鉴定或辅助鉴定具有不同千粒重小麦的方法及其专用引物对的制作方法
【专利摘要】本发明公开了鉴定或辅助鉴定具有不同千粒重小麦的方法及其专用引物对。本发明所提供的引物对，由引物甲和引物乙组成；所述引物甲为如下a1)或a2)：a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；所述引物乙为如下a3)或a4)：a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子。实验证明，采用本发明提供的引物对可鉴定或辅助鉴定具有不同千粒重的小麦，在小麦育种中具有重要的应用价值。
【专利说明】
鉴定或辅助鉴定具有不同千粒重小麦的方法及其专用引物对
技术领域
[0001] 本发明设及生物技术领域，具体设及鉴定或辅助鉴定具有不同千粒重小麦的方法 及其专用引物对。
【背景技术】
[0002] 小麦是当今世界上最主要的粮食类作物，全世界超过了35%的人把小麦作为主 食，在农业类生产W及国民经济中均占有及其重要的地位。我国是世界上小麦栽种面积最 大的国家之一，但是，由于我国一直W来地少人多的现实状况，致使我国也是当今世界上最 大的小麦进口国，平均每年进口小麦总量高达1〇,〇〇〇,〇〇〇吨，因此我国急需提高小麦产量。 小麦产量受单位面积穗数、穗粒数和千粒重=个因素的影响，=者关系的协调是取得小麦 高产的关键。而在小麦产量构成因素中受遗传效应的影响最大是小麦的千粒重，广义遗传 力要高达59%-80%，而小麦巧粒大小相关指标粒长、粒宽是决定千粒重的重要因子。因 此，建立快速、准确W及高通量的鉴定或辅助鉴定小麦千粒重性状的方法，能够缩短小麦育 种所需年限并且选育出高产优质的小麦品种。
[0003] 高分辨率溶解曲线分析技术巧igh Resolution Melting Qirve Analysis，HRM) 是一项应用于检测单核巧酸多态性的分析性新技术，该技术是根据不同碱基序列进行PCR 扩增反应后形成的双链DNA分子的溶解溫度存在差异的运一物理性质，在同一反应容器中 对碱基序列进行高分辨率溶解，利用可与双链DNA分子结合的饱和巧光染料运行HRM程序： 即将PCR扩增产物从低到高W每次不到0. rC逐步升溫(在60°C~95°C范围内），双链DNA分 子在运一过程中达到一定溫度后解链，巧光染料随其解链会脱落，并停止发出巧光信号。W 巧光强度变化为纵坐标，解链溫度为横坐标，得到相应的特征性溶解曲线，再根据特征性溶 解曲线形态变化即可判断双链DNA分子性质的差异。HRM还具有高通量、高灵敏度、特异性 好、重复性好、操作简便和适用范围广等优点。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题是如何鉴定或辅助鉴定具有不同千粒重的小麦。
[0005] 为解决上述技术问题，本发明首先提供了引物对。
[0006] 本发明所提供的引物对，可由引物甲和引物乙组成；
[0007] 所述引物甲可为如下al)或曰2):
[000引 a 1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；
[0009] a2)将序列1经过一个或几个核巧酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相 同功能的DNA分子；
[0010] 所述引物乙可为如下日3)或曰4):
[00川日3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；
