羧基麦芽糖铁注射液及其在生物医药中的应用
【专利摘要】本发明公开了羧基麦芽糖铁注射液及其在生物医药中的应用，本发明提供的羧基麦芽糖铁注射液中含有羧基麦芽糖铁和一种结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)，羧基麦芽糖铁、化合物(Ⅰ)单独作用时，对胆囊炎胆石症具有治疗作用；羧基麦芽糖铁和化合物(Ⅰ)联合作用时，对胆囊炎胆石症的治疗效果进一步提高，可以开发成治疗胆囊炎胆石症的注射液，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
羧基麦芽糖铁注射液及其在生物医药中的应用
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，具体涉及羧基麦芽糖铁注射液及其在生物医药中的应 用。
【背景技术】
[0002] 羧基麦芽糖铁是一种新型的铁络合物，用麦芽糊精将铁离子稳定地络合在其中， 控制铁的释出，铁离子能与铁转运蛋白和铁蛋白结合以发挥作用，并防止释放大量的游离 铁，减少有毒氧化物形成。羧基麦芽糖铁能有效提高轻到中度缺铁性贫血患者Hb和血清铁 蛋白浓度。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供羧基麦芽糖铁注射液及其在生物医药中的应用。
[0004] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0005] 一种具有下述结构式的化合物（I)，
[0006]
[0007] -种羧基麦芽糖铁注射液，包括羧基麦芽糖铁、如权利要求1所述的化合物（I)和 药学上可以接受的载体。
[0008] 上述化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将滇鸡血藤粉碎，用65~75% 乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇 萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中正丁醇取物 用大孔树脂除杂，先用20 %乙醇洗脱9个柱体积，再用65 %乙醇洗脱10个柱体积，收集65 % 洗脱液，减压浓缩得65%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中65%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶 分离，依次用体积比为65:1、35:1、15:1和7:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d) 步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为12:1、7:1和1:1的二氯甲烷-甲醇 梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积 百分浓度为58 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集11~15个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得 到化合物(I)。
[0009] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)用70%乙醇热回流提取，合并提取 液。
[0010] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，所述大孔树脂为D101型大孔吸附树脂。
[0011] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯进行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0012] 上述化合物(I)在制备治疗胆囊炎胆石症的药物中的应用。
[0013] 上述羧基麦芽糖铁注射液在制备治疗胆囊炎胆石症的药物中的应用。
[0014] 本发明的优点:本发明提供的羧基麦芽糖铁注射液中含有羧基麦芽糖铁和一种结 构新颖的天然产物，羧基麦芽糖铁和该天然产物单独作用时，对胆囊炎胆石症具有治疗作 用;二者联合作用时，对胆囊炎胆石症的治疗效果进一步提高，可开发成治疗胆囊炎胆石症 的注射液。
【具体实施方式】
[0015] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。
