一种洛美沙星半抗原制备方法及其应用

一种洛美沙星半抗原制备方法及其应用
【专利摘要】本发明公开了一种洛美沙星半抗原和相应的人工抗原，同时本发明也公开了所述洛美沙星半抗原和相应的人工抗原的制备方法及其应用。本发明提供的洛美沙星半抗原是式1所示产物，用式1所示产物与载体蛋白连接可以得到洛美沙星抗原。所述洛美沙星抗原可应用于制备洛美沙星特异性抗体。本发明制备方法简便可行、成本较低，半抗原产率较高。本发明的洛美沙星人工抗原，通过免疫动物可产生针对洛美沙星的特异性抗体，可用于制备检测洛美沙星残留的酶联免疫检测试剂盒，具有简单、快速、处理样品量大、灵敏度高、特异性强等诸多优点。
【专利说明】
-种洛美沙星半抗原制备方法及其应用
技术领域
[0001] 本发明属于食品安全检测技术领域，具体设及一种洛美沙星半抗原、抗原制备方 法及其应用。
【背景技术】
[0002] 洛美沙星（lomefloxacin，LMLX)属二氣哇诺酬类，为第Ξ代哇诺酬类抗菌药、抗菌 谱广，1985年首先由日本北陆制药公司和盐野义制药公司生产，我国湖北宜昌制药厂和南 京第二制药厂的产品于1993年上市，其化学名称为1-乙基-6,8-二氣-7-(3-甲基-1-赃嗦)- 4-氧代-3-哇嘟簇酸，分子量387.81。体外抗菌作用与诺氣沙星相似，较环丙沙星略差，但其 体内抗菌活性，包括对大肠杆菌、肺炎杆菌、绿脈杆菌和金葡菌的作用均明显优于诺氣沙 星。临床上用于敏感菌所致的呼吸道、尿道感染。该品对链球菌、肺炎链球菌、洋葱假单胞 菌、支原体和厌氧菌均无效。
[0003] 洛美沙星副作用的发生率3.45%，主要为皮疹、暧气、胃不适、软便、腹泻、目眩、摇 晃等;洛美沙星药物的残留除其本身的毒副作用对人体造成直接危害外，更为严重的是人 类长期食用含较低浓度洛美沙星药物的动物源性食品，容易诱导人类致病菌产生耐药性， 从而影响该类药物的临床疗效。
[0004] 国内外现已开发出检测洛美沙星的酶联免疫试剂盒，但是现在国内生产的试剂盒 在准确性、灵敏度、特异性等方面还不能完全达到检测的要求。本发明公开的洛美沙星半抗 原、抗原为进一步研制洛美沙星抗体及洛美沙星酶联免疫试剂盒提供了原料。

【发明内容】

[0005] 本发明的目的是提供一种洛美沙星半抗原、抗原制备方法及其应用。
[0006] 本发明提供的洛美沙星半抗原，是式1所示化合物：
[0007] 本发明还公开了式1所示产物的制备方法，包括如下步骤： 50ml圆底烧瓶中加入氯化亚讽10ml，20-24°C磁力揽拌下分批加入洛美沙星原料药 1100.3mg，50-60°C磁力揽拌3-4小时后50-55°C加压浓缩，残留物中加入10ml THF溶解，得 洛美沙星酷氯中间体；50ml圆底烧瓶中加入4-氨基下酸645.8mg，THF 20ml，Ξ乙胺 1266.5mg，20-24°C磁力揽拌15-30min后滴加上步洛美沙星酷氯中间体THF溶液10ml，20-24 °C磁力揽拌3-4小时后35-40°C减压浓缩，残留物中加入30ml水，1M盐酸调PH到6.5-7，析出 类白色固体，过滤，滤饼用10ml水洗，收集滤饼50°C鼓风干燥5-6小时得到957 mg洛美沙星 4-氨基下酸半抗原。
[0008] 本发明提供的洛美沙星抗原，是将式1所示产物和载体蛋白偶联得到的偶联物。
[0009] 本发明还保护所述洛美沙星抗原的制备方法，包括如下步骤： (1) 将19.5mg洛美沙星半抗原用1.5ml DMF溶解，200巧m揽拌lOmin，加入邸C 21.5mg溶 解后再加入畑S 13mg，室溫揽拌巧00巧m)活化2-化； (2) 称取BSA 50mg溶于3.5ml 0.1M碳酸氨钢溶液中，200巧m揽拌lOmin，使其充分溶解， 将步骤（1)反应液于<4°C冰浴1000巧m条件下揽拌，逐滴加入到BSA溶液中，于5(Κ)巧m揽拌反 应2地； (3) 将反应产物装入蒸馈水冲洗干净透析袋，1L 0.01M PH7.2 PBS，4°C 10化pm揽拌， 透析3d，每天换液3次，共计换液9次，将透析产物5000rpm离屯、6min，1.5ml/管分装，将抗原 编号，-20°C保存备用。
