后部丝腺可合成和分泌亲水性丝胶蛋白的家蚕的制备方法
【专利摘要】本发明提供一种后部丝腺可合成和分泌亲水性丝胶蛋白的家蚕的制备方法。该方法包括以下步骤：将编码氨基酸序列SER的DNA分子重组到家蚕染色体上，利用荧光蛋白标记筛选得到所述后部丝腺可合成和分泌亲水性丝胶蛋白的家蚕。其中，编码氨基酸序列SER的DNA分子的核苷酸序列5'端至3'端依次为家蚕丝素重链蛋白Fib?H基因启动子、家蚕Fib?H基因5'端信号肽编码序列、家蚕丝胶蛋白质SER3编码序列Ser3和家蚕Fib?H基因3'端序列。本发明的方法能够使家蚕中部丝腺特异表达的亲水性丝胶蛋白基因能够同时在后部丝腺高效表达和分泌，并在家蚕成熟幼虫吐丝结茧后，获得丝素纤维中含有亲水性丝胶蛋白成分的蚕茧，进而获得纤维吸水性能得到提高的家蚕丝。
【专利说明】
后部竺腺可合成和分泌亲水性竺胶蛋白的家蚕的制备方法
技术领域
[0001] 本发明设及生物工程领域，具体设及一种后部丝腺可合成和分泌亲水性丝胶蛋白 的家蚕的制备方法。
【背景技术】
[0002] 家蚕吐丝结虽，虽丝则能够生产丝蛋白质纤维。丝腺是家蚕高度特化的合成和分 泌丝蛋白的器官，一条家蚕幼虫拥有2条非常相似的丝腺，每条丝腺分前部丝腺、中部丝腺 和后部丝腺Ξ个功能区域。中部丝腺和后部丝腺是蚕丝蛋白质的合成和分泌部位，而前部 丝腺是丝蛋白输出体外的管道。
[0003] 家蚕后部丝腺主要合成和分泌丝素蛋白，运是一种具有β折叠结晶结构，坚初而有 弹性的蛋白质，占虽丝总量的70-80%，是制作丝铜等纺织品的基本原料。丝素蛋白质包括 丝素轻链（light chain，Fib-L)和重链化eavy chain，F;Lb-H)，还有Ρ25蛋白（又称纤维六聚 素，fibrohexamerin，Fhx/P25)等（Yamaguchi et al.,1989；Sprague 1975；Couble et al.，1983)。它们分别由丝素蛋白基因 fib-H、fib-L和p253编码，它们的表达具有严格的组 织和发育时期特异性（Couble et al.，1983;Maekawa&Suzuki 1980;Tsujimoto et al.， 1981;Tsuda et al. ,1981)。在家蚕后部丝腺中，門b-H、門b-L和P25W6:6:1的摩尔比组成 复合体，作为丝素的基本结构单位（Inoue 2000)，其中Fib-H和Fib-LW二硫键相互连接， P25则W非共价键一疏水相互作用与Fib-H/門b-L复合体结合。P25具有分子伴侣样的功能， 在丝素蛋白复合体的折叠 W及非溶解性长链蛋白的分泌中具有重要的功能（Tanaka et al.，1999)。
[0004] 家蚕的中部丝腺细胞中含有超过7种主要的丝胶蛋白，它们主要由3个位于家蚕第 11 连锁群的Serl、Ser2和Ser3基因编码（Okamoto et al.，1982;Michaille et al.，1986; 1990;化kasu et al. ,2007)，它们的表达受到所处组织部位和发育阶段的控制。Seri基因 只在中部丝腺后部的150个细胞内转录4种不同长度的丝胶mRNA，其中1条2.8化的mRNA在整 个5龄幼虫期，只在靠近后部丝腺的42个细胞内表达，而10.5，9.0和4. Okb巧巾mRNA只在其 余的108个细胞中，分别在不同的发育阶段通过不同的剪接途径产生（Couble et al.， 1983)。编码SerlmRNA的外显子选择性拼接，在幼虫不同发育期会产生多种蛋白变体，导致 在同一个体内，各个转录事件后，单个基因会生产出结构和性质不同的蛋白，Seri的初级转 录物的不同剪接也受发育阶段调控(Couble et al.，1983;Garelet曰1.，1997)。在5龄初 期，Ser2基因在所有的中部丝腺细胞中表达，后来其表达就被限制在中部丝腺的前部 (Takasu et al.，2010);Ser3只在中部丝腺的中前部表达SER3蛋白（Takasu et al.， 2010)。
