一种塞来昔布的药物组合物及其应用
【专利摘要】本发明公开了一种塞来昔布的药物组合物及其应用，本发明提供的塞来昔布的药物组合物中含有塞来昔布和一种结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)，塞来昔布、化合物(Ⅰ)单独作用时，对阿霉素肾病综合征具有治疗作用；塞来昔布和化合物(Ⅰ)联合作用时，对阿霉素肾病综合征的治疗效果显著提高，可以开发成治疗阿霉素肾病综合征的药物，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
一种塞来昔布的药物组合物及其应用
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，涉及塞来昔布的新用途，具体涉及塞来昔布的药物组 合物及其在阿霉素肾病综合征中的应用。
【背景技术】
[0002] 塞来昔布临床用于缓解骨关节炎的症状和体征、缓解成人类风湿关节炎的症状和 体征、治疗成人急性疼痛。
[0003] 塞来昔布是非留体类抗炎药，动物模型中观察到其有抗炎、镇痛和退热的作用。塞 来昔布的作用机理是通过抑制环氧化酶-2(C0X_2)来抑制前列腺素生成。且在人体治疗浓 度下，本品对同工酶-环氧化酶-i(cox-i)没有抑制作用。
[0004] 在动物结肠肿瘤模型中塞来昔布减缓了肿瘤的发生和进展。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种塞来昔布的药物组合物，该药物组合物中含有塞来昔 布和一种天然产物，塞来昔布和该天然产物可以协同阿霉素肾病综合征。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] 一种具有下述结构式的化合物（I)，
〇'
[0009] -种塞来昔布的药物组合物，包括塞来昔布、如权利要求1所述的化合物（I)和药 学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。
[0010] 进一步地，药学上可以接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、 崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。
[0011] 进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、 膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
[0012]上述化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将山麦冬粉碎，用80~90%乙 醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃 取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中正丁醇取物用 大孔树脂除杂，先用30 %乙醇洗脱6个柱体积，再用85 %乙醇洗脱12个柱体积，收集85 %洗 脱液，减压浓缩得85%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中85%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分 离，依次用体积比为100:1、50:1、25:1和12:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d) 步骤(C)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1、12:1和2:1的二氯甲烷-甲 醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体 积百分浓度为88%的甲醇水溶液等度洗脱，收集13~16个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩 得到化合物(I)。
[0013] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)用85%乙醇热回流提取，合并提取 液。
[0014] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，所述大孔树脂为D101型大孔吸附树脂。
[0015]进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯进行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0016] 上述化合物(I)在制备治疗阿霉素肾病综合征的药物中的应用。
[0017] 上述塞来昔布的药物组合物在制备治疗阿霉素肾病综合征的药物中的应用。
[0018] 本发明的优点：
[0019] 本发明提供的塞来昔布的药物组合物中含有塞来昔布和一种结构新颖的天然产 物，塞来昔布、化合物(I)单独作用时，对阿霉素肾病综合征具有治疗作用;塞来昔布和化合 物（I)联合作用时，对阿霉素肾病综合征的治疗效果显著提高，可以开发成治疗阿霉素肾病 综合征的药物。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0021 ]实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0022] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0023]分离方法：（a)将山麦冬(2kg)粉碎，用85%乙醇热回流提取（15LX 3次），合并提取 液，浓缩至无醇味（3L)，依次用石油醚（3L X 3次）、乙酸乙酯（3L X 3次）和水饱和的正丁醇 (3LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中 乙酸乙酯萃取物用D101型大孔树脂除杂，先用30%乙醇洗脱6个柱体积，再用85%乙醇洗脱 12个柱体积，收集85%洗脱液，减压浓缩得85%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中85%乙醇洗 脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为100:1 (12个柱体积）、50:1 (10个柱体积）、25:1 (8个柱体积)和12:1(8个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组 分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1(6个柱体积）、12:1(8个柱体积)和2:1(6 个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键 合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为88 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集13~16个柱体积 洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物（I) (HPLC归一化纯度大于98% )。
