醋酸去氧皮质酮的药物组合物及其在生物医药中的应用

醋酸去氧皮质酮的药物组合物及其在生物医药中的应用
【专利摘要】本发明公开了醋酸去氧皮质酮的药物组合物及其在生物医药中的应用，本发明提供的醋酸去氧皮质酮的药物组合物中含有醋酸去氧皮质酮和一种结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)，醋酸去氧皮质酮、化合物(Ⅰ)单独作用时，可降低模型大鼠血清TBIL含量，具有退黄作用；醋酸去氧皮质酮和化合物(Ⅰ)联合作用时，退黄作用进一步提高，可以开发成治疗黄疸的药物，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
醋酸去氧皮质酬的药物组合物及其在生物医药中的应用
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，设及醋酸去氧皮质酬的新用途，具体设及醋酸去氧皮 质酬的药物组合物及其在生物医药中的应用。
【背景技术】
[0002] 醋酸去氧皮质酬用于原发性肾上腺皮质功能减退症的替代治疗，属于内泌系统用 药。
[0003] 迄今为止，尚未见醋酸去氧皮质酬及其药物组合物与黄痘的相关性报道。

【发明内容】

[0004] 本发明的目的在于提供一种醋酸去氧皮质酬的药物组合物，该药物组合物中含有 醋酸去氧皮质酬和一种结构新颖的天然产物，醋酸去氧皮质酬和该天然产物可W协同治疗 黄痘。
[0005] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得W实现的：
[0006] -种具有下述结构式的化合物(I)，
[0007]
[000引一种醋酸去氧皮质酬的药物组合物，包括醋酸去氧皮质酬、如权利要求1所述的化 合物(I)和药学上可W接受的载体，制备成需要的剂型。
[0009] 进一步地，药学上可W接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、 崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。
[0010] 进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、 膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
[0011] 上述化合物（I)的制备方法，包含W下操作步骤：（a)将连翅粉碎，用85~95%乙醇 热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋和水饱和的正下醇萃取， 分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b)步骤(a)中正下醇萃取物用 大孔树脂除杂，先用8%乙醇洗脱10个柱体积，再用70%乙醇洗脱12个柱体积，收集70%洗 脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（C)步骤(b)中70%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分 离，依次用体积比为40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步 骤(C)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1、5:1和2:1的二氯甲烧-甲醇梯 度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百 分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化 合物(I)。
[0012] 进一步地，化合物(I)的制备方法中，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0013] 上述化合物(I)在制备治疗黄痘的药物中的应用。
[0014] 上述醋酸去氧皮质酬的药物组合物在制备治疗黄痘的药物中的应用。
[0015] 本发明的优点:本发明提供的醋酸去氧皮质酬的药物组合物中含有醋酸去氧皮质 酬和一种结构新颖的天然产物，醋酸去氧皮质酬、化合物（I)单独作用时，可降低模型大鼠 血清TBIL含量，具有退黄作用;醋酸去氧皮质酬和化合物（I)联合作用时，退黄作用进一步 提高，可W开发成治疗黄痘的药物。
【具体实施方式】
[0016] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明保护范 围。
[0017] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0018] 试剂来源：乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲烧为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0019]分离方法：（a)将连翅（2kg)粉碎，用90%乙醇热回流提取（20LX3次），合并提取 液，浓缩至无醇味（化），依次用石油酸(化X3次）、乙酸乙醋（化X3次）和水饱和的正下醇 (化X3次）萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b)步骤(a)中 正下醇萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用8%乙醇洗脱10个柱体积，再用70%乙醇洗脱12 个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（C)步骤(b)中70%乙醇洗脱 浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为40:1 (8个柱体积）、20:1 (8个柱体积）、10:1 (8个柱 体积)和5:1(10个柱体积）的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(C)中组分4用 正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1(8个柱体积）、5:1(10个柱体积)和2:1(5个柱体 积)的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反 相硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到化合物(IKHPLC归一化纯度大于98% )。
