高纯度他克莫司化合物及其制备方法
【专利摘要】本发明涉及药物纯化技术领域，公开了一种高纯度他克莫司化合物及其制备方法。本发明将预处理过的他克莫司粗品经过含银离子聚合物树脂柱层析洗脱，洗脱液浓缩后进行重结晶，获得高纯度他克莫司。本发明提供的方法规模化生产操作简单，溶媒耗用量少，生产周期短，成本低，友好环境，经HPLC检测，他克莫司粗品中最难分离的子囊霉素和二氢他克莫司完全去除。他克莫司归一化纯度为99％以上，并且所获他克莫司晶体的粒度分布均匀、晶体内应力和堆密度小，其稳定性、流动性、分散性和溶解性均较好。提高了他克莫司的质量及用药安全。
【专利说明】
高纯度他克莫司化合物及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及药物纯化技术领域，具体涉及一种高纯度他克莫司化合物及其制备方 法。
【背景技术】
[0002] 他克莫司是一种新型强效的大环内酯类免疫抑制剂，1991年日本开发的名为普乐 可复(Prograf)他克莫司胶囊剂和注射剂正式上市，用于原发性肝移植和肾移植的排斥反 应治疗，后又被批准用于骨髓移植。目前他克莫司制剂已在中国、日本、美国等80多个国家 上市，广泛应用于肝脏、胰腺、肾脏、心脏和肺等实体器官移植后的抗排异治疗。1999年他克 莫司软膏投放日本市场，用于治疗成人的特应性皮炎。
[0003] 他克莫司是从链霉菌属（streptomyces tsukubaensis)中分离出的发酵产物，由 于他克莫司结构复杂，手性基团比较多，而且其发酵液中有很多异构体和类似物，如二氢他 克莫司、子囊霉素等，其中子囊霉素比他克莫司只少1个亚甲基，二氢他克莫司比他克莫司 多2个氢原子，因此子囊霉素、二氢他克莫司和他克莫司结构极为相似，在溶剂中的溶解性 和对溶剂的亲和力相近，这些物质的存在使得他克莫司采用常规的分离纯化方法无法完全 分离而达到相应的纯度，从而难以满足市场需要。
[0004] 中国发明专利CN85109492，公开了一种通过大孔吸附树脂HP20，硅胶，活性炭来制 备FK506粗品的方法:a.浸提:用有机溶剂来浸泡发酵液过滤得到的菌丝体，过滤得浸提液， b. 吸附和解吸:浸提液中投入树脂HP20吸附，有机溶剂和水的混合溶剂洗脱，收集液浓缩， c. 萃取:浓缩液中加入乙酯等疏水性溶剂萃取，萃取液浓缩，d.硅胶层析:萃取浓缩液通过 硅胶柱，用乙酯正己烷混合液洗脱，收集洗脱液浓缩得粗品。
[0005] 美国发明专利US2012065393(A1)，公开了一种制备FK506粗品的方法:a.浸提：用 醇，酮，酯类有机溶剂来浸泡发酵液过滤得到的菌丝体，过滤得浸提液，b.反萃取:浸提液中 加入卤代烷类来反萃，萃取液浓缩，c.柱层析:萃取浓缩液稀释后过硅胶柱或氧化铝柱除掉 色素和油脂，d.结晶：收集洗脱液浓缩至一定体积加入去离子水，搅拌降温结晶，e.过滤的 湿晶，用烷烃洗涤，烘干得粗品，粗品纯度在92-95%之间，收率在70-75%之间。
[0006] 中国发明专利CN200580043951.6，公开了一种提纯大环内酯的方法，其中大环内 酯负载置与湿吸附树脂床相邻放置，负载和床在大于30°C用有机溶剂洗脱液洗脱，有机溶 剂选自THF、乙腈、正丙醇、异丙醇、乙醇和丙酮，收集洗脱液的中间级分，收集提纯的大环内 酯，结晶采用乙酸乙酯，环己烷和水的三相系统。
[0007] 中国发明专利CN200910146378.1，公开了以他克莫司粗品作为原料，经过有机溶 剂溶解，用C18反相制备液相色谱法实现他克莫司和子囊霉素、二氢他克莫司的分离纯化。
[0008] 中国发明专利CN201210353577,公开了一种他克莫司粗品的纯化方法，将他克莫 司粗品经第一有机溶剂溶解并超声振荡后，采用快速滤纸抽滤，之后把抽滤所得的滤液即 样品溶液通过制备型高速逆流色谱仪进行连续纯化。