[0012] a4)将序列2经过一个或几个核巧酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相 同功能的DNA分子。
[001引所述引物对中，所述引物甲和所述引物乙的摩尔比可化：1。
[0014] 所述引物对的用途为鉴定或辅助鉴定具有不同粒重小麦。所述粒重可为千粒重。
[0015] 所述引物对在制备用于鉴定或辅助鉴定具有不同粒重小麦的试剂盒或鉴定具有 不同粒重的小麦中的应用也属于本发明的保护范围。
[0016] 上述应用中，所述粒重可为千粒重。
[0017] 为解决上述技术问题，本发明还提供了鉴定或辅助鉴定具有不同粒重小麦的试剂 盒。
[0018] 本发明所提供的鉴定或辅助鉴定具有不同粒重小麦的试剂盒，包括所述引物对。
[0019] 上述试剂盒中，所述粒重可为千粒重。
[0020] 所述试剂盒在鉴定具有不同粒重的小麦中的应用也属于本发明的保护范围。
[0021] 上述应用中，所述粒重可为千粒重。
[0022] 为解决上述技术问题，本发明还提供了所述试剂盒的制备方法。
[0023] 本发明所提供的所述试剂盒的制备方法，可为如下（I)或（n):
[0024] (I)所述引物对中各条引物分别单独包装；
[0025] (n)所述引物对中各条引物按照权利要求2所述比例混合在一起。所述引物甲和 所述引物乙的摩尔比具体可为1:1。
[0026] 为解决上述技术问题，本发明还提供了一种鉴定或辅助鉴定具有不同粒重小麦的 方法。
[0027] 本发明所提供的鉴定或辅助鉴定具有不同粒重小麦的方法，可包括如下步骤：
[00%] 1)W待测小麦的基因组DNA为模板，采用所述引物对进行HRM反应，得到样本溶解 曲线；W标准小麦甲的基因组DNA为模板，采用所述引物对进行HRM反应，得到b型溶解曲线； W标准小麦乙的基因组DNA为模板，采用所述引物对进行HRM反应，得至Ija型溶解曲线；
[0029]所述标准小麦甲为京红5号、内麦11、晋麦3号、梁来友白皮小麦、毕红穗、小白麦、 大白皮、小红皮、定兴寨、红粒当年老、春小麦、大红麦、陕西白麦、牛趾甲、麻花板、红金麦、 白齐麦、小口红、兰花麦、带芒红麦、緑鹿冬麦、红麦、红老麦、有芒白釋、红皮冬麦、磐石无 芒、有芒白釋、白秋麦、老麦、中优9507、吕旱328、延安11、农大183、线麦、江西早、红花早、江 东口、大黄皮、崇阳红麦1、早五天、六柱头、赠不知、猪毛元字头、水里站、黄水白、落青、早小 麦、望水白、婪源麦、车铜子、和尚麦、懦麦、芒小麦、立颗寸、泡子麦、麵英5号、安徽3号、浙麦 1号、洋麦、火球、大青芒、新曙光1号、新曙光6号、吉春1016、郑引4号、南大2419、0rofen、水 原86、1'1'；[1111^|11、10￥1'；[]110、教德萨3号、13]1〇1'；[、潮安小麦、赤壳、松蕊麦、深根、抗诱10号、台 中23、晋麦2418、敌诱早、径阳60、石特14、复壮30、丰产3号、百农3217、西农6028、冀麦2号、 内乡5号、郑州6号、咸农39、济南17、小偃6号、陕农7859、矮丰3号、鲁麦1号、莱州953、郑州 741、白芒麦、黄瓜先、半截忙、老来瞎、峻姑脑、红狗豆、白火麦、=月黄、红抢场、蝴子麦、平 原50、白扁穗、白齐麦、白秀子头、有芒扫谷旦、阜阳红、抢场麦、火麦、霉前五、碱麦、立月黄、 小佛手、红和尚头、大口麦、白条鱼、白芒麦、大玉花、府麦、老齐麦、紫賴红、大粒半芒、六月 黄、葛家乡、葛尔红麦、大春白四棱麦、白朗灰麦、扎红、边己春麦-6、白芒小麦、乌江卓、木宗 卓嗔、藏冬4号、一枝麦、大白麦、巧老汉、火里炎、红秀子、白大头、金黄麦、大白麦、白齐头、 白妈昨、老秀头、高原506、宁春4号、金麦4号、蜀万8号、繁6、毕麦26、去麦34、兴义4号、凤麦 11、同家巧小麦、红花麦、白麦子、成都光头、换香果、小S月黄、红须麦、紫皮、白芒麦、鱼餓 麦、洋麦、猪尿麦、扁头光壳麦、长芒石扁头、猪狗麦、滨西红壳洋麦、白冬麦、红春麦、春麦、 无芒春麦、红金包银、喀什白皮、托克逊1号、中国春、郑麦9023或偃展1号；