[0020] 结构确证:HR-ESI-MS显示[Μ+Η]+为m/z 293.U45,结合核磁特征可得分子式为 Ci6出日0日，不饱和度为7。核磁共振氨谱数据δκ(卵m，CDC13，500MHz):H-2(3.14，d，J = 2.7Hz)， H-3(3.27，d，J = 2.7Hz)，H-5(2.34，d，J = 7.9Hz)，H-6(5.70，dd，J = 7.9,4.6Hz)，H-8口 (2.12，m)，H-80(2.31，m)，H-9a(1.49，dt，J = 3.2，13.2Hz)，H-W(1.62，ddd，J=13.2,4.2， 2.7Hz)，H-13(6.29，d，J = 3.3Hz)，H-13C.76，d，J = 3.3Hz)，H-14(1.02，s)，H-15(1.47，s)， 12-0Me(3.77，s);核磁共振碳谱数据Sc(卵m，CDCl3,125MHz) :211.4(C，1-C)，45.5(CH，2-C)， 62.9(CH，3-C)，69.5(C，4-C)，53.7(CH，5-C)，122.6(CH，6-C)，138.4(C，7-C)，20.3(C出，8- C)，33.5(CH2,9-C)，34.3(C，10-C)，144.6(C，11-C)，167.3(C，12-C)，124.9(C出，13-C),19.2 (CH3，14-C)，21.6 (CH3，15-C)，52.7 ( CH3，12-OMe)。Uc-NMR、DEPT和服QC谱中显示有 16个碳信 号，包括Ξ个甲基（一个连氧碳），Ξ个亚甲基（一个締控碳），四个次甲基(两个连氧碳和一 个締控碳），W及六个季碳(两个締控碳，两个幾基碳和一个连氧季碳）。W上功能结构再结 合不饱和数表明该化合物为Ξ环结构。iH-NM时普结合HSQ幻普显示Ξ个甲基质子信号δΗ 1.02 (3H，s)、1.47(3H，s)与3.77(3H，s)，一对端締控质子信号δH6.29αH，d，J = 3.3Hz)与5.76 (lH，d，J = 3.3Ηζ)，两个连氧次甲基质子信号 δκ 3.14( lH，d，J = 2.7Hz)、3.27(lH，d，J = 2.7化），一个締控质子信号6(15.70(1山(1(1，1 = 7.9,4.6化）。醒財普数据6113.77(3山3)与6。 52.7可知该化合物中存在甲氧基，丽8村普中016与(：-12的相关信号表明了甲氧基连接在(：- 12 位。此外，根据醒 R 谱数据 δκ 3.14(lH，d，J = 2.7Hz)、3.27(lH，d，J = 2.7Hz)与 Sc 45.5、 62.9可知该化合物中存在个环氧结构。通过lH-lHCOSY谱中H-2/H-3，H-5/H-6与H-8/H-9相 关信号，W及HMBC谱中显示的H-2与C-1、C-3和C-4，H-3与C-2、C-3和C-15，H-5与C-4、C-巧口 C-10，H-6 与 C-5、C-7、C-8 和 C-10，H-13 与 C-7、C-11和 C-12，H-14 与 C-10 相关信号，可 W构建 该化合物的连接方式，并且上述波谱数据表明该化合物为按叶烧型倍半祗。该化合物中的 C-2、C-3、C-4、C-5和C-10为手性碳，通过NOESY试验与H-H偶合常数确认了相对构型。NOESY 谱中护2/护14、护3/护14、护3/护15、护地/护13、护地/护14^及护14/护15的相关信号表明 该化合物〇2、03、04、(：-5和(：-10构型为21?、31?、45、55和101?。综合氨谱、碳谱、丽8村普和 NOESY谱，W及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如下所示，立体构型进一 步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致。
[0021 ]该化合物化学式及碳原子编号如下：
[0022]
[0023] 实施例2:药理作用
[0024] 本实施例使用一次性灌胃异硫氯酸-1-糞醋(ANIT)复制大鼠黄痘模型，测定药物 对黄痘模型大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和总胆红素 (TBIL)含量的影响，观察药物对肝脏的保护作用。
[002引1、材料与方法
[0026] 1.1 动物
[0027] 清洁级SD大鼠，罕(:^有，体质量260~300g，购自昆明医学院实验动物中屯、。
[002引1.2试剂与样品
[0029] 醋酸去氧皮质酬购自中国药品生物制品检定所。化合物（I)自制，制备方法见实施 例1。联苯双醋滴丸(浙江医药股份有限公司新昌制药厂，规格1.5mg/粒）；异硫氯酸-1-糞醋 (ANIT，华北地区特种化学试剂开发中屯、）；丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶 (AST)和总胆红素(TBIL)测试盒均购自南京建成生物工程研究所。
[0030] 1.3 仪器
[0031] 721型分光光度计（上海分析仪器厂）；RM 6240BD型多道生理信号采集处理系统 (北京天创尚邦仪器设备有限公司）。
[0032] 1.4大鼠分组及模型制备
[0033] 60只SD大鼠（罕半）随机均分为6组，即正常对照组、模型对照组、阳性对照组 (联苯双醋O.lOg/kg)和醋酸去氧皮质酬组(80mg · kg^)、化合物（I)组(80mg · kg^)、醋酸 去氧皮质酬与化合物（I)组合物组【40mg · kg^醋酸去氧皮质酬+40mg · kg^化合物（I)】cig 给药，每天1次，连续lOd。正常对照组和模型对照组分别给予生理盐水，于给药第8天后化， 正常对照组大鼠 ig等量色拉油，其余各组大鼠均一次性ig ANIT(2g溶于100ml色拉油中） lOOmg/kgW复制黄痘模型。