[0010] 常用载体蛋白均可采用，如牛血清白蛋白（BSA)，卵清蛋白（OVA)，人血清白蛋白 (HSA)，鼠血清白蛋白（MSA)，甲状腺蛋白（TG)或血蓝蛋白化LH)等。
[0011] 所述洛美沙星抗原可W作为免疫原免疫动物制备洛美沙星特异性抗体，也可W作 为包被原制备酶标板。
[0012] 所述抗体具体可为单克隆抗体。
[0013] 式1所示产物、所述洛美沙星抗原、所述抗体均可应用于检测洛美沙星。
[0014] 本发明还公布了应用洛美沙星抗原和洛美沙星单克隆抗体制备得到的酶联免疫 试剂盒。
[0015] 所述酶联免疫检测试剂盒，是由包被有洛美沙星抗原的酶标板、酶标抗体工作液、 洛美沙星系列标准品、底物显色液、终止液、浓缩复溶液、浓缩洗涂液。
[0016] 本发明依靠免疫学、免疫化学基本原理和残留分析技术手段，设计、合成小分子目 标分析物半抗原，并与载体蛋白偶联，制备有效人工抗原。本发明制备方法简便可行、成本 较低，半抗原产率较高。本发明的洛美沙星人工抗原，通过免疫动物可产生了针对洛美沙星 的特异性抗体，用于快速检测食品中的洛美沙星残留。
【附图说明】
[0017] 图1为洛美沙星半抗原的合成路线图。
[0018] 图2为洛美沙星半抗原的质谱检测结果。
[0019] 图3为洛美沙星酶联免疫检测试剂盒标准曲线。
【具体实施方式】
[0020] W下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验 方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自 常规生化试剂商店购买得到的。
[0021] 实施例1、洛美沙星半抗原的制备 一、洛美沙星半抗原的制备 50ml圆底烧瓶中加入氯化亚讽10ml，20-24°C磁力揽拌下分批加入洛美沙星原料药 1100.3mg，50-60°C磁力揽拌3-4小时后50-55°C加压浓缩，残留物中加入10ml THF溶解，得 洛美沙星酷氯中间体；50ml圆底烧瓶中加入4-氨基下酸645.8mg，THF 20ml，Ξ乙胺 1266.5mg，20-24°C磁力揽拌15-30min后滴加上步洛美沙星酷氯中间体THF溶液10ml，20-24 °C磁力揽拌3-4小时后35-40°C减压浓缩，残留物中加入30ml水，1M盐酸调PH到6.5-7，析出 类白色固体，过滤，滤饼用10ml水洗，收集滤饼50°C鼓风干燥5-6小时得到957 mg洛美沙星 4-氨基下酸半抗原。
[0022] 反应方程式如下：
二、洛美沙星半抗原的鉴定 对所得产品进行质谱鉴定，ES+: M+l=437.43 (图2)。
[0023] 结果显示其化学结构式如式1所示(MW=436)，即为洛美沙星半抗原。
[0024]
[0025] 实施例2、洛美沙星人工抗原的制备和鉴定 一、洛美沙星免疫抗原的合成 1、将19.5mg洛美沙星半抗原用1.5ml DMF溶解，200巧m揽拌lOmin，加入邸C 21.5mg溶 解后再加入畑S 13mg，室溫揽拌巧00巧m)活化2-化。
[0026] 2、称取BSA 50mg溶于3.5ml 0.1M碳酸氨钢溶液中，200巧m揽拌lOmin，使其充分溶 解，将步骤1反应液于<4°C冰浴lOOOrpm条件下揽拌，逐滴加入到BSA溶液中，于50化pm揽拌 反应24h;
[0027] 3、将反应产物装入蒸馈水冲洗干净透析袋（10cm)，lL0.01M PBSax，pH7.2)4°C 揽拌（lOOrpm)透析3d，每天换液3次(早中晚各一次），共计换液9次，将透析产物5000rpm离 屯、6min，1.5ml/管分装，将抗原编号，-20°C保存备用。