[0030] 所述标准小麦乙为红皮小麦、火瞭麦、假红麦、小白芒、晋麦8号、丰抗2号、长治 6406、北京8号、原冬822、农大311、农大139、铭贤169、东方红3号、兰溪早小麦、华东6号、苏 麦3号、扬麦158、恩麦4号、鄂麦6号、白油麦、敦化春麦、光头、新克旱9号、克丰3号、克溃4号、 东农 101、赤小麦、Funo、Ka趾日3、农林 10号、钱交麦、Early Premium、Villa Glori、Atlas66、 甘肃96、上林小麦、碧妈1号、碧妈4号、石家庄54、平阳27、泰山1号、济南2号、蝴包、烟农15、 石家庄407、溫麦6号、西山扁穗、妈昨麦、秀芒麦、出山豹、本地黄花麦、墨脱小麦、康定小麦、 日喀则54号、日喀则8号、山麦、红芒麦、甘麦8号、青春28、互助红、定西24、会宁10号、贵农10 号、酱麦、白花麦、汉中白、梭条红麦、红芒子、阳麦、红冬麦、红春麦、新冬2号或喀什1号；
[0031] 2)比较样本溶解曲线、a型溶解曲线和b型溶解曲线，如果样本溶解曲线与a型溶解 曲线一致、待测小麦为B基因型，如果样本溶解曲线与b型溶解曲线一致、待测小麦为A基因 型;然后进行如下dl)或d2)的判断：
[0032] dl)A基因型的待测小麦的粒重大于B基因型的待测小麦；
[0033] d2)A基因型的待测小麦的粒重大于非A基因型的待测小麦。
[0034] 上述方法中，所述粒重为千粒重。
[0035] 上述方法中，所述大于为在统计学上的大于。
[0036] 上述方法中，所述"采用所述引物对进行HRM反应"的HRM反应体系由待测小麦品种 的叶片的基因组DNA、所述引物甲、所述引物乙、Light切cler HRM Master Mix、MgCl2和水 组成;其中Li曲tCycler HRM Master Mix为Roche公司的产品。
[0037] 12.5化的所述HRM反应体系中，待测小麦品种的叶片的基因组DNA为60ng，所述引 物甲的浓度为0.325皿ol/L，所述引物乙的浓度为0.325皿ol/L，MgCl2的浓度为1.5mol/L， LightCycler HRM Master Mix为6.25化。
[0038] 上述方法中，所述"采用所述引物对进行HRM反应，得到样本溶解曲线"的步骤具体 如下：
[0039] (1)制备所述HRM反应体系，然后进行PCR扩增反应；
[0040] (2)取完成步骤(1)的PCR扩增产物，依次进行如下反应:95°C作用30s;降低到50°C 作用30s;逐渐升高溫度到95°C，期间每升高rC收集巧光信号25次;迅速降溫至37°C作用 5s。W巧光强度变化为纵坐标，解链的溫度为横坐标，得到特征性溶解曲线。所述步骤（1) 中，进行PCR扩增反应的仪器可为Roche LightCycler 96。
[0041 ] 所述步骤（1)中，进行PCR扩增反应的PCR程序可为:94°C变性5min;94°C变性30s， 58°C退火29s，72°C延伸6s，45个循环；72°C延伸2min。
[0042] 上述任一所述引物对、上述任一所述试剂盒或上述任一所述方法在小麦育种中的 应用也属于本发明的保护范围。