[0016] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0017]分离方法：（a)将滇鸡血藤(2kg)粉碎，用70 %乙醇热回流提取（15L X 3次），合并提 取液，浓缩至无醇味(3L)，依次用石油醚(3L X 3次）、乙酸乙酯(3L X 3次)和水饱和的正丁醇 (3LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中 乙酸乙酯萃取物用D101型大孔树脂除杂，先用20%乙醇洗脱9个柱体积，再用65%乙醇洗脱 10个柱体积，收集65%洗脱液，减压浓缩得65%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中65%乙醇洗 脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为65:1 (9个柱体积）、35:1 (10个柱体积）、15:1 (8 个柱体积)和7:1(8个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分4 用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为12:1(6个柱体积）、7:1(7个柱体积)和1:1(6个柱 体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的 反相硅胶分离，用体积百分浓度为58 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集11~15个柱体积洗脱 液，洗脱液减压浓缩得到化合物（I) (HPLC归一化纯度大于98% )。
[0018] 结构确证:册431-1^显示[1+!1]+为111/2 237.1775，结合核磁特征可得分子式为 〇1出24〇2，不饱和度为4。核磁共振氢谱数据5(1(??111，〇〇(：1 3,5〇(^泡）：!1-10(2.23，111)，!1-2€[ (1.58，m)，H-20(1.87，m)，H-3a(1.66，m)，H-3a(2.25，m)，H-5(2.32，br，t，J=7.8Hz)，H-6a (2.78，br，d，J=12.6Hz)，H-60(2.33，ddd，J=12.6,7.8，1.8Hz)，H-8a(1.96，m)，Η-8β (1.94，m)，H-9a(5.79，dd，J=7.5,4.6Hz)，H-12(1.15，s)，H-13(1.25，s)，H-14(1.87，s)，H-15(1.38, s);核磁共振碳谱数据&(ppm，CDCl3,125MHz):55.5(CH，1-C)，30.4(CH 2,2-C)， 39.5(CH2,3-C)，94.9(C，4-C)，55.4(CH，5-C)，33.8(CH2,6-C)，93.7(C，7-C)，29.8(CH2,8-C)，124.1(CH，9-C)，135.8(C，10-C)，72.4(C，11-C)，24.2(CH 3，12-C)，25.1(CH3，13-C)，23.5 (013，14-0,29.6(01 3，15-0。红外光谱(3374(^1)表明该化合物含有羟基基团。化合物的 氢谱中显示该化合物有四个单峰甲基信号(知1.15,1.25,1.87和1.38)，一个烯属次甲基质 子信号[6 115.79(1!1，(1(1，1 = 7.5,4.6他）]。该化合物的碳谱显示15个碳信号，包括四个甲基， 四个亚甲基，三个次甲基(一个烯烃碳），三个连氧季碳以及一个烯烃季碳。综合高分辨质谱 以及核磁数据，该化合物可能为一个倍半萜类化合物。查阅文献可以看出该化合物和已知 化合物4(1，7€[-￡?0178皿丨3116-10€[，11-(1;[01具有相似的结构。比较两者的核磁数据发现，新 化合物中相较于4α，7a-Epoxyguaiane-l0a，11-diol唯一的区别是多出了一组双键碳信号。 在新化合物的HMBC谱中，H-9与C-10和C-14,以及H-1与C-10和C-14的相关性表明C-9和C-10 之间为双键。因此，该化合物仍然是一个C-4、C-7位形成氧桥的愈创木烷型倍半萜。ROESY谱 中，H 3-15/H-5，H3-15/H-1以及H-5/H3-12之间的相关可以推断该化合物H-5，H-1，H 3-15以及 C-7位上的叉丙基为β构型。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和ROESY谱，以及文献关于相关类型核磁 数据，可基本确定该化合物如下所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论值与实验值 基本一致。
[0019]该化合物化学式及碳原子编号如下：
[0020]
[0021] 实施例2:药理作用
[0022]本实施例使用胆总管不全结扎及胆囊内注入大肠杆菌的方法制备胆囊炎胆石症 兔模型，观察药物降低局部组织TNF-a、i3_EP含量、降低胆汁粘滞度等方面的抗胆囊炎胆石 症作用。
[0023] 1、材料与方法
[0024] 1.1动物
[0025]选3月-4月龄的健康家兔，体重1.3kg_l. 9kg，由湖南医科大学动物学部提供并饲 养。
[0026] 1.2试剂与样品
[0027] 羧基麦芽糖铁购自中国药品生物制品检定所。化合物（I)自制，制备方法见实施例 UTNF放免试剂盒由北京东亚生物技术研究所提供，EP放免试剂盒由北京海科锐生物技术 中心提供。大肠杆菌由湖南省卫生防疫站提供，由中南大学湘雅医院交叉感染科培养并提 供5 X 106/L的大肠杆菌菌液。
[0028] 1.3仪器
[0029]血液流变学LGR-80系列血液粘度测试仪(锥板式）由北京世帝科学仪器公司提供。 [0030] 1.4兔分组及模型制备
[0031] 兔随机分为6组，每组12只，分别为正常对照组、模型对照组、阳性对照组(龙胆泻 肝汤组，50mg · kg-〇和羧基麦芽糖铁组(80mg · kg-4、化合物（I)组(80mg · kg-〇、羧基麦芽 糖铁与化合物（I)组合物组【40mg · kg^1羧基麦芽糖铁+40mg · kg^1化合物（I)】。正常对照 组:进行假手术，并每日静脉注射生理盐水;模型对照组:进行造模手术，并每日静脉注射生 理盐水;龙胆泻肝汤组:进行造模手术，并每日静脉注射龙胆泻肝汤；其余组：进行造模手 术，并每日静脉注射上述剂量的药物。给药时间是从手术后d2开始，每日上午09:30/10:30 给药1次，共7d。
