一种从罗汉松种子高效提取分离高纯度川芎嗪的方法
【专利摘要】本发明涉及一种从罗汉松种子高效提取分离高纯度川芎嗪的方法，该方法步骤为取罗汉松种子粗粉，加水浸泡30分钟，用水蒸气蒸馏法加热提取6～9小时，收集馏出液，加入石油醚萃取，取石油醚层减压回收溶剂，浓缩液静置或冷藏后抽滤，干燥，得粗结晶，加入水重结晶，洗涤、干燥即得。采用本发明制备川芎嗪，步骤少，周期短，操作简便，产品高纯度，设备投入少，可大幅度降低生产成本。
【专利说明】
一种从罗汉松种子高效提取分离高纯度川芎嗪的方法
技术领域
[0001]本发明属于中药化学、天然药物化学和医药技术领域，具体涉及一种从罗汉松种子中高效提取分离纯化高纯度j I丨芎嗪的方法。
【背景技术】
[0002]罗汉松实为竹柏科植物土杉PodocarpusmacrophyIIus(Thunb.)D.Don或短叶土杉 Podocarpus macrophy I Ius (Thunb.)D.Don var.maki (Sieb.)Endl.的种子及花托。文献记载，罗汉松实具有补肾益肺，治血虚面色萎黄，心胃痛的功效。罗汉松在广西北海市已有较大规模种植，种植面积达1.5万亩，每年可产出大量的罗汉松实。罗汉松实的花托部分可当成水果直接食用，或制成果酒或保健酒后上市销售。但罗汉松实的种子部分却未能加以综合开发利用，造成了药材资源的浪费。因此，对罗汉松实的种子部分开展精深加工研究，物尽其用，减少资源浪费，提高药材附加值，是当前迫切需要解决的问题。有研究表明，罗汉松种子和花托药用氨基酸含量较高，且富含钙、镁矿质元素;花托醇提物具有降血脂、抗氧化和保肝作用。我们研究发现，罗汉松种子含有重要的药用成分一一川芎嗪，这可能与其具有治心胃痛的功效有关。
[0003]川芎嗪又称四甲基吡嗪，为无色针状结晶，具有特殊异臭。现代药理学研究表明，川；嗪具有抗血小板聚集、增加冠脉血流量、改善微循环及增加脑血流作用。目前，川；嗪可通过以下三种途径获得:一是从川芎药材中提取分离纯化;二是化学合成法制备;三是利用微生物发酵法制备。
[0004]从川芎药材提取分离纯化制备川芎嗪的方法较多。中国发明专利CN200910032515.9和CN201010247117.1公开了川芎嗪的制备方法，这两种方法通过乙醇回流提取、反复萃取、柱层析和重结晶步骤获得纯度大于90%的产品；发明专利CN200810045194.1公开了一种综合提取纯化j I丨芎中川芎嗪、阿魏酸和挥发油的方法，该法通过酸水回流提取、离子交换树脂柱分离和萃取步骤获得纯度80%左右的川芎嗪。以上这些方法都需要柱层析分离纯化，并进行反复萃取，操作过程繁琐，周期长，并且，川芎嗪在川芎药材中的含量极低，因此，产品得率较低。发明专利CN201410572434.9公开了一种超临界CO2流体从川芎中制备川芎嗪的方法，该法虽然技术先进，但需特殊装置加压提取，且仍需要柱层析分离纯化，工业化应用受设备条件限制。化学合成法制备川芎嗪，如中国发明专利CN201410610247.5和CN201410548902.9公开的方法，虽然收率较高，但需要大量有机溶剂并通过调节pH或萃取等步骤获得。生物合成法如中国发明专利CN200910096814.9和CN201010104264.3公开的方法，需用培养基，且微生物培养周期长，条件要求苛刻。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是针对现有技术存在的制备步骤繁琐、生产周期长，产品纯度低或需用大量化学试剂等问题，提供一种新的快速提取分离获得高纯度川芎嗪的方法。该法工艺简便，易于控制，提取周期短，所获产品纯度高，具有更好的工业化优势。