[0005] 家蚕后部丝腺细胞合成的丝素蛋白质不断向腺腔分泌，并逐渐由后部丝腺腺腔向 中部丝腺腺腔移动。家蚕幼虫在成熟后吐丝结虽过程中，丝素蛋白质分子不断聚合成直径 Ο.?μπι左右、断面呈不规则圆形的原纤（也称原纤维），并进一步紧密集束而成蚕丝的丝素 "忍"。原纤是由结晶纤维及非结晶纤维分子聚合体沿轴向交替串联而成，原纤间紧密相靠， 通过周缘分子侧链牢固联接，无间质充填，运是丝素纤维特殊光泽和能够生产超细蛋白质 纤维的分子基础。
[0006] 家蚕丝腺中的丝素原纤在形成丝素纤维和向前部移动的过程中先后被包裹了 4层 丝胶蛋白，其中SER3蛋白由于在中部丝腺中前部合成，因此包裹在最外层，不会与丝素蛋白 质纤维直接接触。沈R3蛋白具有较低的结晶度和高流动性。丝胶占蚕丝量的20%-30%，分 子构象主要为无规卷曲，含有少量β结构存在，但无 α螺旋结构，分子空间结构松散、无序。
[0007] 家蚕丝腺分泌的丝胶蛋白质与丝素蛋白质的氨基酸组成有非常明显的氨基酸偏 好性差异。丝素蛋白主要由甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸和酪氨酸组成。丝胶蛋白则主要由丝氨 酸、天口冬氨酸、苏氨酸、甘氨酸和谷氨酸等组成。丝胶蛋白中的甘氨酸、丙氨酸和酪氨酸含 量显著低于丝素蛋白，并且游离氨基酸含量显著高于丝素。丝胶蛋白链上有许多精氨酸、赖 氨酸、谷氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、酪氨酸等长侧链氨基酸，多肤链表面还含有-〇H、-COOH、- N此等极性亲水基团。因此，丝胶蛋白具有优异的吸湿、保湿和吸除异味等作用，其中丝胶蛋 白SER3的吸水性和流动性显著高于Seri基因翻译的4种紧贴丝素的内层丝胶蛋白质。
[000引家蚕丝纺织品生产的缴丝和精练等操作过程中，蚕丝表面的丝胶蛋白几乎被除 净，其中作为外层丝胶主要成分的SER3被清除的更加彻底。保留丝胶的家蚕丝织物，不仅存 在光泽差和染色不匀的问题，还存在织物柔软度差，服用舒适性变差的问题，因此脱胶是提 高蚕丝光泽、保证染色均匀性的工艺要求。虽然脱胶后基本W丝素构成的蚕丝纤维分子的 吸水性仍然高于棉纤维近30%，但丝铜的服用感受没有棉布吸水。运是由于蚕丝价格昂贵， 丝铜几乎都是薄型织物，纤维总吸水量少。为此，在丝素蛋白质中渗入丝胶蛋白质，有望改 变丝素的纤维结构与理化性能，实现改变纤维功能的目的，特别是同时兼用丝素和丝胶的 双重特性，运是在丝素纤维表面残留丝胶，或者在蚕丝纤维或织物表面进行丝胶涂层无法 实现的一种功能利用。
【发明内容】
[0009] 为解决上述技术问题，本发明提供一种后部丝腺可合成和分泌亲水性丝胶蛋白的 家蚕的制备方法，该方法所获得的家蚕在成熟幼虫吐丝结虽后能获得丝素纤维中含有亲水 性丝胶蛋白成分的蚕虽。
[0010] 为实现上述目的，本发明采用了 W下技术方案：
[0011] 在一方面，本发明提供了一种后部丝腺可合成和分泌亲水性丝胶蛋白的家蚕的制 备方法，包括W下步骤：
[0012]将编码氨基酸序列SER的DNA分子重组到家蚕染色体上，表达、翻译并经筛选得到 所述后部丝腺可合成和分泌亲水性丝胶蛋白的家蚕；
[0013] 其中，所述编码氨基酸序列S邸的DNA分子的核巧酸序列5'端至3'端依次为家蚕丝 素重链蛋白Fib-H基因启动子、家蚕Fib-H基因5'端信号肤编码序列、家蚕丝胶蛋白质SER3 编码序列Ser3和家蚕Fib-H基因3'端序列。
[0014] 在一具体实施例中，家蚕丝胶蛋白质SER3具有SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列。 [001引优选地，编码SEQ ID N0:1所示的氨基酸序列的DNA分子具有沈Q ID N0:2所示的 核巧酸序列。