[0032]造模手术:在兔胆总管外沿胆总管方向放入12#针头，用1#丝线结扎后拔出针头，造 成胆总管局部狭窄。再暴露胆囊，在体部进针，注入O.lmL浓度5X106 · Γ1的大肠杆菌菌液。 结扎针口，缝合切口肌肉皮肤。
[0033] 1.5胆汁粘度测定实验
[0034] 各组家兔观察治疗7d后处死.抽取胆汁lmL测胆汁粘度。
[0035] 1.6肿瘤坏死因子(TNF-α)及β-内啡肽(β-ΕΡ)测定实验
[0036] 剥离胆囊，取胆囊组织干燥后称重200mg左右，加 lmL生理盐水均浆。均浆后 4000r · min-1离心20min，提取上清液拟测肿瘤坏死因子(TNF-a)及β-内啡肽(β-ΕΡ)。
[0037] 1.7统计学方法
[0038]实验数据用均数土标准差(X土s)表示，应用SPSS18.0版统计软件进行单因素方差 分析和t检验，以Ρ<0.05为差异有统计学意义。
[0039] 2、实验结果
[0040] 2.1对胆囊炎胆石症模型兔胆汁粘滞度的影响
[0041] 与正常对照组比，模型对照组兔胆汁粘滞度明显升高（Ρ<0.01);与模型对照组 比，羧基麦芽糖铁与化合物（I)组合物组和阳性对照组兔胆汁粘滞度明显降低(ρ<0.01); 与模型对照组比，羧基麦芽糖铁组、化合物（I)组兔胆汁粘滞度降低(Ρ<〇.05)。结果见表1。
[0042] 2.2对胆囊炎胆石症模型兔TNF-a、β-ΕΡ的影响
[0043] 与正常对照组比，模型对照组兔的TNF-a、β-ΕΡ明显升高(Ρ<0.01)。与模型对照组 比，羧基麦芽糖铁与化合物（I)组合物组和阳性对照组TNF-aj-EP显著降低(Ρ<0.01);与 模型组比，羧基麦芽糖铁组、化合物（I)组TNF-aj-EP降低(Ρ<0.05)。结果见表1。
[0044] 表1对胆囊炎胆石症模型兔胆汁粘滞度和TNF-a、β-ΕΡ含量的影响
[0045]
[0046] 胆囊炎胆石症的发病原因主要为胆汁淤积和细菌感染。因此在胆囊炎胆石症的动 物模型中，这也是两个关键性因素。
[0047] 上述结果表明，羧基麦芽糖铁、化合物（I)单独作用时，对胆囊炎胆石症具有治疗 作用;羧基麦芽糖铁和化合物（I)联合作用时，对胆囊炎胆石症的治疗效果进一步提高，可 以开发成治疗胆囊炎胆石症的注射液。
[0048]上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物（I)，2. -种羧基麦芽糖铁注射液，其特征在于:包括羧基麦芽糖铁、如权利要求1所述的化 合物(I)和药学上可以接受的载体。3. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含以下操作步骤：（a)将滇 鸡血藤粉碎，用65~75 %乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸 乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物； (b)步骤(a)中正丁醇取物用大孔树脂除杂，先用20%乙醇洗脱9个柱体积，再用65%乙醇洗 脱10个柱体积，收集65%洗脱液，减压浓缩得65%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中65%乙醇 洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为65:1、35:1、15:1和7:1的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为12:1、7:1 和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的 反相硅胶分离，用体积百分浓度为58 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集11~15个柱体积洗脱 液，洗脱液减压浓缩得到化合物(I)。4. 根据权利要求3所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)用70%乙醇热回 流提取，合并提取液。5. 根据权利要求3所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为DlOl型 大孔吸附树脂。6. 根据权利要求3所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯进行萃取，得到二氯甲烷萃取物。7. 权利要求1所述的化合物（I)在制备治疗胆囊炎胆石症的药物中的应用。8. 权利要求2所述的羧基麦芽糖铁注射液在制备治疗胆囊炎胆石症的药物中的应用。
【文档编号】A61K31/343GK106008408SQ201610333666
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月18日
【发明人】秦勇, 王 琦, 赵维, 于学珍, 徐成, 周自桂, 陈建芳
【申请人】江苏神龙药业有限公司