[0006]本发明所述的方法包括如下步骤:
[0007](I)提取:取罗汉松种子，粉碎成10?30目的粗粉，加入药材质量10?20倍量的水，浸泡30分钟，用水蒸气蒸馏法加热提取6?9小时，收集馏出液；
[0008](2)分离纯化:取馏出液，加入石油醚萃取2?3次，每次加入石油醚的体积为馏出液体积的0.5?2倍，合并2?3次萃取的石油醚层，记录初始体积，于30?60°C减压回收石油醚，至回收的石油醚体积大于等于初始体积的95 %时，停止回收，浓缩液室温静置8?24小时或于O?10°C冷藏8?12小时，抽滤，或自然挥干溶剂或30?60 °C干燥，即得纯度大于95%的川芎嗪粗品，粗品用水重结晶，洗涤、干燥即得纯度大于98%的川芎嗪精品。
[0009]上述提取分离方法，其特征在于步骤(2)中所述石油醚的沸程为30?60°C或60?90。。。
[0010]本发明提取分离所得川芎嗪粗品和精品均为无色针状晶体，粗品经气相色谱-串联质谱(GC-MS-MS)测定并进行数据库搜索，结果鉴定出两个化合物，其中主成分为四甲基啦嗪，即川芎嗪，分子式为C8H12N2,CAS号:1124-11-4，相对含量97.27% (见附图1)。川芎嘆精品采用高效液相色谱(HPLC)，以峰面积归一化法测定纯度，结果纯度为99.80% (见附图2)。j 11芎嗪精品经显微熔点仪测定，熔点为82.5?84.0 °C。质谱测定结果显示，j丨丨芎嗪精品质谱图与标准图谱一致(见附图3)。
[0011 ]本发明与现有技术相比具有以下优点:
[0012]1、本发明采用水蒸气蒸馏法直接提取川芎嗪，与乙醇回流提取法和超临界0)2流体萃取法相比，所获得的提取物中川芎嗪相对含量较高，其它杂质成分少，易于分离纯化。
[0013]2、本发明川芎嗪的分离纯化过程不需采用柱色谱进行分离，仅通过简单萃取即可获得高纯度川芎嗪，操作步骤少，周期短，操作简便，设备投入少，可大幅度降低生产成本。
[0014]3、本发明采用石油醚直接对馏出液进行萃取，石油醚对川芎嗪溶解度大，且沸点低，易于回收循环利用，减少能耗，节约溶剂，环境污染小。
【附图说明】
[0015]图1川芎嗪粗品GC-MS-MS测定总离子流图
[0016]图2HPLC峰面积归一化法检测川芎嗪精品纯度色谱图
[0017]图3川芎嗪精品质谱图
【具体实施方式】
[0018]下面将结合具体实施例对本发明做进一步详细说明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施例。
[0019]实施例1
[0020]取罗汉松种子100g，去除杂质，粉碎，过10目筛，投入圆底烧瓶中，加入药材质量10倍量的水，浸泡30分钟，用水蒸气蒸馏法，加热提取6小时，收集馏出液，置分液漏斗中，加入沸程为30?60°C的石油醚萃取2次，每次石油醚用量与馏出液等体积，合并2次萃取的石油醚层，用旋转蒸发仪于30°C减压回收石油醚，至回收的石油醚体积等于初始体积的99%时，停止回收，浓缩液自然挥干溶剂，得j I丨芎嗪结晶，HPLC检测纯度为95.2%,用水重结晶，洗涤、干燥即得川芎嗪精品0.0I g，HPLC检测纯度为98.5 %。
[0021]实施例2
