一种提高dc-cik细胞制剂活率的方法
【专利摘要】本发明公开了一种提高DC?CIK细胞制剂活率的方法，包括如下步骤：将培养扩增后的T细胞进行第一次离心，得到一次离心细胞；将一次离心细胞用生理盐水清洗后，进行第二次离心，得到二次离心细胞；将二次离心细胞用生理盐水清洗后，进行第三次离心，得到DC?CIK细胞制剂。本发明可有效去除死细胞，增加收获细胞制剂的细胞活率，获得的细胞活率能大于90％，有利于临床回输。
【专利说明】
-种提高DC-CIΚ细胞制剂活率的方法
技术领域
[0001] 本发明设及DC-CIK细胞制剂活率技术领域，尤其设及一种提高DC-CIK细胞制剂活 率的方法。
【背景技术】
[0002] 自体免疫Τ细胞技术，是从患者患者的外周血中分离出Τ细胞，通过体外培养、扩 增、制剂，回输患者体内，诱导人体自身产生免疫应答。目前，DC-CIK技术的整个培养周期大 约为14天左右，随着培养时间的增加和个体差异，后期的培养后细胞活率会下降，有可能会 低于标准（大于80%)，细胞数大量回输时，死细胞的增加，在临床上会增加其他的一些风 险。前人在制剂时使用的是500g的离屯、力，如此之高的离屯、力即可分离活细胞与死细胞，也 可造成活细胞裂解，进而降低活细胞的获取率，影响制剂质量。如何提高DC-CIK细胞制剂中 细胞的活率，成为目前需要解决的技术问题。
【发明内容】
[0003] 本发明提出了一种提高DC-CIK细胞制剂活率的方法，本发明可有效去除死细胞， 增加收获细胞制剂的细胞活率，获得的细胞活率能大于90%，有利于临床回输。
[0004] 本发明提出的一种提高DC-CIK细胞制剂活率的方法，包括如下步骤：
[0005] S1、将培养扩增后的T细胞进行第一次离屯、，得到一次离屯、细胞；
[0006] S2、将一次离屯、细胞用生理盐水清洗后，进行第二次离屯、，得到二次离屯、细胞；
[0007] S3、将二次离屯、细胞用生理盐水清洗后，进行第Ξ次离屯、，得到DC-CIK细胞制剂。 [000引优选地，在S1中，离屯、力为300-500g，离屯、时间为5-15min。
[0009] 优选地，在S1中，离屯、力为400g，离屯、时间为1 Omin。
[0010] 优选地，在S2中，离屯、力为300-500g，离屯、时间为2-lOmin。
[0011] 优选地，在S2中，离屯、力为400g，离屯、时间为5min。
[001^ 优选地，在S3中，离屯、力为300-500g，离屯、时间为2-lOmin。
[0013] 优选地，在S3中，离屯、力为400g，离屯、时间为5min。
[0014] 本发明通过改变收获细胞时的离屯、力，去除死细胞，增加收获细胞的细胞活率。通 过本发明获得的细胞活率能大于90%，有效的去除死细胞，有利于临床回输。
【具体实施方式】
[0015] 下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。
[0016] 实施例1
[0017] 一种提高DC-CIK细胞制剂活率的方法，包括如下步骤：
[0018] S1、将培养扩增后的T细胞进行第一次离屯、，得到一次离屯、细胞；
[0019] S2、将一次离屯、细胞用生理盐水清洗后，进行第二次离屯、，得到二次离屯、细胞；
[0020] S3、将二次离屯、细胞用生理盐水清洗后，进行第Ξ次离屯、，得到DC-CIK细胞制剂。
[0021] 实施例2
[0022] 一种提高DC-CIK细胞制剂活率的方法，包括如下步骤：
[0023] S1、将培养扩增后的T细胞进行第一次离屯、，得到一次离屯、细胞，离屯、力为300g，离 屯、时间为15min;
[0024] S2、将一次离屯、细胞用生理盐水清洗后，进行第二次离屯、，得到二次离屯、细胞，离 屯、力为300g，离屯、时间为lOmin;
[0025] S3、将二次离屯、细胞用生理盐水清洗后，进行第Ξ次离屯、，得到DC-CIK细胞制剂， 离屯、力为300g，离屯、时间为lOmin。
[00%] 实施例3
[0027] 一种提高DC-CIK细胞制剂活率的方法，包括如下步骤：
[00%] S1、将培养扩增后的T细胞进行第一次离屯、，得到一次离屯、细胞，离屯、力为500g，离 屯、时间为5min;
[0029] S2、将一次离屯、细胞用生理盐水清洗后，进行第二次离屯、，得到二次离屯、细胞，离 屯、力为500g，离屯、时间为2min;
[0030] S3、将二次离屯、细胞用生理盐水清洗后，进行第Ξ次离屯、，得到DC-CIK细胞制剂， 离屯、力为500g，离屯、时间为2min。
[0031] 实施例4
[00创一种提高DC-CIK细胞制剂活率的方法，包括如下步骤：
[0033] S1、将培养扩增后的T细胞进行第一次离屯、，得到一次离屯、细胞，离屯、力为400g，离 屯、时间为lOmin;
[0034] S2、将一次离屯、细胞用生理盐水清洗后，进行第二次离屯、，得到二次离屯、细胞，离 屯、力为400g，离屯、时间为5min;
[0035] S3、将二次离屯、细胞用生理盐水清洗后，进行第Ξ次离屯、，得到DC-CIK细胞制剂， 离屯、力为400g，离屯、时间为5min。
[0036] 将实施例4、5中，步骤S1、S2、S3获得的细胞活率如下表1所示：
[0037] 表1不同离屯、力下获得的细胞活率对比 [00；3 引
[0039] W上所述，仅为本发明较佳的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此， 任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明掲露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其 发明构思加 W等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种提高DC-CIK细胞制剂活率的方法，其特征在于，包括如下步骤： 51、 将培养扩增后的T细胞进行第一次离心，得到一次离心细胞； 52、 将一次离心细胞用生理盐水清洗后，进行第二次离心，得到二次离心细胞； 53、 将二次离心细胞用生理盐水清洗后，进行第三次离心，得到DC-CIK细胞制剂。2. 根据权利要求1所述的提高DC-CIK细胞制剂活率的方法，其特征在于，在S1中，离心 力为300-500g，离心时间为5-15min。3. 根据权利要求2所述的提高DC-CIK细胞制剂活率的方法，其特征在于，在S1中，离心 力为400g，离心时间为lOmin。4. 根据权利要求1所述的提高DC-CIK细胞制剂活率的方法，其特征在于，在S2中，离心 力为300-500g，离心时间为2-10min。5. 根据权利要求4所述的提高DC-CIK细胞制剂活率的方法，其特征在于，在S2中，离心 力为400g，离心时间为5min。6. 根据权利要求1所述的提高DC-CIK细胞制剂活率的方法，其特征在于，在S3中，离心 力为300-500g，离心时间为2-10min。7. 根据权利要求6所述的提高DC-CIK细胞制剂活率的方法，其特征在于，在S3中，离心 力为400g，离心时间为5min。
【文档编号】C12N5/0784GK106011062SQ201610482968
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年6月24日
【发明人】钱鹏, 赵依妮, 许国贞, 刘振云
【申请人】安徽未名细胞治疗有限公司