[0027]二、洛美沙星包被抗原的合成 1、将19.5mg洛美沙星半抗原用1.5ml DMF溶解，200巧m揽拌lOmin，加入邸C 21.5mg溶 解后再加入畑S 13mg，室溫揽拌巧00巧m)活化2-化。
[002引 2、称取OVA 33.6mg溶于3.5ml 0.1M碳酸氨钢溶液中，200巧m揽拌lOmin，使其充分 溶解，将步骤1反应液于<4°C冰浴1000巧m条件下揽拌，逐滴加入到OVA溶液中，于50化pm揽 拌反应24h; 3、将反应产物装入蒸馈水冲洗干净透析袋（10cm)，1L0.01M PBS( 1 X，pH7.2)4°C揽拌 (lOOrpm)透析3d，每天换液3次（早中晚各一次），共计换液9次，将透析产物5000rpm离屯、 6min，1.5ml/管分装，将抗原编号，-20°C保存备用。
[0029]实施例3、酶标单抗的制备和特异性鉴定 一、洛美沙星单抗的制备 1、用上述制备出的免疫原按l(K)yg/只，W生理盐水溶解免疫原与弗氏完全佐剂等体积 混匀，颈背部皮下注射免疫6~8周龄Ba化/c雌鼠，初次免疫后第7、14、28天W免疫原与弗氏 不完全佐剂等体积混匀，各追加免疫一次，融合前3天W免疫复合物l(K)yg/只，不加弗氏佐 剂再追加免疫一次。
[0030] 2、按常规方法进行，取免疫小鼠的脾细胞与处于对数生长期的小鼠骨髓瘤细胞 (SP2/0)混合，然后在45 s内缓慢加入预热的融合剂(PEG4000)进行融合，用HAT培养基悬浮 均匀，再加入适量的饲养细胞，培养于96孔培养板，于37 °C，5 % C〇2培养箱中培养，5天后用 HT培养基半换液，9天时候进行全换液。
[0031] 3、细胞融合后，待细胞长到培养孔面积的1/4时，采用分步筛选法筛选杂交瘤细 胞。初选采用间接化ISA方法，W包被抗原(预先用方阵法常规滴定其最佳包被浓度和阳性 血清稀释度)包被酶标板，加入被测孔培养上清，解育，清洗后加入羊抗鼠 IgG-HRP和IgM- HRP，Oro进行显色反应。筛选出的阳性孔再用间接竞争化ISA方法筛选，先将细胞上清与100 yg/mL的洛美沙星等体积混合，37°C水浴作用30min，再加入到包被好的酶标板中。同时用 PBS取代洛美沙星作对照，其余步骤同上。若经洛美沙星阻断后的0〇45〇皿值下降到对照孔的 50% W下，则判为阳性，经2~3次检测都为阳性的孔，立即用有限稀释法进行亚克隆化。
[0032] 4、将2~3次亚克隆建株后的杂交瘤细胞扩大培养，收集上清液用间接化ISA测定效 价，冻存;并取8~10周龄Ba化/c小鼠腹腔注射液体石蜡0.5mL/只，7~10日后腹腔注射杂交瘤 细胞1~2Xl(yV只，7~10日后抽取小鼠腹水，离屯、取上清，测定效价，并冻存备用。
[0033] 二、酶标抗体的制备 (1) 称取辣根过氧化物酶（HRP)2 mg溶解于0.5 mL水中，加入0.5 mL 0.06 mol/L NaI〇4溶液，4°C避光作用30 min; (2) 加入160 mmol/L的乙二醇0.5血，室溫作用30 min; (3) 加入步骤一制备的洛美沙星单抗2 mg，混匀后装入处理过的透析袋中，置1000 mL 的0.05 mmo 1/L碳酸钢缓冲液中透析，4°C过夜； (4) 透析液吸至10血的离屯、管中，加0.25mL 5g/L的NaBH4溶液，混匀后置4°C2 h; 巧)加入等体积的饱和硫酸锭溶液，4°C作用30 min后4°C下3000 r/min离屯。5 min,弃 上清； (6) 将沉淀溶于1.5 mL0.02 mol/L pH 7.4的PBS中，吸入透析袋内，在0.02mol/L pH 7.4 PBS透析，4°C过夜（中途更换PBS 3次）； (7) 将透析袋中液体吸至微量离屯、管中，4°C下1000化/min离屯、30min，将上清液吸出， 加等量甘油，混匀，-20°C保存备用。