[0016]在另一具体实施例中，氨基酸序列S邸具有SEQ ID N0:3所示的氨基酸序列。
[0017] 优选地，编码SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的DNA分子具有沈Q ID NO:4所示的 核巧酸序列。
[001引在一具体实施例中，将编码氨基酸序列S邸的DNA分子重组到家蚕染色体上具体包 括W下步骤：
[0019] 构建包含编码氨基酸序列Sm?的DNA分子的转座载体;及将所述转座载体导入到家 蚕蚕卵中。
[0020] 优选地，将转座载体导入家蚕蚕卵的方法为显微注射。
[0021] 优选地，转座载体为piggyBac转座子构建的重组基因 Serf转座载体PB-ser。
[0022] 更优选地，piggyBac转座子构建重组基因 Ser3转座载体PB-ser具体包括W下步 骤：
[0023] 在SER3蛋白编码核酸序列的上游5'端连接家蚕Fib-H基因启动子和家蚕Fib-H基 因5'端信号肤编码序列，在SER3蛋白编码核酸序列的下游3'端连接家蚕Fib-H基因的3'端 序列得到重组基因 Ser;将带有眼部和神经特异性启动子SV40及红色巧光蛋白化Red元件的 PiggyBac-3xP3-DsRed质粒(序列如SEQ ID ^:6所示）与人工合成的5日1'序列分别进行43(：1 和Fsel双酶切；将酶切后的piggybac-3xP3-DsRed质粒和Ser序列连接，从而得到转座载体 PB-Ser〇
[0024] 优选地，转座载体PB-Ser具有SEQ ID NO:5所示核巧酸序列。
[0025] 在另一方面，本发明提供一种具有编码SEQ ID N0:3所示氨基酸序列的DNA分子的 转座载体。
[00%]优选地，该转座载体为piggyBac转座子构建的重组基因 Serf转座载体PB-ser。
[0027] 优选地，该转座载体具有SEQ ID NO:5所示核巧酸序列。
[0028] 借由上述技术方案，与现有技术相比，本发明具有W下优点:本发明提供了一种后 部丝腺可合成和分泌亲水性丝胶蛋白的家蚕的制备方法，该方法能够使家蚕中部丝腺特异 表达的亲水性丝胶蛋白SER3能够同时在后部丝腺高效表达和分泌，并在家蚕成熟幼虫吐丝 结虽后，获得丝素纤维中含有亲水性丝胶蛋白成分的蚕虽，进而获得纤维吸水性能得到提 高的家蚕丝和丝织物。
【附图说明】
[0029] 图1图示编码Sm?氨基酸序列的重组基因 Ser序列；
[0030] 图2图示重组基因 Ser的转座载体PB-Ser;
[0031] 图3图示重组基因 Ser突变体家蚕和野生型家蚕的区别。
【具体实施方式】
[0032] 下面结合附图对本发明的【具体实施方式】作进一步详细描述。应理解的是，W下实 施例仅用于说明本发明，而不应理解为对本发明范围的限制。
[0033] 本发明提供了一种后部丝腺可合成和分泌亲水性丝胶蛋白的家蚕的制备方法，将 编码氨基酸序列S邸的DNA分子重组到家蚕染色体上，然后经表达、翻译即得。其中，编码氨 基酸序列S邸的DNA分子的核巧酸序列5'端至3'端依次为家蚕丝素重链蛋白Fib-H基因启动 子、家蚕Fib-H基因5'端信号肤编码序列、家蚕丝胶蛋白质SER3编码序列Ser3和家蚕Fib-H 基因3'端序列。
[0034] 在本发明的制备方法中，编码氨基酸序列SER是一种能够在家蚕后部丝腺高效表 达，在家蚕中部丝腺特异表达的丝胶蛋白质序列SER3的重组表达序列。将编码氨基酸序列 S邸的DNA分子重组到家蚕染色体上，编码氨基酸序列S邸在家蚕体内表达后，家蚕幼虫后部 丝腺细胞中在合成丝素蛋白质的同时能够合成丝胶蛋白质SER3。进一步的，后部丝腺细胞 合成的丝胶蛋白质SER3能够向腺腔分泌，共存在后部丝腺腺腔中的丝素蛋白质分子间。进 一步的，伴随后部丝腺腺腔中的丝素蛋白一起逐渐向中部丝腺腺腔移动。进一步的，在家蚕 幼虫成熟后吐丝结虽过程中，伴随丝素蛋白质分子的原纤形成充填在原纤之间，使原本无 间质充填的丝素原纤间出现丝胶充填物。也有部分SER3在家蚕幼虫吐丝过程中，伴随前部 丝腺管道的约束和吐丝孔的挤压，从丝素原纤间溢出，被包裹在内层丝胶与丝素之间。
