扣囊复膜孢酵母新菌株及其培养方法和用图
【专利摘要】本发明属于微生物领域，具体涉及一种扣囊复膜孢酵母(Saccharomycopsis fibuligera)新菌株及其培养方法和用途。本发明要解决的技术问题是提供能同时具有较好的脱除硫甙和棉酚能力的技术手段。本发明解决该技术问题的技术方案是提供一种新的扣囊复膜孢酵母菌株。该扣囊复膜孢酵母菌株的保藏号CGMCC No.12221，命名为扣囊复膜孢酵母WNY?2号。该菌株对菜粕中硫葡萄糖甙以及棉粕中棉酚均有较强脱毒能力的扣囊复膜孢酵母，并且试验证明其口服安全无毒。本发明为杂粕类微生物技术处理提供了菌种资源，为大规模制备新型生物蛋白原料提供了可靠基础，在饲料养殖领域具有极大的应用价值。CGMCC No. 1222120160317
【专利说明】
扣囊复膜孢酵母新菌株及其培养方法和用途
技术领域
[0001 ] 本发明属于微生物领域，具体涉及涉及一种扣囊复膜孢酵母(Saccharomycopsis fibuligera)新菌株及其培养方法和用途。
【背景技术】：
[0002] 目前我国有大量农副产品及加工副产物或被废弃或未能有效利用，如菜柏和棉柏 等杂柏类，我国每年菜柏年产量约900万吨，棉柏产量约600万吨，蛋白含量高，营养成分丰 富，但由于含有较多毒性物质和抗营养因子，在饲料中利用率极低。菜柏中毒性物主要是硫 葡萄糖甙(简称硫甙），棉柏中毒性物主要是棉酚。未经处理的菜柏及棉柏，在畜禽饲料中添 加量仅能达到3~5% (幼小畜禽不能添加），过量使用会造成畜禽器官损害，生长和繁殖性 能下降。
[0003] 目前，使用微生物技术处理杂柏类生物质已有所报道，使用微生物处理能使硫甙 或棉酚含量降低，饲喂价值提高，可替代部分进口豆柏，降低养殖成本。另外，经发酵处理后 的柏类含有大量益生菌，能提高动物非特异性抗病力，减少抗菌药物的使用，提高食品安全 性。因此，筛选出有较强脱毒能力的菌株对杂柏类生物技术处理有重要意义。目前未见有同 时具有较好的脱除硫甙和棉酚能力的菌种报道。
【发明内容】
：
[0004] 本发明中涉及一株Saccharomycopsis fibuligera扣囊复膜孢酵母WNY-2号，该菌 株于2016年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏 号为CGMCC No. 12221，保藏地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究 所，邮编100101。
[0005] 本发明要解决的技术问题是提供一种能同时具有较好的脱除硫甙和棉酚能力的 新菌种。本发明解决该技术问题的技术方案是提供一种新的扣囊复膜孢酵母菌株。该扣囊 复膜孢酵母菌株的保藏号CGMCC No. 12221。
[0006] 其中，该扣囊复膜孢酵母的16S rDNA序列如SEQ ID No.l所示。
[0007] 本发明还提供了上述扣囊复膜孢酵母的培养方法。该方法包括以下步骤:将所述 扣囊复膜孢酵母新菌株接种到配方为蔗糖10~20g:土豆浸出液1000ml的培养基中，在28~ 32°C温度下培养72~96h。
[0008] 其中，上述方法中所述的土豆浸出液由以下步骤制得:将土豆削皮后切成块状，每 200g土豆加入1000ml的自来水，煮沸20分钟，纱布过滤，弃土豆渣取上清液，用自来水定容 至lj 1000ml。
[0009] 本发明还提供了扣囊复膜孢酵母在菜柏生物发酵中的用途。扣囊复膜孢酵母在菜 柏上进行发酵可降解硫甙。
[0010] 本发明还提供了扣囊复膜孢酵母在棉柏生物发酵中的用途。扣囊复膜孢酵母在棉 柏上进行发酵可降解棉酚。