[0034] Ξ、酶标洛美沙星抗体效价的测定 洛美沙星标准品购自Sigma公司。
[0035] 用方阵滴定法确定洛美沙星包被抗原和步骤一制备的单抗的工作浓度，洛美沙星 包被抗原的工作浓度为1.化g/mL，单克隆抗体的工作浓度为1:50000。
[0036] 用不同浓度的洛美沙星标准品溶液做实验溶液，其浓度如下：0、0.6、1.8、5.4、 16.2、48.化g/L。采用8组平行试验(n=8)。间接竞争性化ISA方法： (1)用上述工作浓度的洛美沙星抗原包被酶标板，将洛美沙星标准品实验溶液与酶标 抗体溶液同时加入酶标板微孔中，再在每孔中加入50化抗体工作液，同时设置空白孔(将 添加的抗体溶液换成高纯水，其它一致)和阴性对照孔(将标准品实验溶液用PBS溶液代替， 其它一致），25°C避光环境中反应30min; (2 )倒出孔内液体，用洗涂液洗涂3~5次，将酶标板倒置在吸水纸上拍干； (3 )加入底物显色溶液到酶标板微孔中，25 °C避光环境中反应15min; (4)加入终止液，轻轻振荡混匀，用酶标仪在波长450nm处测定0D值。
[0037] W0D值为纵坐标，W洛美沙星实验溶液浓度的loglO值为横坐标，绘制半对数标准 曲线图。标准曲线具有完整的反S形状，并具有上平台和下平台，标准曲线的平行测定次数8 次，实验重复性良好，相对标准偏差(变异系数)均在1 〇%W内。
[0038] 根据标准曲线得出半数抑制量(IC50)，确定检测灵敏度。
[0039] 抑制率用W下式计算： 式中：ODmax:为不加标准品时的吸光值，ODx为标准品X时的吸光值，ODmin为空白对照 孔的吸光值。
[0040] 由上述公式计算得洛美沙星抗体在缓冲液中的半数抑制量(IC50)为1.8 yg/L。 [0041 ]实施例4、检测洛美沙星的酶联免疫试剂盒及其制备 一、酶联免疫试剂盒由下述物质组成： (1)包被洛美沙星抗原的酶标板； (2 )酶标洛美沙星抗体工作液:实施例3中所述酶标抗体溶液； (3) 洛美沙星标准品:洛美沙星标准品溶液浓度分别为0、0.6、1.8、5.4、16.2、48.化g/ L； (4) 底物显色液：由A液和B液组成，A液为2%过氧化脈的水溶液，B液为1%四甲基联苯胺 (TMB)的水溶液； (5 )终止液:0.2M硫酸水溶液； (6) 浓缩洗涂液:每1升所述洗涂液是按照如下方法配制得到的：将lOmL吐溫-20、5g叠 氮化钢和990mL憐酸盐缓冲液混合，得到所述洗涂液;所述憐酸盐缓冲液的浓度为0.01M pH 值为7.4; (7) 浓缩复溶液:0.04mol/L的憐酸盐缓冲液。
[0042] 二、包被有洛美沙星抗原的酶标板及其制备 包被洛美沙星抗原的聚苯乙締酶标板:用0.05M的碳酸盐溶液将抗原稀释至1.化g/mL， 包被96孔聚苯乙締酶标板，每孔10化L，37 °C溫育化，倾去包被液，用洗涂液洗涂3次，每次 10s，拍干，然后在每孔中加入15化L封闭液，37°C溫育化，倾去孔内液体，干燥后用侣膜真空 密封保存。
[0043] 包被缓冲液:pH9.6，0.05mol/L的碳酸钢缓冲液； 封闭液:每1升封闭液按照如下方法配制：将5mL马血清、Ig叠氮化钢、30g酪蛋白混合， 用憐酸盐缓冲液溶解并定容至lOOOmL，得到封闭液;其中，憐酸盐缓冲液的浓度为0.02M，抑 值为7.2。
[0044] Ξ、试剂盒检测方法 (一)样品前处理 (1)鸡肉、鸭肉 a)准确称取1±〇.01 g新鲜样品于50 mL离屯、管中；b)鸡肉样本:加入4 mL鸡肉样 品提取液；鸭肉样本:加入4 mL鸭肉样品提取液，满动2 min; C) 4000 g离屯、10 min;d) 取500 mL上清液于屯、的离屯、管中；e)加入500 mL样品稀释液，充分满动10s;f)取50 mL上 清液进行检测。