[0035] 在一具体实施方案中，家蚕丝胶蛋白质SER3具有SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列。 编码SEQ ID NO: 1所示氨基酸序列的DNA分子具有SEQ ID NO:2所示的核巧酸序列。
[0036] 在一具体实施方案中，氨基酸序列sm?具有SEQ ID N0:3所示的氨基酸序列。
[0037] 由于密码子的简并性，可W存在很多种能够编码本发明的氨基酸序列sm?的DNA分 子。
[0038] 在一具体实施方案中，编码SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的DNA分子具有SEQ ID NO: 4所示的核巧酸序列。
[0039] 本领域技术人员可W根据通用的家蚕转基因操作及转基因蚕获得步骤，将编码氨 基酸序列Sm?的DNA分子重组到家蚕染色体上，制备得到稳定遗传的后部丝腺高效合成和分 泌亲水性丝胶蛋白的家蚕模型。
[0040] 在一具体实施方案中，将编码氨基酸序列S邸的DNA分子重组到家蚕染色体上包括 W下步骤:构建包含编码氨基酸序列SER的DNA分子的转座载体;及将转座载体导入到家蚕 蚕卵中。
[0041] 在又一具体实施方案中，采取如下的步骤将编码氨基酸序列S邸的DNA分子整合到 家蚕染色体上：
[0042] 1、构建转座载体
[0043] 在SER3蛋白编码核酸序列的上游5'端连接家蚕Fib-H基因启动子和家蚕Fib-H基 因5'端信号肤编码序列，在SER3蛋白编码核酸序列的下游3'端连接家蚕Fib-H基因的3'端 序列得到重组基因 Ser。将带有眼部和神经特异性启动子SV40及红色巧光蛋白化Red元件的 piggyBac-3xP3-DsRed质粒(序列如SEQ ID ^:6所示）与人工合成的5日1'序列分别进行43(：1 和Fsel双酶切。将酶切后的piggybac-3xP3-DsRed质粒和Ser序列连接，组成转座载体PB- Ser。重组基因 Ser和转座载体PB-Ser结构示意图见图1和图2。
[0044] 2、获得转基因的家蚕
[0045] (1)无菌和无核酸污染的环境中，采用显微注射方法向每粒蚕卵注入4000ng- 5000ng的转座载体质粒；
[0046] (2)注射后的蚕卵用无毒材料封涂注射孔，然后在无菌环境，用26°C-27°C、75%- 80%相对湿度、自然光照保护蚕卵至解化，解化后幼虫继续在相同溫度、湿度和光照环境中 用桑叶或人工饲料饲养，结虽后幼虫继续用相同溫、湿度和光照环境保护至成虫羽化；
[0047] (3)羽化后蚕蛾自交或回交后，所产卵解化后幼虫用桑叶或人工饲料饲养，幼虫3- 5龄期、蛹期或成虫期巧光显微镜下调查，眼部呈现红色巧光的个体，作为转基因 G1代个体； [004引（4)选择转基因 G1代个体胚胎、幼虫、蛹或成虫的眼部呈现红色巧光的个体继代， 至G6代后即获得稳定遗传的后部丝腺高效合成和分泌亲水性丝胶蛋白的家蚕。
[0049] 本发明还提供了一种G1代后鉴定后部丝腺高效合成和分泌亲水性丝胶蛋白的转 基因家蚕的方法，在巧光显微镜下观察，所结蚕虽的虽丝呈现绿色巧光的幼虫个体为后部 丝腺高效合成和分泌亲水性丝胶蛋白的转Serf基因家蚕。
[0050] 本发明还提供了一种具有编码SEQ ID N0:3所示氨基酸序列的DNA分子的转座载 体。