[0034] 1.5大鼠血清生化指标测定实验
[0(X3日]于末次给药后化大鼠摘眼球取血2ml，W离屯、半径为8cm、3000;r/min离屯、15min分 离血清，用分光光度计检测大鼠血清生化指标ALT、AST和TBIL。
[0036] 1.6统计学方法
[0037] 采用SPSS13.0统计软件包进行统计分析，实验所得数据用T±s表示，采用完全随 机设计的单因素方差分析，多个样本均数间的两两比较采用q检验。P<〇.05为差异有统计 学意义。
[0038] 2、实验结果
[0039] 2.1对黄痘模型大鼠血清生化指标的影响
[0040] 与正常对照组比，模型对照组大鼠 TBIL、ALT、AST水平显著升高(P<0.01)，说明造 模成功。与模型对照组比，阳性对照组大鼠 TBIL、ALT、AST水平显著降低(P<0.01);与模型 对照组比，醋酸去氧皮质酬组、化合物（I)组大鼠 TBIL、ALT、AST水平降低(P<0.05);与模型 对照组相比，醋酸去氧皮质酬与化合物（I)组合物组大鼠 TBIL、ALT、AST水平显著降低(P< 0.01)。结果见表1。
[0041 ] 表1对黄痘模型大鼠血清生化指标的影响（V ±s, n= 10)
[0042]
[0043] 肝脏分泌胆汁后储存于胆囊中，然后经胆总管流入十二指肠，由胆总管中收集胆 汁可直观反映胆汁的分泌与排放情况。胆汁的分泌与排放情况是肝脏功能正常与否的反 映，胆汁的正常流动有利于胆道系统内的炎症产物和小颗粒结石等堵塞物顺利流出，有利 于对胆道进行冲刷，使胆道系统保持杨通，并且有利于消除胆汁渺积变质而引起的对胆囊 组织的持续刺激。各种因素引起的胆汁滞留必定会使胆囊组织在化学刺激下遭受损伤。
[0044] 现代医学认为，胆囊炎的发生与胆汁成分改变和胆道动力障碍有关，使胆囊壁增 厚、肌肉纤维萎缩，故胆囊的收缩功能减退。该疾病的治疗难点是胆囊壁的不良重构而引起 胆囊收缩功能的丧失，单纯应用西药抗感染很难达到恢复胆囊收缩功能的目的。胆汁在胆 道系统内的储存、排出有赖于胆囊和胆道口括约肌的协调运动。胆囊收缩功能下降或胆汁 浓聚，不利于胆汁的排泄，从而加剧胆囊炎的急性发作。
[0045] 如果肝细胞受到损伤，胆红素就可W直接进入血液而导致血液中的胆红素含量升 高，并沉积在眼球和皮肤等部位，引起黄痘，因此血浆中的胆红素水平可W直接反映肝脏的 健康状况。ANIT诱发大鼠黄痘的生化指标和病理形态学改变，类似于人类肝内胆汁渺积病 变。在大鼠一次性ig ANIT 4化时血清TBIL达高峰，7化后开始下降。当肝细胞发生病变，肝 细胞肿胀，肝小胆管管腔闭塞，排泄胆汁受阻，则血中胆红素升高，就会发生肝细胞性黄痘。
[0046] 上述结果表明，醋酸去氧皮质酬、化合物（I)单独作用时，可降低模型大鼠血清 TBIL含量，具有退黄作用;醋酸去氧皮质酬和化合物(I)联合作用时，退黄作用进一步提高， 可W开发成治疗黄痘的药物。
[0047] 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可W对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物（I)，2. -种醋酸去氧皮质酬的药物组合物，其特征在于:包括醋酸去氧皮质酬、如权利要求 1所述的化合物(I)和药学上可W接受的载体，制备成需要的剂型。3. 根据权利要求2所述的醋酸去氧皮质酬的药物组合物，其特征在于:药学上可W接受 的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸 附载体或润滑剂。4. 根据权利要求2所述的醋酸去氧皮质酬的药物组合物，其特征在于:所述剂型包括片 剂、胶囊剂、日服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注 射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。5. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含W下操作步骤：（a)将连 翅粉碎，用85~95%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋 和水饱和的正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b)步 骤(a)中正下醇萃取物用大孔树脂除杂，先用8%乙醇洗脱10个柱体积，再用70%乙醇洗脱 12个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（C)步骤(b)中70%乙醇洗 脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗 脱得到4个组分；（d)步骤k)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1、5:1和2: 1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相 硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱体积洗脱液，洗 脱液减压浓缩得到化合物(I)。6. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为AB-8型 大孔吸附树脂。7. 权利要求1所述的化合物（I)在制备治疗黄痘的药物中的应用。8. 权利要求2~4任一所述的醋酸去氧皮质酬的药物组合物在制备治疗黄痘的药物中 的应用。
【文档编号】A61P1/16GK106083767SQ201610380361
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年5月31日
【发明人】王昌荣
【申请人】王昌荣