和信号/噪声 比值很高(实验证实:探针的肿瘤/噪声比值达到3.7:1)。活体PET/CT定量结果与动物处死 后的探针全身分布结果一致。
[0082] 5)肺癌的18F-cMET - 2PET活体分子成像
[0083] 建立裸鼠皮下肺癌A549模型。探针18F-cMET - 2注射后一小时，行5分钟静态PET成 像扫描，并结合CT扫描。结果如图9。18?-cMET - 1在静脉注射后1小时后在肿瘤部位现明显 聚集，经大量未标记的19F - cMET - 2阻断后，探针在肿瘤中的聚集量明显减少，说明探针在 肿瘤中聚集的靶向特异性。
[0084] 6)18F-cMET -2 对 U87MG 细胞的 IC50
[0085] 使用10 %FBS，加双抗的细胞培养液DMEM，在96孔板中孵育U87MG细胞5000个/孔。 孵育24h后，在96孔板的第一竖排加入500μΜ的18F -cMET - 2,剩下各排分别等倍稀释后加 入。药品加入完毕后孵育48h，接着进行MTT试验得到该化合物对U87MG细胞的半数有效浓度 IC50。经检测18F-cMET - 2的IC50约为ΙΟΟηΜ，如图10所示。
【主权项】
1. 一种放射性C-MET靶向亲和小分子化合物，结构为：其中Ri~7为11、1中、11(：、758匕768匕 1241、0(^^、1^^或吣0厶6厶，1?1至1?7不同时为氢，或1?1、1?3 为18F，11C，75Br J6Br、124I、DOTA、NOTA、NODAGA烷基取代物，R2为苄基及其取代物； 所述的D0TA、N0TA、N0DAGA的结构式为：R为与cMET母体化合物相连接的部位。2. 如权利要求1所述小分子化合物，其特征在于，所述Ri、R3的放射性同位素18F、nC、 75Br、76Br、124I、DOTA、ΝΟΤΑ、NODAGA烷基取代化合物为：FvH^ jc其中R8为连接部位，为〇， S，C，NH或Ν，当R8为N时，其可以连接另一个烷基取代基;η = 0~5，Χ为18F、nC、75Br、76Br、 124I、 DOTA、ΝΟΤΑ、NODAGA 中的一种。3. 如权利要求1所述小分子化合物，其特征在于，当R2为苄基及其取代物时，其结构如 下：其中 R9到Ri3为H，18F，11C，75Br、 76Br、124I、NO2、OH、COOH、CF3、SO4H、PO 3H2、DOTA、ΝΟΤΑ或 NODAGA，Ri，R3-7，R9-13不同时为H。4. 权利要求1~3任一项所述的化合物用作肿瘤成像的探针。5. 权利要求1~3任一项所述的化合物在制备抗癌药物上的用途。
【文档编号】C07D215/38GK106008339SQ201610402431
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年6月8日
【发明人】程震, 张翱, 申宝忠, 卜丽红, 陈浩
【申请人】武汉绿海棕生物科技有限公司