[0043] 实验证明，采用本发明提供的引物对可鉴定或辅助鉴定具有不同千粒重的小麦， 在小麦育种中具有重要的应用价值。
【附图说明】
[0044] 图1为特征性溶解曲线。
[0045] 图2为特征性溶解曲线。
【具体实施方式】
[0046] 下面结合【具体实施方式】对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐 明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
[0047] 下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
[0048] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0049] W下实施例中的定量试验，均设置=次重复实验，结果取平均值。
[0050] 小麦核屯、种质就是用最小的小麦种质数量和遗传重复，最大程度地代表了整个小 麦种质资源的多样性，而小麦微核屯、种质则是从小麦核屯、种质中进一步选择一个核屯、子 集，也即小麦核屯、种质的核屯、种质，使用更小的种质资源代表了整个种质库的遗传多样性。 我国共有23090份小麦种质资源，针对运些小麦种子资源构建了 1160份的小麦核屯、种质，W 5.0 %的样本量代表了小麦种质资源90.1 %的遗传多样性。进一步从1160份的小麦核屯、种 质中筛选出表1所示的262个种质材料，作为我国的小麦微核屯、种质。262个小麦品种的冬春 性和产地见表1。表1中所示的262个小麦品种均记载与如下文献中：郝晨阳等2008,我国普 通小麦核屯、种质的构建及遗传多样性分析，科学通报，2008,53(8) ,908-915。
[0051] Light切cler HRM Master Mix和Roche Light切cler 96仪器均为Roche公司产 品。
[0052] 实施例1、测定不同小麦品种的性状
[0053] 1、小麦巧粒的获得
[0化4] 2013~2014年，将262个小麦品种的种子分别种植于中国农业科学院试验基地(位 于北京市），获得不同小麦品种的小麦巧粒。
[0055] 2013~2014年，将262个小麦品种的种子分别种植于洛阳农林科学院试验基地(位 于河南省洛阳市），获得不同小麦品种的小麦巧粒。
[0056] 2014~2015年，将262个小麦品种的种子分别种植于西北农林科技大学试验基地 (位于陕西省杨凌示范区），获得不同小麦品种的小麦巧粒。
[0057] 2、测量不同小麦品种的小麦巧粒的平均粒长、平均粒宽和平均千粒重
[0058] A、采用手工测量法测量种植于中国农业科学院试验基地的不同小麦品种的小麦 巧粒的粒长、粒宽和千粒重
[0059] (1)随机取种植于中国农业科学院试验基地的小麦品种的小麦巧粒100粒，计算粒 长和粒宽：
[0060] 粒长:根据长度方向进行紧密排列，记录100粒巧粒的总粒长，取平均值；
[0061] 粒宽:根据宽度方向进行紧密排列，记录100粒巧粒的总粒宽，取平均值。
[0062] 每个小麦品种需重复=次，=次结果取平均值，得到种植于中国农业科学院试验 基地的不同小麦品种的小麦巧粒的粒长和粒宽。
[0063] (2)随机取种植于中国农业科学院试验基地的小麦品种的小麦巧粒200粒，称重并 计算千粒重。
[0064] 每个小麦品种需重复=次，=次结果取平均值，得到种植于中国农业科学院试验 基地的不同小麦品种的小麦巧粒的千粒重。
[0065] B、采用手工测量法测量种植于洛阳农林科学院试验基地的不同小麦品种的小麦 巧粒的粒长、粒宽和千粒重