[0011]本发明的有益效果在于:本发明发现一株对菜柏中硫葡萄糖甙以及棉柏中棉酚均 有较强脱毒能力的扣囊复膜孢酵母。该菌株在48小时内，对硫葡萄糖甙的去除率可达到约 80%，对棉酚的去除率可达60%以上，并且试验证明其口服安全无毒。本发明为杂柏类微生 物技术处理提供了菌种资源，并为大规模制备新型生物蛋白原料提供了可靠基础，在饲料 养殖领域具有极大的应用价值。
[0012] 本发明提供的扣囊复膜孢酵母(5&(^1^1'〇1115^(^8丨8；1^13111丨86瓜)1附-2号，于2016 年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC)，保藏号为 CGMCC No. 12221。保藏地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮 编100101。
【附图说明】：
[0013] 图1本菌株扣囊复膜孢酵母的细胞形态，放大倍数10X10
[0014] 图2本菌株扣囊复膜孢酵母的细胞形态，放大倍数40X10
[0015] 图3本菌株扣囊复膜孢酵母的菌落形态
【具体实施方式】：
[0016] 本发明创造性地提供了扣囊复膜孢酵母(Saccharomycopsis fibuligera)的一种 新菌株，该菌株对硫葡萄糖甙和棉酚都具有较高的降解能力，能同时用在棉柏和菜柏的处 理中，命名为扣囊复膜孢酵母WNY-2,于2016年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委 员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号为CGMCC No.12221。
[0017] 该菌株的16S rDNA序列如SEQ ID No.l所示。
[0018] 该菌株的形态学特征如下：
[0019] 镜下特征：
[0020] 细胞呈椭圆形，细胞大小长5~7.5μπι(平均6.2μπι);宽3.8~5μπι(平均4.5μπι)。可见 细胞出芽，呈单边出芽繁殖。早期生长形成菌丝，并产生芽孢子。（参见图1和图2)
[0021] 菌落特征：
[0022] 菌落白色，扁平;直径约5~10mm;表面粗糙，呈颗粒感；菌落边缘不齐，似放射丝 状，在放大镜下，可见菌丝。（参见图3)
[0023] 进一步的，该菌株的生理生化特征如下：
[0024]糖发酵实验:麦芽糖、蔗糖、果糖、海藻糖、半乳糖、木糖和赤癣糖阳性;乳糖、阿拉 伯糖、棉籽糖和水苏糖阴性；
[0025]碳源同化实验:乳酸钠、柠檬酸钠、乙酸钠、丙酸钠、甘油、乙醇、乳糖、阿拉伯糖、棉 籽糖和水苏糖阳性。
[0026] 氮源利用实验:能利用硝酸盐、硫酸铵和尿素。
[0027] 本发明菌株可由以下具体的培养方法进行培养：
[0028] 1、斜面保存菌种及培养
[0029]从扣囊复膜孢酵母斜面菌种中，用接种环挑取1环接种到土豆蔗糖培养基的斜面 中，其成分为蔗糖10~20g，土豆浸出液1000ml，20g琼脂粉，自然pH。置于28~32°C温度下， 培养72~96h。
[0030] 进一步的，所述培养基成分中土豆浸出液的制备方法是，将新鲜土豆削皮后切成 大指姆大小的块状，称取200g，加入1000ml的自来水，煮沸20分钟，纱布过滤，弃渣取上清 液，用自来水定容到l〇〇〇ml;
[0031] 2、扩大培养 [0032] (1)用于菜柏发酵
[0033] 取菜柏粉150g，加水1000ml，小火煮沸20min，取上清液，加入鹿糖10g、KH2P〇4 lg、 MgS〇4 0.5g、溶化后水定容1000ml，蒸汽灭菌120°C维持30分钟，待冷后备用；
[0034] (2)用于棉柏发酵
[0035] 取棉柏粉150g，加水1000ml，小火煮沸20min，取上清液，加入棉籽糖10g、KH2P〇4 lg、MgS〇4 0.5g，溶化后水定容1000ml，蒸汽灭菌120°C维持30分钟，待冷后备用；