[0024] 结构确证:册431-]\^显示[]\?1]+为111/2 235.1620，结合核磁特征可得分子式为 C15H22〇2，不饱和度为5。核磁共振氢谱数据δΗ( ΡΡπι，CDC13，500MHz):H-2(5 · 64，dd，J = 8 · 4， 6.OHz)，H-3a(2.26，m)，H-30(1.79，m)，H-5(2.24，m)，H-6a(1.87，m)，H-60(1.79，m)，H-8a (1.73，m)，H-80(1.51，m)，H-9a(1.34，m)，H-90(1.81，m)，H-12(l.ll，s)，H-13(l.ll，s)，H- 14(1.14,8)，!1-153(4.78,8)，!1-153(4.89,8);核磁共振碳谱数据5。( ？?111，〇0(：13，12510^): 131.4(C，1-C)，125.1(CH，2-C)，37.1(CH2,3-C)，155.2(C，4-C)，55.3(CH，5-C)，33.3(CH2,6-C)，76.3(C，7-C)，39.2(CH2,8-C)，26.1(CH2,9-C)，35.7(C，10-C)，32.8(C，11-C)，32.1(CH 3， 12-C)，29.2(CH3,13-C)，25.1 (CH3，14-C)，112.1 (CH2，15-C)。红外吸收光谱（3378cm-〇表明 该化合物含有羟基基团。化合物的氢谱中显示该化合物有三个单峰甲基信号（S H1.11，1.11 和1.14)，一个烯属次甲基质子信号〇(15.64，(1(1，1 = 8.4,6.0他）以及一组环外双键质子信 号（δΗ4.78和4.89)。该化合物的碳谱显示15个碳信号，其中有两组双键碳信号，以及一个连 氧碳信号。综合高分辨质谱以及核磁数据，该化合物可能为一个倍半萜类化合物。通过4-? COSY，HSQC和HMBC谱，可以连接出一个愈创木烷型的骨架。HMBC谱中，H-3/C-2，H-2/C-1，H-14/C-1以及H-3/C-1之间的相关性表明C-1和C-2位为双键。此外，H-15/C-5，H-15/C-4，H-3/ C-4以及H-5/C-4之间的相关性说明C-15和C-4位之间存在一个环外双键。同时，H-6/C-7，H-8/07，!1-12/(：-7以及!1-13/(：-7之间的圓8(：相关性说明(：-7位为连氧碳。此外，!1-14/(：-11，!1-12/C-10，H-9/C-ll以及H-13/C-10的相关性表明C-10和C-11为碳碳连接。N0E差谱试验中照 射H-5可以发现Η-14，Η_3α有明显增益，表明H-5和H-14为α构型。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和 R0ESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如下所示，立体构型进一 步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致。
[0025]该化合物化学式及碳原子编号如下：
[0027] 实施例2:药理作用
[0028]本实施例使用阿霉素（14.5mg · kg"1)按渗透栗灌注要求填充，手术植入大鼠腹腔， 通过渗透压恒释阿霉素诱发肾病综合征模型制备治疗阿霉素肾病综合征(NS)大鼠模型，观 察药物减少NS大鼠尿蛋白，降低大鼠血清尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)等方面的抗阿霉素肾病 综合征作用。
[0029] 1、材料与方法
[0030] 1.1动物
[0031] SPF级SD大鼠，雄性，体重180~200g，购自广东省医学实验动物中心。所有大鼠均 行动活跃、毛发光泽，两次尿蛋白定性试验阴性(试纸条法）。
[0032] 1.2试剂与样品
[0033]塞来昔布购自中国药品生物制品检定所。化合物（I)自制，制备方法见实施例1。盐 酸阿霉素(深圳万乐药业有限公司），氯化钠(广东总华化药厂有限公司），水合氯醛(天津津 南区咸水沽工业园区），多项尿液检测试纸条(干式化学法）（艾康生物科技有限公司），考马 斯亮蓝试剂盒(南京建成科技有限公司），FITC荧光素标记兔抗大鼠 IgG(北京博奥森生物科 技有限公司）。
[0034] 1.3仪器
[0035] ALZET2004型渗透缓释栗(美国DURECT公司），代谢笼(苏州市艾可林实验动物器材 厂），T6新世纪紫外-可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司），T1000型电子天平 (常熟市双杰测试仪器厂），EL204型电子分析天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司）， 65-12manul动物无创血压测试仪(美国IITC公司），全自动生化分析仪（日立-7180);冰冻切 片机(LeicaCM1800);荧光倒置显微镜(NIK0NTE2000-S)。
[0036] 1.4大鼠分组及模型制备
[0037] 1.4.1阿霉素渗透栗的准备Alzet2004D渗透栗(0.25±5)yL · ^28(1)。填充前称 取各渗透栗质量并记录，按渗透栗填充要求灌充阿霉素生理盐水溶液（14.5mg · kg<)，称量 灌注后各渗透栗质量并记录，以灌注前后渗透栗质量的差值计算灌注体积，灌注体积小于 要求填充体积90%，抽空重新填充;填充合格的透栗浸入37°C无菌生理盐水中，备用。
[0038] 1.4.2渗透栗的植入SD大鼠 60只，雄性，适应性喂养1周，随机挑选50只大鼠以10 % 水合氯醛麻醉，大鼠背部朝上固定，于右肾下方2cm位置开口并将阿霉素渗透栗植入肾脏上 方，缝合肌肉层及皮层，术后每只老鼠肌注青霉素〇.2mL/只；另外10只，同样操作，仅置入渗 透栗同样大小塑胶，假手术处置作为空白对照组。造模期间以尿蛋白试纸监测造模情况，造 模两周后，收集24h尿液，考马斯亮蓝法测定尿蛋白含量，造模组和正常组比较无差异的予 以剔除，造模成功大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组(地塞米松组，50mg· kg"1)和塞来昔布组(80mg · kg<)、化合物（I)组(80mg · kg"1)、塞来昔布与化合物（I)组合物 组【40mg · kg<塞来昔布+40mg · kg<化合物（I)】。适应环境1周后，连续灌胃给药7d，空白对 照组和模型对照组大鼠 ig等量的生理盐水。