[0009] 中国发明专利CN201310534184,公开了一种制备高纯度他克莫司的工艺，利用四 氢呋喃溶解，加纯水，过滤;接着利用C18反相色谱柱纯化，纯度可达99.5%以上，单个杂质 含量不大于0.3%，总杂质含量不大于0.5%，收率可达50-80%。
[0010]以上纯化方法均采用正相或反相柱层析的方法来获得粗品，需用特殊的设备、消 耗大量的有机溶剂，产生大量的废水，废液、废弃填料如硅胶等，其中洗脱溶剂如乙腈、异丙 醇、正己烷，卤代烷对人体毒性大，工艺耗时长且操作复杂不安全；
[0011]中国发明专利CN200480008682.5，公开了一种大环内酯物质的结晶与纯化方法， 用极性溶剂如乙酸异丁酯、乙酸乙酯萃取，所得萃取液加入水或甲醇-水-正己烷体系洗涤、 浓缩后获得油状物浓缩物，然后与极性溶剂、烃溶剂及其含碱的水溶液混合，重结晶，获得 大环内脂如他克莫司的粗品，但是获得粗品的纯度低，最高纯度为85.03%;该方法虽然没 有用到柱层析纯化，但需要进一步纯化才能达到药品标准的要求。
[0012] 中国发明专利CN200580037031.3，公开了一种藤霉素的纯化方法，包括4个步骤： 1)发酵液萃取-吸附树脂纯化;2)硅胶纯化;3)藤霉素-银-π-络合物的溶解和纯化;4)乙腈/ 水重结晶，获得纯度大于99 %的成品。但是该方法步骤2)中用到大量有机溶剂作为洗脱剂； 步骤3)用到C18反相硅胶纯化，成本高;步骤4)用到乙腈重结晶，毒性大；因此该工艺不利于 工业化大生产。
[0013] 中国发明专利CN200910146385,公开了一种将链霉菌发酵液用板框压滤得到菌 体，用有机溶剂多次室温浸提菌体，得到浸提液，将浸提液浓缩后进行大孔树脂和硅胶柱层 析，柱层析所得他克莫司用混合溶剂进行浓缩，采用乙酸乙酯/正己烷或乙酸乙酯/环己烷 重结晶，他克莫司的纯度最高为95.8%，纯度低。
[0014] 中国发明专利CN2005800439516公开了一种提纯他克莫司工艺方法，经过3个层析 柱柱层析、萃取，采用乙酸乙酯、环己烷和水体系重结晶，但是该方法重结晶时间长，在12小 时以上，所得晶体40 °C减压干燥12h，然后25 °C干燥24h，干燥时间长，此方法重复结晶2-4 次，操作复杂，收率低，最终获得的产品重量含量为99.84%。
[0015] 因此，提供一种能降低杂质及生产成本、提高产品质量的更有效的纯化方法十分 必要。
【发明内容】
[0016] 本发明的目的就是为了克服现有技术中纯化分离他克莫司发酵液杂质多，分离难 度大，现有纯化方法复杂、耗时长、纯度和收率低的不足，提供了一种高纯度他克莫司化合 物及其制备方法，解决了现有纯化方法中子囊霉素和二氢他克莫司分离难度大、收率低、耗 时长、洗脱溶剂用量大、污染高、不利于工业化大生产的问题。
[0017] 为了解决上述技术问题，本发明通过下述技术方案得以解决：
[0018] 本发明目的之一是提供一种高纯度他克莫司，该他克莫司中子囊霉素和二氢他克 莫司含量为〇.〇%、其它单个杂质分别小于0.05%。
[0019]该高纯度他克莫司归一化纯度为99%以上，并且该高纯度的他克莫司晶体的粒度 分布均匀、晶体内应力和堆密度小，其稳定性、流动性、分散性和溶解性均较好，提高了他克 莫司的质量及用药安全。
[0020] 本发明另一个目的是提供一种高纯度他克莫司的制备方法，包括如下步骤：
[0021] 1)将含有子囊霉素和二氢他克莫司杂质的他克莫司粗品吸附到含银离子聚合物 树脂上；
[0022] 2)用中等极性的混合溶媒洗脱，收集含有他克莫司的流份，浓缩后获得他克莫司 浓缩物；
[0023] 3)用中等极性溶媒溶解他克莫司浓缩物，搅拌条件下溶解完全后加入水，开始析 晶，线性降温，析晶完全后过滤、干燥，即获得高纯度他克莫司。