[0022]取罗汉松种子100g，去除杂质，粉碎，过10目筛，投入圆底烧瓶中，加入药材质量15倍量的水，浸泡30分钟，用水蒸气蒸馏法，加热提取8小时，收集馏出液，置分液漏斗中，加入沸程为30?600C的石油醚萃取2次，每次加入石油醚体积为馏出液体积的1.5倍，合并2次萃取的石油醚层，用旋转蒸发仪于40°C减压回收石油醚，至回收的石油醚体积等于初始体积的9 8 %时，停止回收，浓缩液室温静置12小时，抽滤，得川芎嗪结晶，H P L C检测纯度为96.4 %，用水重结晶，洗涤、干燥S卩得j I哼嗪精品0.012g，HPLC检测纯度为99.5 %。
[0023]实施例3
[0024]取罗汉松种子100g，去除杂质，粉碎，过10目筛，投入圆底烧瓶中，加入药材质量20倍量的水，浸泡30分钟，用水蒸气蒸馏法，加热提取9小时，收集馏出液，置分液漏斗中，加入沸程为30?60 0C的石油醚萃取3次，每次加入石油醚体积为馏出液体积的0.5倍，合并3次萃取的石油醚层，用旋转蒸发仪于50°C减压回收石油醚，至回收的石油醚体积等于初始体积的95%时，停止回收，浓缩液40C冷藏8小时，抽滤，得川芎嗪结晶，HPLC检测纯度为96.0% ,用水重结晶，洗涤、干燥即得j丨I芎嗪精品0.015g，HPLC检测纯度为99.0 %。
[0025]实施例4
[0026]取罗汉松种子100g，去除杂质，粉碎，过16目筛，投入圆底烧瓶中，加入药材质量12倍量的水，浸泡30分钟，用水蒸气蒸馏法，加热提取7小时，收集馏出液，置分液漏斗中，加入沸程为30?60°C的石油醚萃取2次，每次加入石油醚体积为馏出液体积的2倍，合并2次萃取的石油醚层，用旋转蒸发仪于60°C减压回收石油醚，至回收的石油醚体积等于初始体积的97 %时，停止回收，浓缩液40 0C干燥，得川芎嗪结晶，HPLC检测纯度为95.0 %，用水重结晶，洗涤、干燥即得川芎嗪精品0.0I g，HPLC检测纯度为98.0 %。
[0027]实施例5
[0028]取罗汉松种子100g，去除杂质，粉碎，过24目筛，投入圆底烧瓶中，加入药材质量18倍量的水，浸泡30分钟，用水蒸气蒸馏法，加热提取9小时，收集馏出液，置分液漏斗中，加入沸程为30?60°C的石油醚萃取2次，每次石油醚用量与馏出液等体积，合并2次萃取的石油醚层，用旋转蒸发仪于45°C减压回收石油醚，至回收的石油醚体积等于初始体积的95%时，停止回收，浓缩液1 0C冷藏12小时，抽滤，得川芎嗪结晶，HPLC检测纯度为95.7 %，用水重结晶，洗涤、干燥即得j丨哼嗪精品0.013g，HPLC检测纯度为99.2 %。
【主权项】
1.一种从罗汉松种子高效提取分离高纯度川芎嗪的方法，其特征在于所述的方法包括下列步骤: (1)提取:取罗汉松种子，粉碎成10?30目的粗粉，加入药材质量10?20倍量的水，浸泡30分钟，用水蒸气蒸馏法加热提取6?9小时，收集馏出液； (2)分离纯化:取馏出液，加入石油醚萃取2?3次，每次加入石油醚的体积为馏出液体积的0.5?2倍，合并2?3次萃取的石油醚层，记录初始体积，于30?60°C减压回收石油醚，至回收的石油醚体积大于等于初始体积的95 %时，停止回收，浓缩液室温静置8?24小时或于O?10 °C冷藏8?12小时，抽滤，或自然挥干溶剂或30?60 °C干燥，即得纯度大于95%的川芎嗪粗品，粗品用水重结晶，洗涤、干燥即得纯度大于98%的川芎嗪精品。2.根据权利要求1所述的提取分离高纯度川芎嗪的方法，其特征在于步骤(2)中所述石油醚的沸程为30?60°C或60?90°C。
【文档编号】C07D241/12GK106083744SQ201610460262
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月23日
【发明人】黄增琼, 曾凡艳
【申请人】黄增琼