[0039] 1.524h尿蛋白测定实验
[0040]给药4周后将各组大鼠装入代谢笼收集24h尿液，考马斯亮蓝法定量测定24h尿蛋 白量，观察各组大鼠尿蛋白变化。
[0041 ] 1.6血清指标测定实验
[0042]末次给药后lh，麻醉大鼠，腹主动脉取血，分离血清，全自动生化分析仪检测血液 生化指标:尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)。
[0043] 1.7统计学方法
[0044]实验数据用均数土标准差(X土s)表示，应用SPSS18.0版统计软件进行单因素方差 分析和t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
[0045] 2、实验结果
[0046] 2.1对NS模型大鼠对NS尿蛋白的影响
[0047]与空白对照组比较，模型对照组大鼠24h尿蛋白显著升高(P<0.01);与模型对照 组比较，塞来昔布与化合物（I)组合物组和阳性对照组尿蛋白显著降低(P<〇.01);与模型 对照组比较，塞来昔布组、化合物（I)组尿蛋白降低(P<〇.05)。
[0048] 实验结果见表1。
[0049] 2.2对NS模型大鼠肾功能指标的影响
[0050] 与空白对照组比，模型对照组大鼠 BUN，Cr水平明显上升(P<0.01)。与模型对照组 比，塞来昔布与化合物（I)组合物组和阳性对照组大鼠 BUN，Cr水平明显下降（P<0.01);与 模型对照组比，塞来昔布组、化合物（I)组大鼠 BUN，Cr水平下降(P<0.05)。
[00511实验结果见表1。
[0052]表1对NS模型大鼠尿蛋白和肾功能指标的影响
[0054]肾病综合征常见的病理组织学改变是局灶节段性肾炎、膜性肾病和微小病变，近 年来成人肾病综合征中微小病变肾病综合征及膜增殖性肾炎呈减少趋势，而系膜性IgA肾 病呈增加趋势。阿霉素诱发大鼠肾病综合征是一个经典模型，阿霉素在体内相关酶的作用 下，使细胞膜和细胞器生物膜脂质过氧化，对肾小球和肾小管上皮产生直接毒性作用而产 生大量蛋白尿。
[0055] 渗透压缓释栗技术是一种新型的恒速缓释给药方式，由药物、渗透压剂和半透膜 组成，通过渗透压提供药物释放的驱动力，将所需试剂溶液按要求持续的、定量定点缓释到 需要给药的部位。渗透栗植入实验动物体内针对特定部位给药（如脊髓、颅腔、肝脏、脾脏 等），已成功运送上百种药剂，包括蛋白质、多肽、生长因子、抗生素、化疗药、激素、类固醇、 s iRNA。在动物给药、动物模型构建、药物筛选等众多领域发挥着不可替代的作用。本实验采 用微渗栗技术恒释阿霉素诱发肾病综合征模型，将阿霉素装入微渗栗里植入到大鼠腹腔， 对阿霉素进行长期恒速微量释放，延长阿霉素在体内作用时间，避免因注射引起的浓度波 动。
[0056] 上述结果表明，塞来昔布、化合物（I)单独作用时，对阿霉素肾病综合征具有治疗 作用；塞来昔布和化合物（I)联合作用时，对阿霉素肾病综合征的治疗效果显著提高，可以 开发成治疗阿霉素肾病综合征的药物。
[0057] 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物（I)，2. -种塞来昔布的药物组合物，其特征在于:包括塞来昔布、如权利要求1所述的化合 物(I)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。3. 根据权利要求2所述的塞来昔布的药物组合物，其特征在于:药学上可以接受的载体 包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体 或润滑剂。4. 根据权利要求2所述的塞来昔布的药物组合物，其特征在于:所述剂型包括片剂、胶 囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、 栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。5. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含以下操作步骤：（a)将山 麦冬粉碎，用80~90%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙 酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步骤(a)中正丁醇取物用大孔树脂除杂，先用30%乙醇洗脱6个柱体积，再用85%乙醇洗脱 12个柱体积，收集85%洗脱液，减压浓缩得85%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中85%乙醇洗 脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为100:1、50:1、25:1和12:1的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1、12:1 和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的 反相硅胶分离，用体积百分浓度为88 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集13~16个柱体积洗脱 液，洗脱液减压浓缩得到化合物(I)。6. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)用85%乙醇热回 流提取，合并提取液。7. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为D101型 大孔吸附树脂。8. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯进行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 权利要求1所述的化合物（I)在制备治疗阿霉素肾病综合征的药物中的应用。10. 权利要求2~4任一所述的塞来昔布的药物组合物在制备治疗阿霉素肾病综合征的 药物中的应用。
【文档编号】C07C35/37GK106045818SQ201610341176
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年5月20日
【发明人】秦勇, 周自桂, 于学珍, 张卫, 乔艳, 王玉梅, 徐成, 王 琦, 陈建芳
【申请人】江苏神龙药业有限公司