[0024] 1)中所述含银离子聚合物树脂上是指在市场上购买的常规含银离子聚合物树脂。 [0025]作为优选，步骤2)中所述中等极性的混合溶媒为甲醇/乙酸乙酯、乙醇/乙酸乙酯、 丙酮/乙酸乙酯中的任一种混合，所述混合溶媒的体积比为35~65:65~35,更优选乙醇/乙 酸乙酯体积比为45:55。
[0026]步骤2)中优选了甲醇/乙酸乙酯、乙醇/乙酸乙酯、丙酮/乙酸乙酯中的任一种混 合，毒性小，混合溶媒极性大小刚好将他克莫司与子囊霉素和二氢他克莫司杂质充分分开 而交叉的混合液少，减少他克莫司的损失，有利于提高产率。
[0027] 进一步的，步骤2)中所述中等极性的混合溶媒洗脱流速为0.6~1 .OBV/h。
[0028]现有技术中在分离子囊霉素和二氢他克莫司时，多采用反相色谱柱层析，或是采 用含有银离子的水溶液与他克莫司粗品先结合，或者含有银离子的水溶液与离子交换树脂 交换，都是在含水的体系中纯化，但是本领域技术人员经实验发现，他克莫司在含水的溶液 中不稳定，容易向异构体转化。而本发明在柱层析整个纯化过程中，均没有用到含水体系的 溶媒，利于他克莫司的稳定性。
[0029]作为优选，步骤3)中所述中等极性溶媒是甲醇、乙醇、丙酮中的任一种，优选乙醇； 步骤3)中所述他克莫司浓缩物与中等极性溶媒重量体积比为150~160: lmg/ml。
[0030]作为优选，步骤3)中所述加入水的方式是流加分批加入，第一批加入水与中等极 性溶媒的体积比为0.7~0.9:1;接着加入晶种，所述晶种占他克莫司粗品重量的2~3%;搅 拌0.5~1.5h，优选1. Oh，第二批加入水与中等极性溶媒的体积比为0.3~0.5:1。
[0031] 进一步的，所述流加水匀速加入时间控制在0.5~1.5h，优选1 .Oh。
[0032] 作为优选，步骤3)中所述开始析晶温度为30~35°C;所述线性降温至5~10°C，优 选 8。。。
[0033] 作为优选，步骤3)中所述线性降温速率为3~7 °C /h，优选6 °C /h。
[0034] 作为优选，步骤3)中所述搅拌速度为70~130rpm;所述干燥温度为40~50°C，干燥 4 ~5h〇
[0035] 本发明步骤3)提供的重结晶方法制备的他克莫司晶形颗粒大而分布均匀，晶体内 应力和堆密度小，其稳定性、流动性、分散性和溶解性均较好。晶形的光泽度好，空间大，夹 渣的溶剂少，干燥时间短，由原来干燥2天，缩短到4~5小时，节约能源，避免在长时间干燥 过程中他克莫司水合物晶型转化为他克莫司无水物晶型的情况发生。
[0036] 本发明与现有技术相比，带来的意料不到的技术效果如下：
[0037] 1、产品纯度高:与他克莫司最接近的两个杂质子囊霉素和二氢他克莫司可以全部 去除，达到99%的纯度，提高了他克莫司的药品质量，从而用药安全性能更高。
[0038] 2、工艺简单且收率高:可以轻松的除去与他克莫司结构最接近的两个杂质子囊霉 素和二氢他克莫司，并且工艺操作简单，溶媒耗用量少，生产周期短，成本低，同时可以达到 91 %以上的收率。因此本工艺更适宜于工业化大生产。
【附图说明】
[0039]图1是本发明实施例1中含银离子聚合物树脂除杂前的HPLC谱图。
[0040]图2是本发明实施例1中含银离子聚合物树脂除杂后的HPLC谱图。
[0041 ]图3是本发明实施例1 一次性加完1.2BV水的结晶晶体扫描图。
[0042]图4是本发明实施例2分二次加水，第一次加水0.8BV，第二次加水0.4BV水的结晶 晶体扫描图。
[0043] 图5是本发明实施例2重结晶后获得他克莫司纯品的粒度分布图。
[0044] 图6是本发明实施例2重结晶后获得他克莫司纯品的HPLC谱图。
【具体实施方式】