[0036]从斜面菌株中挑取培养物，接入以上培养液中，接种量按1环/200ml。于28~32°C 温度下，摇瓶培养48~60h，振摇速度120~150rpm，得到扣囊复膜孢酵母培养液。
[0037]以下通过实施例对本发明进行更进一步的说明。
[0038] 实施例1菌株的筛选
[0039] 在研究传统白酒酿造的过程中，本发明从酒厂丢糟中筛选得到一些菌株。经过进 一步的研究，一些菌株培养中的生物量较高，因而将其在各种农副产物(包括丢糟等各类加 工糟渣)为基质上培养，均生长良好。进一步发现有一株菌在饼柏类原料上，有降低毒性物 质含量的作用。将其命名为WNY-2,并进行进一步的研究。
[0040] 实施例2菌株的鉴定--16S rDNA序列分析 [0041 ] (1)总0嫩提取
[0042]用土豆蔗糖培养液培养后，离心收集细胞，并用无菌蒸馏水洗涤3次，溶于提取缓 冲液（lOOmMTris · Cl，100mM EDTA-Na2,200mM NaCl，2%CTAB，pH8.0)中，37Γ振荡45min， 加入20 % SDS，65 °C水浴lh。12，OOOrpm，离心10min，收集上清液。上清液用等体积的酚:氯 仿:异戊醇(25:24:1)抽提2次，加入终浓度0.3M的NaAC(pH5.2)及2倍体积的无水乙醇，室温 沉淀lh。4°C下离心（12,000rpm)20min。沉淀用70%乙醇洗涤2次，挥干后溶于50μLTE (1 OmmTri s~Hc,1，lmmNa2EDTA)中。
[0043] (2) 16S rDNA扩增和测序
[0044] 以总DNA为模板，用试剂盒扩增得到16S rDNA产物，送测序公司测序。测序结果表 明，该菌株的16S rDNA(SEQ ID No.l)序列如下：
[0045] TCAATTCGTCAAGTGGAGTTGCCTCCTCCTTTAACCAATCCTGAGGCCTCACTAAGCCATTCAATCGGTACTAGCGA CGGGCGGTGTGTACAAAGGGCAGGGACGTAATCAACGCAAGCTGATGACTTACGCTTACTAGGAATTCCTCGTTGAA GAGCAATAATTGCAATGCTCTATCCCCAGCACGACGGAGTTTCACAAGATTACCCATACCTCTCGGCAAAGGATATA CTCGTTGGCTCCGTCAGTGTAGCGCGCGTGCGGCCCAGAACGTCTAAGGGCATCACAGACCTGTTATTGCCTCAAAC TTCCATCGGCTTGAAACCGATAGTCCCTCTAAGAAGTAACTATATCAGCAAACGCTAACAGTACTATTTAGTAGGTT AAGGTCTCGTTCGTTATCGCAATTAAGCAGACAAATCACTCCACCAACTAAGAACGGCCATGCACCACCACCCACAA AATCAAGAAAGAGCTCTCAATCTGTCAATCCTTATTGTGTCTGGACCTGGTGAGTTTCCCCGTGTTGAGTCAAATTA AGCCGCAGGCTCCACTCCTGGTGGTGCCCTTCCGTCAATTCCTTTAAGTTTCAGCCTTGCGACCATACTCCCCCCAG AACCCAAAAACTTTGATTTCTCGTAAGGTGCCGAGTGAGTCAGTAAAAGAACAACACCCGATCCCTAGTCGGCATAG TTTATGGTTAAGACTACGACGGTATCTGATCATCTTCGATCCCCTAACTTTCGTTCTTGATTAATGAAAACGTCCTT GGCAAATGCTTTCGCAGTAGTTAGTCTTCAATAAATCCAAGAATTTCACCTCTGACAATTGAATACTGATGCCCCCG