[0066] 按照步骤A的方法，将中国农业科学院试验基地替换为洛阳农林科学院试验基地， 其它步骤均不变，获得种植于洛阳农林科学院试验基地的不同小麦品种的小麦巧粒的粒 长、粒宽和千粒重。
[0067] C、采用万深SC-G自动考种分析及千粒重仪测量种植于西北农林科技大学试验基 地的不同小麦品种的小麦巧粒的粒长、粒宽和千粒重
[0068] 粒长:随机取种植于西北农林科技大学试验基地的小麦品种的小麦巧粒100粒，采 用万深SC-G自动考种分析及千粒重仪测量粒长，取平均值；
[0069] 粒宽：随机取种植于西北农林科技大学试验基地的小麦品种的小麦巧粒100粒，采 用万深SC-G自动考种分析及千粒重仪测量粒宽，取平均值；
[0070] 千粒重:随机取种植于西北农林科技大学试验基地的小麦品种的小麦巧粒200粒， 采用万深SC-G自动考种分析及千粒重仪称重，并计算千粒重。
[0071] 每个小麦品种需重复=次，=次结果取平均值，获得种植于西北农林科技大学试 验基地的不同小麦品种的小麦巧粒的粒长、粒宽和千粒重。
[0072] D、不同小麦品种的小麦巧粒的平均粒长、平均粒宽和平均千粒重的获得
[0073] (1)将同一小麦品种的种植于中国农业科学院试验基地的小麦巧粒的粒长、种植 于洛阳农林科学院试验基地的小麦巧粒的粒长和种植于西北农林科技大学试验基地的小 麦巧粒的粒长取平均值，得到该小麦品种的平均粒长。
[0074] (2)将同一小麦品种的种植于中国农业科学院试验基地的小麦巧粒的粒宽、种植 于洛阳农林科学院试验基地的小麦巧粒的粒宽和种植于西北农林科技大学试验基地的小 麦巧粒的粒宽取平均值，得到该小麦品种的平均粒宽。
[0075] (3)将同一小麦品种的种植于中国农业科学院试验基地的小麦巧粒的千粒重、种 植于洛阳农林科学院试验基地的小麦巧粒的千粒重和种植于西北农林科技大学试验基地 的小麦巧粒的千粒重取平均值，得到该小麦品种的平均千粒重。
[0076] 不同小麦品种的平均粒长、平均粒宽和平均千粒重的测量结果见表1。
[0077] 表 1
[0084]
[0085] 实施例2、特征性溶解曲线与小麦巧粒性状的关联分析
[0086] 一、引物对的制备
[0087] 由宝生物工程化连)有限公司合成引物甲和引物乙，引物甲的核巧酸序列为:5'- TGTGGTGATGAGTTCATGGTTAA-3 '（序列表中序列1所示），引物乙的核巧酸序列为：5 ' - ACGTCGGCACCCCTCA-3 '（序列表中序列2所示）。引物甲和引物乙的纯化级别均为HPLC。
[008引引物对由引物甲和引物乙组成。
[0089]二、基因分型的方法
[0090] 1、基因组DNA的提取
[0091] 提取待测小麦的叶片的基因组DM。待测小麦为表1中的262个小麦品种。
[0092] 2、制备HRM反应体系
[0093] HRM反应体系（12.扣L)由待测小麦品种的叶片的基因组DNA (6化g)、引物甲、引物 乙、6.2扣L Light切cler HRM Master Mix、MgCl2和水组成；其中引物甲的浓度为0.37扣 mol/L，引物乙的浓度为0.375皿ol/L，MgCl2的浓度为1.5mol/L。
[0094] 3、HRM 反应
[00巧](1)取步骤2制备的反应体系，置于Roche Li曲tCycler 96仪器，进行PCR扩增反 应，PCR程序为:94°C变性5min;94°C变性3〇3,56°(：退火293,72°(：延伸63,45个循环;72°(：延 伸2min。