[0045] 本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是， 所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发 明。
[0046] 本发明用到的仪器如下：
[0047] 采用日本日立S-4800型扫描电子显微镜对晶型进行SEM分析，操作电压为15.0kV， 电流ΙΟμΑ，工作距离10.3mm。样品在进行观察之前在真空下进行表面喷金处理，真空度 10Pa，喷金时间60s。
[0048] 粒度仪(PSD分析)所使用的仪器设备型号为Microtrac S3500激光粒度仪器。检测 方法参数：调零时间：30S;检测时间：30S;分散剂为水；分散剂流速：55 %，样品折射率： 1.58，分散剂折射率:1.33，积分方式:体积，激光源波长:780nm。
[0049] 高效液相色谱(HPLC)谱图数据采自于高效液相色谱仪:Agilent 1260;
[0050] 色谱柱:C8柱(4.6X150mm，5ym);
[00511 流动相：
[0052] 溶液A: 0 · 02mol/L磷酸二氢钾溶液，用磷酸调pH至3 · 5。
[0053] 溶液B:乙腈；
[0054] 紫外检测波长：210nm;
[0055] 柱温:60 °C;
[0056] 流速：1 .Oml/min;进样量：20ul。
[0057] 在市场上购买的含银离子聚合物树脂均适用于本发明的步骤1)和2)，本发明的具 体实施例采用含银离子聚合物树脂的孔径为15~25nm，孔的容积为1.20~1.35cm 3/g，比表 面积 260 ~480m2/g。
[0058] 为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明进行详细说明。
[0059] 实施例1
[0060] 1)取含银离子聚合物树脂280ml，在装柱前，需先将树脂置于玻璃烧杯中，加入丙 酮，浸润及超过树脂表层2cm左右，浸泡3小时后，过滤浸泡树脂，在层析柱内加入1/3体积的 丙酮，再加入浸泡过的树脂，树脂装料完毕，径高比约1:7.8;用甲醇再生树脂，控制流速 1 BV/h，再生丙酮用量为柱体积的5BV，再用甲醇与乙酸乙酯体积比为49 : 51的混合溶媒平 衡，混合溶媒用量为柱体积的2BV。
[0061] 2)上柱液配制及上样：按层析树脂装量体积计算上柱总亿（每毫升层析树脂上 9mg)，称取他克莫司粗品2.8g，该粗品包含了 1.56 %子囊霉素，4.11 %的二氢他克莫司，重 量含量为90%，见图1，其中2.52g为活性成分。溶于甲醇与乙酸乙酯体积比为51:49的混合 溶媒溶解中，配成200mg/ml的上柱液。上柱前，先将层析上端溶媒移出至柱中树脂表面上端 溶媒约1 cm，加入上述上柱液，打开柱下出口阀，控制流速0.5BV/h，上柱液吸附完毕。
[0062] 3)洗脱：用甲醇与乙酸乙酯体积比为51:49的混合溶媒洗脱，控制流速1. OBV/h，收 集他克莫司洗脱液流份，洗脱溶剂用量4BV，经HPLC检测，将子囊霉素和二氢他克莫司归一 化含量均为〇 . 〇 %的洗脱液流份合并，合并液体积410ml，取样检测，见图2，效价:4924ug/ ml，层析收率达80.1%。
[0063] 4)浓缩:将含有他克莫司组分要求合格的流份在水浴温度为60°C条件下减压浓 缩，获得其浓缩物。
[0064] 5)结晶：加甲醇溶解，配制成160mg/ml结晶溶液，置于35°C结晶恒温低温糟中，搅 拌，搅拌速度为80rpm，加入溶解液体积的1.2BV纯水，加入2.0%晶种，搅拌lh后，以3°C/h速 率降温，搅拌线性降温至10°C，过滤，用15%的甲醇水溶液淋洗晶体，真空抽滤除去淋洗液， 晶体真空干燥，真空度-0. 〇9MPa，50°C干燥5小时，得1.83g成品，取成品经HPLC检测，归一化 含量97.2%;重复结晶1次，得1.67g成品，该晶体扫描图见图3;取成品经HPLC检测，归一化 含量99.2 % ;子囊霉素:0.00%和二氢他克莫司：0.00 %，总杂质归一化含量0.04%。重结晶 收率达91.3%。