[0051 ]在一些实施方案中，转座载体为PB-Ser，包含piggyBac转座酶识别序列piggyBac 3'LTR和piggyBac 5'LTR、眼部及神经特异启动子3xP3、EGFP报告基因、SV40的多聚腺巧酸 加尾序列、重组基因 Ser。其中piggyBac转座酶识别序列分别位于转座载体上的piggyBac 3'LTR的左端和piggyBac 5'LTR的右端上的TTAA位点；piggyBac转座酶识别序列piggyBac 3'LTR与piggyBac5'LTR之间依次为人工启动子3XP3、EGFP报告基因、SV40的多聚腺巧酸加 尾序列和重组基因 Ser。
[0052] 在一些优选实施方案中，转座载体具有如SEQ ID N0:5所示核巧酸序列。
[0053] 本发明还提供了本发明的方法制备得到的稳定遗传的后部丝腺高效合成和分泌 亲水性丝胶蛋白SER3的家蚕。
[0054] 本发明所提供的后部丝腺高效合成和分泌亲水性丝胶蛋白的家蚕，在5龄幼虫期 后部丝腺细胞和后部丝腺腺腔分泌蛋白质中能够检测到亲水性丝胶蛋白质SER3成份。在一 些优选实施方案中，成熟幼虫后部丝腺腺腔中累积的分泌丝蛋白质中丝胶蛋白质SER3含量 大于5%，在吐出的丝蛋白质中丝胶蛋白质SER3含量大于10%。
[0055] 为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明提供的方法进行详细说明。 [0化6] 实施例1
[0化7] 制备重组基因 Ser的转座载体
[005引在丝胶蛋白质SER3编码核巧酸序列Serf的上游连接家蚕Fib-H基因的启动子和5' 端信号肤编码序列，下游连接家蚕Fib-H基因的3'端序列得到重组基因 Ser，其核巧酸序列 如沈Q ID NO:4所示。
[0059] 将含有3个串联的家蚕眼和神经系统特异性转录因子PAX-6结合序列组成的人工 启动子3 X P3的PiggyBac-3 X P3-DsRed质粒(序列如沈Q ID NO: 6所示）与人工合成的Ser序 列分别进行AscI和Fsel双酶切。将酶切后的piggyBac-3XP3-DsRed质粒和Ser序列用T4连 接酶16Γ过夜反应。然后将产物进行电泳检测，并将酶切的Ser条带进行纯化回收和测序。 鉴定序列正确的即为转座载体PB-Ser，其核巧酸序列如SEQ ID N0:5所示的。
[0060] 具体示意图如图1-图2所示。图1为重组基因 Ser，图2为重组基因 Ser的转座载体。
[0061] 实施例2
[0062] 制备后部丝腺可合成和分泌亲水性丝胶蛋白的家蚕
[0063] 根据通用的家蚕转基因操作及转基因蚕获得步骤，将重组基因 Ser序列整合到家 蚕Μ品种的基因组，得到Ser家蚕的具体步骤为：
[0064] (1)无菌和无核酸污染的环境中，采用显微注射方法向每粒蚕卵注入4000ng- 5000ng的转座载体质粒；
[0065] (2)注射后的蚕卵用无毒材料封涂注射孔，然后在无菌环境，用26°C-27°C、75%- 80%相对湿度、自然光照保护蚕卵至解化，解化后幼虫继续在相同溫度、湿度和光照环境中 用桑叶或人工饲料饲养，结虽后幼虫继续用相同溫、湿度和光照环境保护至成虫羽化；
[0066] (3)羽化后蚕蛾自交或回交后，所产卵解化后幼虫用桑叶或人工饲料饲养，蛹期巧 光显微镜下调查，眼部呈现红色巧光的个体，为转基因 G1代个体；
[0067] (4)选择转基因 G1代个体蛹的眼部呈现红色巧光的个体继代，至G6代后即获得稳 定遗传的后部丝腺高效合成和分泌亲水性丝胶蛋白的家蚕。
[0068] 对G1至G6代获得的转基因突变体Ser家蚕观察，结果如图3所示。其中图A为突变体 家蚕后部丝腺横切面形态图，外圈组织中的绿色巧光来自后部丝腺细胞合成的重组蛋白 S邸中的EGFP，内部的绿色巧光图示后部丝腺细胞合成后分泌到腺腔中的重组蛋白SER;图B 为突变体家蚕中部丝腺横切面形态图，绿色巧光图示从后部丝腺细胞转移到中部丝腺腺腔 的重组蛋白SER;图C为突变体家蚕吐出的丝蛋白质纤维，绿色巧光图示存在于丝素纤维内 部和表面的重组蛋白SER;图D图示野生型和突变体家蚕所结蚕虽的巧光差异，突变体的蚕 虽丝蛋白中具有发绿色巧光的重组蛋白SER，而野生型虽丝没有sm?的特征性绿色巧光；图E 图示图D中对应的野生型和突变体家蚕所结蚕虽的可见光图像；图F图示野生型和突变体家 蚕5龄幼虫眼部的巧光差异，突变体家蚕的幼虫的眼部呈现红光巧光，野生型家蚕的眼部不 呈红光巧光，图中箭头所指为幼虫的眼部位置。