[0096] (2)完成步骤（1)后，进行如下反应:首先95°C作用30s(目的为与巧光染料结合）； 然后降低到50°C作用30s(目的为使解旋的DNA单链再重新结合为双链结构）；再然后逐渐升 高溫度到95°C(目的为解链），期间每升高rC收集巧光信号25次;最后迅速降溫至37°C作用 5s。W巧光强度变化为纵坐标，解链的溫度为横坐标，得到特征性溶解曲线。采用IBM SPSS Statistics 22软件分析特征性溶解曲线。
[0097] 部分实验结果见图l(a为碧妈4号，b为赤壳)结果表明，待测小麦品种进行HRM反应 获得的特征性溶解曲线分为a型和b型两种。
[0098] 根据HRM反应的特征性溶解曲线结果，得出如下结论：W待测小麦的基因组DNA为 模板，用引物甲和引物乙组成的特异引物对进行HRM反应，得到特征性溶解曲线，之后进行 如下评判:如果所述特征性溶解曲线呈现b型，则所述待测小麦的基因型为A;如果所述特征 性溶解曲线呈现a型，则所述待测小麦的基因型为B。
[0099] 按照上述方法对262个小麦品种的基因型进行分型，实验结果见表1和图2(a为基 因型为B的待测小麦，b为基因型为A的待测小麦）。结果表明，186个小麦品种的基因型为A， 76个小麦品种的基因型为B。
[0100] =、特征性溶解曲线与小麦相关性状的关联分析
[0101] 对基因型A和基因型B两种类型小麦巧粒的千粒重、粒长和粒宽进行统计，结果见 表2。结果表明，基因型A的小麦品种的千粒重显著高于基因型B的小麦品种(P<0.05)，而基 因型A的小麦品种的粒宽和基因型B的小麦品种的粒宽无显著差异，基因型A的小麦品种的 粒长和基因型B的小麦品种的粒宽也无显著差异。
[0102] 表2
[0103]
【主权项】
1. 引物对，由引物甲和引物乙组成； 所述引物甲为如下al)或a2): al)序列表的序列1所示的单链DNA分子； a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功 能的DNA分子； 所述引物乙为如下a3)或a4): a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子； a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功 能的DNA分子。2. 如权利要求1所述的引物对，其特征在于:所述引物对中，所述引物甲和所述引物乙 的摩尔比为1:1。3. 权利要求1或2所述引物对在制备用于鉴定或辅助鉴定具有不同粒重小麦的试剂盒 或鉴定具有不同粒重小麦中的应用。4. 鉴定或辅助鉴定具有不同粒重小麦的试剂盒，包括权利要求1或2所述引物对。5. 权利要求4所述试剂盒在鉴定具有不同粒重小麦中的应用。6. 权利要求4所述试剂盒的制备方法，为如下（I)或（Π ): (I)所述引物对中各条引物分别单独包装； (Π )所述引物对中各条引物按照权利要求2所述比例混合在一起。7. -种鉴定或辅助鉴定具有不同粒重小麦的方法，包括如下步骤： 1)以待测小麦的基因组DNA为模板，采用权利要求1所述引物对进行HRM反应，得到样本 溶解曲线；以标准小麦甲的基因组DNA为模板，采用权利要求1所述引物对进行HRM反应，得 至Ijb型溶解曲线；以标准小麦乙的基因组DNA为模板，采用权利要求1所述引物对进行HRM反 应，得到a型溶解曲线； 所述标准小麦甲为京红5号、内麦11、晋麦3号、梁来友白皮小麦、毕红穗、小白麦、大白 皮、小红皮、定兴寨、红粒当年老、春小麦、大红麦、陕西白麦、牛趾甲、麻花板、红金麦、白齐 