[0065] 实施例2
[0066] 1)取含银离子聚合物树脂280ml(层析柱0 3.6cm)，用乙醇再生树脂，控制流速 1 BV/h，再生溶媒用量为柱体积的2BV，再用乙醇与乙酸乙酯体积比为45 : 55的混合溶媒平 衡，混合溶媒用量为柱体积的2BV。
[0067] 2)上柱液配制及上样：按层析树脂装量体积计算上柱总亿（每毫升层析树脂上 1 〇mg )，称取他克莫司中间体粗品3.11 g，该粗品包含了 1.56 %子囊霉素，4.11 %的二氢他克 莫司，重量含量为90%，其中2.8g为活性成分，溶于乙醇与乙酸乙酯的体积比为45:55的混 合溶媒中，配成250mg/ml的上柱液。上柱前，先将层析上端溶媒移出至柱中树脂表面上端溶 媒约l-2cm，加入上述上柱液，打开柱下出口阀，控制流速0.5BV/h，上柱液吸附完毕。
[0068] 3)洗脱：用乙醇：乙酸乙酯的体积比为45: 55的混合溶媒洗脱，控制流速0.8BV/h， 收集他克莫司洗脱液流份，洗脱溶剂用量4BV，经HPLC检测，将子囊霉素和二氢他克莫司归 一化含量均为〇 . 〇 %的洗脱液流份合并，合并液体积420ml，取样检测，效价:5488ug/ml，层 析收率达82.3%。
[0069] 4)浓缩:将含有他克莫司组分要求的流份在水浴温度为60°C条件下减压浓缩，获 得其浓缩物。
[0070] 5)结晶：加乙醇溶解，配制成155mg/ml结晶溶液，置于32°C结晶恒温低温糟中，搅 拌，搅拌速度为l〇〇rpm，加入溶解液体积的0.8BV纯水，加入2.0 %晶种，搅拌lh后，流加溶解 液体积的0.4BV纯水，lh加完，以5°C/h速率降温，搅拌线性降温至8°C，过滤，用15%的甲醇 水溶液淋洗晶体，真空抽滤除去淋洗液，晶体真空干燥，真空度-〇. 〇9MPa，43°C干燥4.5小 时，得2.15g成品，取成品经HPLC检测，归一化含量99.8% ;该晶体扫描图见图4、该晶体的粒 度分布图见图5 ;见图6 ;子囊霉素：0.00 %和二氢他克莫司：0.00%，总杂质归一化含量 0.00%。结晶收率达91.6%。
[0071] 实施例3
[0072] 1)取含银离子聚合物树脂120L，在装柱(层析柱0 30cm)前，需先将树脂置于不锈 钢桶中，加入乙醇，要求浸润及超过树脂表层2cm，浸泡4小时后，过滤浸泡树脂，在层析柱内 加入1/3中等极性的溶媒，再加入浸泡过的树脂，树脂装料完毕，径高比约1:5.7;用乙醇再 生树脂，控制流速1 BV/h，再生溶媒用量为柱体积的5BV，再用乙醇：乙酸乙酯的体积比为45: 55的混合溶媒平衡，混合溶媒用量为柱体积的5BV。
[0073] 2)上柱液配制及上样：按层析树脂装量体积计算上柱总亿（每毫升层析树脂上 9mg )，称取他克莫司中间体粗品1220g，该粗品包含了 1.15 %子囊霉素，3.61 %的二氢他克 莫司，重量含量为88.5%，其中1080g为活性成分，用乙醇：乙酸乙酯的体积比为45:55的混 合溶媒溶解中间体粗品，配成230mg/ml的上柱液。上柱前，先将层析上端溶媒移出至柱中树 脂表面上端溶媒约l-2cm，加入上述上柱液，打开柱下出口阀，控制流速0.5BV/h上柱液吸附 完毕。
[0074] 3)洗脱：用乙醇：乙酸乙酯的体积比为45: 55的混合溶媒洗脱，控制流速0.7BV/h， 打开检测器，波长:245nm，收集洗脱流份，约每20L收集一桶，至有他克莫司单位的流份，取 样，HPLC检测，到洗脱流份他克莫司单位<800ug/ml，结束洗脱，洗脱溶剂用量4BV，将子囊霉 素和二氢他克莫司归一化含量均为0.0 %的洗脱液流份合并，合并液体积162L，取样检测， 效价:5392ug/ml，层析收率达80.9 %。