[0045] (2)纯牛奶 a)将纯牛奶样品充分平衡至室溫(25±2°C)，混匀;b)取50 mL纯牛奶样品于离屯、管 中，加入450 mL样品稀释液，充分满动20 s;c)取50 mL进行检测。
[0046] (3)牛肉、猪肉、猪肝、鸡肝 a)称取1±0.01 g均质后的样品于离屯、管中；b)加入0.5 mL样品稀释液，充分满动 2〇3;(3)再加入4.5血乙腊，立即满动至组织完全分散;(1)室溫(25±2°(：)下，摇床300巧111 振摇20 min;e) 4000 gW上，离屯、10 min;f)取1 mL上清液于新的离屯、管中；g) 50-60°C 水浴中，氮气吹干;h)加入2 mL正己烧，充分满动20 s，再加入1 mL样品稀释液，低速满动 10 s;i) 4000 gW上，离屯、5 min,完全弃去上层正己烧及中间层杂质；j)猪肉样品：直接 取50 mL进行检测；牛肉、猪肝、鸡肝样品：取100 mL与100化样品稀释液，充分满动20 S后， 取50 mL进行检测。
[0047] (二)用试剂盒检测 1、 标准曲线的制作 向包被有洛美沙星抗原的酶标板微孔中加入洛美沙星标准品溶液50化，然后加入酶标 二抗工作液50化/孔，再在每孔中加入50化抗体工作液，轻轻振荡混合均匀，用盖板膜盖 板后置25°C避光环境中反应40 min。小屯、掲开盖板膜，将孔内液体甩干，加入洗涂工作液 260 mL/孔，充分洗涂4~5次，每次间隔10s，泼掉板孔内洗涂液，用吸水纸拍干。加入底物A液 50 μL孔、底物B液50 μL孔，轻轻振荡混匀，25°C恒溫箱避光显色15 min,每孔加入终止液 50 yL，轻轻振荡混匀，用酶标仪，测定每孔吸光度值。
[0048] 用每个浓度的标准品溶液的吸光度平均值(B)除W第一个标准品溶液(0标准）的 吸光度值(Bo)再乘W100%，得到百分吸光度值。W洛美沙星标准品浓度(yg/L)的半对数值 为X轴，百分吸光度值为Y轴，绘制标准曲线图。得到的标准曲线如图3所示。
[0049] 百分吸光度值(％)=(B/B0) X100% 2、 样品中洛美沙星浓度的测定 用每个检测样本溶液的吸光度平均值(B)除W第一个标准品溶液(0标准）的吸光度值 (Bo)再乘W100%，得到百分吸光度值。相对应每一个检测样本溶液的百分吸光度值，则可从 标准曲线上读出检测样本溶液的吸光度值，再根据标准品溶液的浓度值换算出样本溶液中 洛美沙星的残留量，最后再乘W各样品前处理过程的稀释倍数，即可计算出样品中洛美沙 星的浓度。
[0050] 四、试剂盒检测效果评价 (一)准确度和精密度试验 向不含洛美沙星的鸡肉、猪肉样品中添加洛美沙星标准品，使洛美沙星标准品在样品 中的终浓度分别为4、8、16 μg/レ将添加后的样品分别按照实验Ξ中所述方法进行前处理， 得到检测样本溶液。
[0051] 从Ξ个不同批次的试剂盒中各抽取3个试剂盒进行检测，检测方法如实验Ξ中所 述，每个实验重复5次，分别计算变异系数。结果分别见表1。
[0052] 表1准确度和精密度试验结果
批内变异系数:同一次测定中各平行样本的变异系数。
[0053] 批间变异系数:同一样本在不同批次测定结果的变异系数，取其平均值。
[0054] 结果表明：鸡肉样品的平均添加回收率在86.9~97.3%，批内变异系数在6.4~ 13.6%，批间变异系数在9.8~10.1 %;猪肉样品的平均添加回收率在87.0~102.3%，批内变异 系数在3.7~11.0%，批间变异系数在7.0~9.5%。