[0069] 由图3结果可见，突变体Ser家蚕的幼虫的眼部呈现红光巧光，野生型家蚕的眼部 不呈红光巧光;Ser家蚕的虽丝呈现绿色巧光，野生型家蚕的虽丝不呈绿光巧光;Ser家蚕的 5龄幼虫后部丝腺腺腔有重组蛋白sm?的绿色巧光存在，野生型家蚕的后部丝腺腺腔没有重 组蛋白sm?的绿色巧光存在。
[0070] G6代Ser家蚕5龄摇摆期幼虫后部丝腺腺腔中累积的分泌丝蛋白质中丝胶蛋白质 沈R3含量4.9%-5.5%，在吐出的丝蛋白质中丝胶蛋白质沈R3含量8.8%-10.6%。
[0071] W上所述仅是本发明的优选实施方式，并不用于限制本发明，应当指出，对于本技 术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可W做出若干改进和 变型，运些改进和变型也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种后部丝腺可合成和分泌亲水性丝胶蛋白的家蚕的制备方法，其特征在于，包括 以下步骤： 将编码氨基酸序列SER的DNA分子重组到家蚕染色体上，表达、翻译得到所述后部丝腺 可合成和分泌亲水性丝胶蛋白的家蚕； 其中，所述编码氨基酸序列SER的DNA分子的核苷酸序列5'端至3'端依次为家蚕丝素重 链蛋白Fib-H基因启动子、家蚕Fib-H基因5'端信号肽编码序列、家蚕丝胶蛋白质SER3编码 序列Ser3和家蚕Fib-H基因3'端序列。2. 根据权利要求1所述的后部丝腺可合成和分泌亲水性丝胶蛋白的家蚕的制备方法， 其特征在于:所述氨基酸序列SER具有SEQ ID N0:3所示的氨基酸序列。3. 根据权利要求2所述的后部丝腺可合成和分泌亲水性丝胶蛋白的家蚕的制备方法， 其特征在于:编码SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的DNA分子具有SEQ ID NO:4所示的核苷 酸序列。4. 根据权利要求1所述的后部丝腺可合成和分泌亲水性丝胶蛋白的家蚕的制备方法， 其特征在于，将编码氨基酸序列SER的DNA分子重组到家蚕染色体上进一步包括以下步骤： 构建包含编码氨基酸序列SER的DNA分子的转座载体;及将所述转座载体导入到家蚕蚕 卵中。5. 根据权利要求4所述的后部丝腺可合成和分泌亲水性丝胶蛋白的家蚕的制备方法， 其特征在于:所述转座载体为piggyBac转座子构建的重组基因 Ser3转座载体PB-ser。6. 根据权利要求4或5所述的后部丝腺可合成和分泌亲水性丝胶蛋白的家蚕的制备方 法，其特征在于:所述转座载体具有SEQ ID NO:5所示核苷酸序列。7. -种具有编码SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的DNA分子的转座载体。8. 根据权利要求7所述的转座载体，其特征在于:所述转座载体为piggyBac转座子构建 的重组基因 Ser 3转座载体PB-s er。9. 根据权利要求7或8所述的转座载体，其特征在于:所述转座载体具有SEQ ID NO:5所 示核苷酸序列。
【文档编号】C12N15/85GK106011172SQ201610348866
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月24日
【发明人】徐世清, 王玉军, 陈学冬, 王永锋, 李秋颖, 陶卉, 邢瑞, 司马杨虎, 陈息林, 殷为民
【申请人】苏州大学