麦、小口红、兰花麦、带芒红麦、涿鹿冬麦、红麦、红老麦、有芒白稃、红皮冬麦、磐石无芒、有 芒白稃、白秋麦、老麦、中优9507、吕旱328、延安11、农大183、线麦、江西早、红花早、江东门、 大黄皮、崇阳红麦1、早五天、六柱头、蝴不知、猪毛元字头、水里站、黄水白、落青、早小麦、望 水白、婺源麦、车锎子、和尚麦、懦麦、芒小麦、三颗寸、泡子麦、_英5号、安徽3号、浙麦1号、 洋麦、火球、大青芒、新曙光1号、新曙光6号、吉春1016、郑引4号、南大2419、Orofen、水原86、 Triumph、Lovrin 10、敖德萨3号、Tanori、潮安小麦、赤壳、松蕊麦、深根、抗锈10号、台中23、 晋麦2418、敌锈早、泾阳60、石特14、复壮30、丰产3号、百农3217、西农6028、冀麦2号、内乡5 号、郑州6号、咸农39、济南17、小偃6号、陕农7859、矮丰3号、鲁麦1号、莱州953、郑州741、白 芒麦、黄瓜先、半截忙、老来瞎、蝼蛄腚、红狗豆、白火麦、三月黄、红抢场、蚰子麦、平原50、白 扁穗、白齐麦、白秀子头、有芒扫谷旦、阜阳红、抢场麦、火麦、霉前五、碱麦、三月黄、小佛手、 红和尚头、大口麦、白条鱼、白芒麦、大玉花、府麦、老齐麦、紫秸红、大粒半芒、六月黄、葛家 乡、葛尔红麦、大春白四棱麦、白朗灰麦、扎红、边巴春麦-6、白芒小麦、乌江卓、木宗卓嘎、藏 冬4号、一枝麦、大白麦、杂老汉、火里炎、红秀子、白大头、金黄麦、大白麦、白齐头、白蚂蚱、 老秀头、高原506、宁春4号、金麦4号、蜀万8号、繁6、毕麦26、去麦34、兴义4号、凤麦11、同家 坝小麦、红花麦、白麦子、成都光头、换香果、小三月黄、红须麦、紫皮、白芒麦、鱼鳅麦、洋麦、 猪屎麦、扁头光壳麦、长芒石扁头、猪狗麦、滇西红壳洋麦、白冬麦、红春麦、春麦、无芒春麦、 红金包银、喀什白皮、托克逊1号、中国春、郑麦9023或偃展1号； 所述标准小麦乙为红皮小麦、火燎麦、假红麦、小白芒、晋麦8号、丰抗2号、长治6406、北 京8号、原冬822、农大311、农大139、铭贤169、东方红3号、兰溪早小麦、华东6号、苏麦3号、扬 麦158、恩麦4号、鄂麦6号、白油麦、敦化春麦、光头、新克旱9号、克丰3号、克涝4号、东农101、 赤小麦、Funo、KaBka3、农林 10号、钱交麦、Early Premium、Villa 61〇1'；[、41:1&866、甘肃96、 上林小麦、碧蚂1号、碧蚂4号、石家庄54、平阳27、泰山1号、济南2号、蚰包、烟农15、石家庄 407、温麦6号、西山扁穗、蚂蚱麦、秃芒麦、出山豹、本地黄花麦、墨脱小麦、康定小麦、日喀则 54号、日喀贝IJ8号、山麦、红芒麦、甘麦8号、青春28、互助红、定西24、会宁10号、贵农10号、酱 麦、白花麦、汉中白、梭条红麦、红芒子、阳麦、红冬麦、红春麦、新冬2号或喀什1号； 2)比较样本溶解曲线、a型溶解曲线和b型溶解曲线，如果样本溶解曲线与a型溶解曲线 一致、待测小麦为B基因型，如果样本溶解曲线与b型溶解曲线一致、待测小麦为A基因型;然 后进行如下dl)或d2)的判断： dl )A基因型的待测小麦的粒重大于B基因型的待测小麦； d2)A基因型的待测小麦的粒重大于非A基因型的待测小麦。8.权利要求1或2所述引物对，或，权利要求4所述试剂盒，或，权利要求7所述方法在小 麦育种中的应用。
【文档编号】C12N15/11GK106048074SQ201610694430
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年8月19日
【发明人】高欣, 梁园园, 王中华, 李学军
【申请人】西北农林科技大学