[0055] (二)试剂盒保存期 试剂盒保存条件为2~8°C，经过15个月的测定，试剂盒的最大吸光度值(0标准），50%抑 制浓度、洛美沙星添加实际测定值均在正常范围之内。考虑到运输和使用过程中，会有非正 常保存条件出现，将试剂盒在37°C保存的条件下放置9天，进行加速老化实验，结果表明该 试剂盒的各项指标完全符合要求。考虑到试剂盒冷冻情况发生，将试剂盒放入-20°C冰箱冷 冻9天，测定结果也表明试剂盒各项指标完全正常。从W上结果可得出试剂盒可W在2~8°C 至少可W保存12个月W上。
[0056] (Ξ)交叉反应率试验 选择与洛美沙星结构或功能相似的其他药物进行交叉反应试验，通过各种药物的标准 曲线分别得到其50%抑制浓度。计算试剂盒对其它类似物的交叉反应率，与其他药物的交叉 反应率越小，说明洛美沙星酶联免疫检测试剂盒对洛美沙星的检测特异性越好。结果见表 2。
[0化7] 表2洛美沙星试剂盒交叉反应率
试验结果表明，本发明试剂盒对洛美沙星的交叉反应率为100%、氧氣沙星、达氣沙星、 诺氣沙星和培氣沙星的交叉反应率均小于1%，所W试剂盒对洛美沙星的特异性好，即本发 明试剂盒可W检测洛美沙星。
【主权项】
1. 一种洛美沙星半抗原，为式1所示产物：2. 式1所示产物的制备方法，包括如下步骤： 50ml圆底烧瓶中加入氯化亚讽10ml，20-24°C磁力揽拌下分批加入洛美沙星原料药 1100.3mg，50-60°C磁力揽拌3-4小时后50-55°C加压浓缩，残留物中加入10ml THF溶解，得 洛美沙星酷氯中间体；50ml圆底烧瓶中加入4-氨基下酸645.8mg，THF 20ml，Ξ乙胺 1266.5mg，20-24°C磁力揽拌15-30min后滴加上步洛美沙星酷氯中间体THF溶液10ml，20-24 °C磁力揽拌3-4小时后35-40°C减压浓缩，残留物中加入30ml水，1M盐酸调PH到6.5-7，析出 类白色固体，过滤，滤饼用10ml水洗，收集滤饼50°C鼓风干燥5-6小时得到957 mg洛美沙星 4-氨基下酸半抗原。3. -种洛美沙星抗原，是将式1所示产物和载体蛋白偶联得到的偶联物。4. 根据权利要求3所述的洛美沙星抗原，其特征在于，所述载体蛋白可为牛血清白蛋 白，卵清蛋白，人血清白蛋白，鼠血清白蛋白，甲状腺蛋白或血蓝蛋白。5. 权利要求3所述洛美沙星抗原的制备方法，包括如下步骤： (1) 将19.5mg洛美沙星半抗原用1.5ml DMF溶解，200巧m揽拌10分钟，加入抓C 21.5mg 溶解后再加入畑S 13mg，室溫50化pm揽拌活化2-3小时； (2) 称取BSA 50mg溶于3.5ml 0.1M碳酸氨钢溶液中，200巧m揽拌10分钟，使其充分溶 解，将步骤（1)反应液于<4°C冰浴100化pm条件下边揽拌，逐滴加入至化SA溶液中，于50化pm 揽拌反应24小时； (3) 将反应产物装入蒸馈水冲洗干净透析袋，1L 0.01M PH7.2 PBS，4°C l(K)rpm揽拌， 透析3天，每天换液3次，将透析产物5000巧m离屯、6min，-20 °C保存备用。6. 权利要求3所述洛美沙星抗原在制备洛美沙星特异性抗体中的应用。7. 应用权利要求3所述洛美沙星抗原制备得到的特异性抗体。8. 权利要求1所述产物、权利要求3所述洛美沙星抗原、权利要求7所述抗体在检测洛美 沙星中的应用。9. 应用权利要求1所述产物、权利要求3所述洛美沙星抗原、权利要求7所述特异性抗体 制备得到的酶联免疫检测试剂盒。10. 权利要求9所述酶联免疫检测试剂盒，其特征在于包括:包被有洛美沙星抗原的酶 标板、酶标抗体工作液、洛美沙星系列标准品、底物显色液、终止液、浓缩复溶液、浓缩洗涂 液。
【文档编号】C07K14/77GK106083815SQ201610516996
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年7月4日
【发明人】曹罡, 吴雨洋, 秦誉, 王照鹏, 李诗焱, 刘薇
【申请人】北京明日达科技发展有限责任公司