[0075] 4)浓缩:将含有他克莫司组分要求的流份在水浴温度为60条件下减压浓缩，获得 其浓缩物。
[0076] 5)结晶：加乙醇溶解，配制成155mg/ml结晶溶液，置于33°C结晶恒温低温糟中，搅 拌，搅拌速度为1 l〇rpm，加入溶解液体积的0.8BV纯水，加入2.5 %晶种，搅拌lh后，流加溶解 液体积的0.4BV纯水，1.5h加完，以6°C/h速率降温，搅拌线性降温至8°C，过滤，用15%的甲 醇水溶液淋洗晶体，真空抽滤除去淋洗液，晶体真空干燥，真空度-〇 . 〇9MPa，45°C干燥5小 时，得822g成品，取成品经HPLC检测，归一化含量99.8 % ;子囊霉素：0.00 %和二氢他克莫 司：0.00 %，总杂质归一化含量0.00 %。结晶收率达91.8 %。
[0077] 实施例4
[0078] 1)取本实施例3已使用过的含银离子聚合物树脂280ml (层析柱0 3.6cm)，用甲醇 再生树脂，控制流速lBV/h，再生溶媒用量为柱体积的2BV，再用甲醇与乙酸乙酯体积比为 35:65的混合溶媒平衡，混合溶媒用量为柱体积的5BV。
[0079] 2)上柱液配制及上样：按层析树脂装量体积计算上柱总亿（每毫升层析树脂上 12mg)，称取他克莫司中间体粗品3.95g，该粗品包含了 1.56%子囊霉素，4.11 %的二氢他克 莫司重量含量为85.1%，其中3.36g为活性成分，溶于丙酮与乙酸乙酯的体积比为35:65的 混合溶媒中，配成250mg/ml的上柱液。上柱前，先将层析上端溶媒移出至柱中树脂表面上端 溶媒约1.5cm，加入上述上柱液，打开柱下出口阀，控制流速0.5BV/h，上柱液吸附完毕。
[0080] 3)洗脱：用丙酮：乙酸乙酯的体积比为35:65的混合溶媒洗脱，控制流速0.7BV/h， 收集洗脱流份，经HPLC检测，合并子囊霉素和二氢他克莫司归一化含量均为0.0 %的洗脱液 流份，合并液体积470ml，取样检测，效价:5756ug/ml，层析收率达80.5 %。
[0081] 4)浓缩:将含有他克莫司组分要求的流份在水浴温度为60°C条件下减压浓缩，获 得其浓缩物。
[0082] 5)结晶：加丙酮溶解，配制成150mg/ml结晶溶液，置于30°C结晶恒温低温糟中，搅 拌，搅拌速度为130rpm，加入溶解液体积的0.9BV纯水，加入3 %晶种，搅拌lh后，流加溶解液 体积的0.3BV纯水，0.5h加完，以7°C/h速率降温，搅拌线性降温至5°C，过滤，用15%的甲醇 水溶液淋洗晶体，真空抽滤除去淋洗液，晶体干燥，真空度-〇. 〇9MPa，温度40°C，干燥4小时， 得2.56g成品，取成品经HPLC检测，归一化含量99.5 % ;子囊霉素:0.00 %和二氢他克莫司： 0.00 %，总杂质归一化含量0.05 %。结晶收率达91.6 %。
[0083] 对比实施例5
[0084]不同层析方式纯化他克莫司粗品
[0085] 具体结果如下表：
[0086]
[0087]从上表知，现有技术中分离子囊霉素和二氢他克莫司时，均在含水体系中进行，而 且在保证高收率的情况下，子囊霉素和二氢他克莫司这两个杂质很难完全分开。然而本发 明提供的分离方法，采用无水体系溶剂洗脱分离，避免他克莫司向异构体转化，使柱层析收 率高达80%以上，并且，层析周期短，溶剂用量少。本发明所用的柱层析为常压层析柱，对设 备要求低。
[0088] 对比实施例6
[0089]不同结晶方法，获得的晶体物理特性具体结果如下表：
[0090]
[0091] 由上表知，本发明采用甲醇、乙醇或丙酮溶解他克莫司粗品后，分批流加纯化水， 加晶种，线性降温，降温速率优选6°C/h，结晶晶体粒度大，分布均匀，堆密度小，流动性好， 干燥时间短，产品含量高。
[0092] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人 员来说，在不脱离本发明的前提下，还可以做出若干改进，这些改进也应视为本发明的保护 范围。
【主权项】
1. 一种高纯度他克莫司，其特征在于，该他克莫司中子囊霉素和二氢他克莫司含量为 0.0%、其它单个杂质分别小于0.05%。2. 如权利要求1所述高纯度他克莫司的制备方法，包括如下步骤： 1) 将含有子囊霉素和二氢他克莫司杂质的他克莫司粗品吸附到含银离子聚合物树脂 上； 2) 用中等极性的混合溶媒洗脱，收集含有他克莫司的流份，浓缩后获得他克莫司浓缩 物； 3) 用中等极性溶媒溶解他克莫司浓缩物，搅拌条件下溶解完全后加入水，开始析晶，线 性降温，析晶完全后过滤、干燥，即获得高纯度他克莫司。3. 如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述中等极性的混合溶媒为甲醇/ 乙酸乙酯、乙醇/乙酸乙酯、丙酮/乙酸乙中的任一种混合，所述混合溶媒的体积比为35~ 65:65~35，优选乙醇/乙酸乙酯体积比为45:55。4. 如权利要求2或3所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述中等极性的混合溶媒洗脱 流速为0.6~1.0BV/h。5. 如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤3)中所述中等极性溶媒是甲醇、乙醇、丙 酮中的任一种，优选乙醇;步骤3)中所述他克莫司浓缩物与中等极性溶媒重量体积比为150 ~160:lmg/ml〇6. 如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤3)中所述加入水的方式是流加分批加 入，第一批加入水与中等极性溶媒的体积比为0.7~0.9:1;接着加入晶种，所述晶种占他克 莫司粗品重量的2~3% ;搅拌0.5~1.5h，优选1. Oh，第二批加入水与中等极性溶媒的体积 比为0.3~0.5:1。7. 如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述流加水匀速加入时间控制在0.5~1.5h， 优选1 .Oh。8. 如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤3)中所述开始析晶温度为30~35°C;所 述线性降温至5~10°C，优选8°C。9. 如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤3)中所述线性降温速率为3~7°C/h，优 选 5°C/h。10. 如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤3)中所述搅拌速度为70~130rpm;所述 干燥温度为40~50°C，干燥4~5h。
【文档编号】C07D498/18GK106083892SQ201610410561
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月13日 公开号201610410561.8, CN 106083892 A, CN 106083892A, CN 201610410561, CN-A-106083892, CN106083892 A, CN106083892A, CN201610410561, CN201610410561.8
【发明人】诸敏, 吴萍, 吴文艺, 纪立君, 高庆峰
【申请人】杭州中美华东制药有限公司