ACCGTCCCTATTAATCATTACGATGGTCCTAGAAACCAACAAAATAGAACCATACGTCCTATTTCATTATTCCATGC TAATATATTCGAGCTAAACGCCTGCTTTGAACACTCTAATTTTTTCAAAGTAATAGTCCTGGATCATATGCAGCTGA GACAAGCCCAACTACACAGAAACCAGGAGGAAAGGCTCGGCTGAAAACCAGTACTCGTTAAAAAACGGACCGGCCAG CCAAGCCCAAAGTTCAACTACGAGCTTTTTAACTGCAACAACTTTAATATACGCTCTTGGAGCTGGAATTACCGCGG CTGCTGGCACCAGACTTGCCCTCCAATTGTTCCTCGTTAAGGTATTTAAATTGTACTCATTCCAATTACAAGACCCG TAAGGGCCCTGCATCGTTATATATTGTCACTACCTCCCTGTGTCAGGATTGGGTAATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCC TTGGATGTGGTAGCCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAATCGAACCCTTATTCCCCGTTACCCGTTGAAACCATGGT AGGCCACTATCCTACCATCGAAAGTTGATAGGGCAGAAATTTGAATGAACCATCGCCAGCATGAAGCCTTGCGATTC GAGAAGTTATTATGAATCACCAAAGAGCACCGAAGTTATTG〇
[0046] 表1同源性对比分析结果
[0047]
[0048] 经同源性对比分析(结果参见表1)，将其命名为扣囊复膜孢酵母WNY-2,于2016年3 月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC)，保藏号为CGMCC Νο·12221〇
[0049] 实施例3本发明菌株CGMCC No. 12221的形态特征及生理生化特性鉴定
[0050] 1、菌落及菌体形态观察
[0051] 将本菌株划线接种在土豆蔗糖平板培养基上，30°C培养4天，培养期间观察菌落形 态(见图3);用接种针挑取少许菌体，用水浸片法制片，于显微镜下观察菌体形态(见图1和 图2)。
[0052] 结果如下：镜下细胞呈椭圆形，细胞大小长5~7.5μπι(平均6.2μπι);宽3.8~5μπι (4.5μπι)。可见细胞出芽，呈单边出芽繁殖。早期生长形成菌丝，并产生芽孢子(见图1和图2) [0053] 菌落特征：
[0054]菌落白色，扁平；直径约5~10mm;表面粗糙，呈颗粒感；菌落边缘不齐，似放射丝 状，在放大镜下，可见菌丝。（见后图3)
[0055] 2、生理生化特征
[0056] 无碳基础培养液配方：
[0057] (NH4)2S〇4 0.1%、KH2P〇4 0.1%MgS〇4 0.05%酵母膏0.2% 自然pH
[0058] 无氮基础培养液配方：
[0059] 葡萄糖l%、KH2P〇4 0.1%MgS〇4 0.05%酵母膏0.2% 自然pH
[0060] 所用碳源和氮源如下：
[0061 ]糖类:麦芽糖、蔗糖、乳糖、果糖、阿拉伯糖、海藻糖、半乳糖、赤癣糖、棉籽糖、木糖、 水苏糖
[0062]非糖类:乳酸钠柠檬酸钠乙酸钠丙酸钠甘油乙醇 [0063]氮源:硝酸钠、硫酸铵、尿素 [0064]糖发酵试验：
[0065]将无碳基础培养液分装试管5ml/只（加杜氏管），将不同的糖类分别加入不同试管 中（50mg/管）。灭菌115°C维持25min。待冷后接种。30°C培养4天。
[0066] 碳源同化试验：
[0067]将无碳基础培养液分装三角瓶40ml/只，每瓶加入不同的碳源(糖类及非糖类，乙 醇除外)0.5ml (液体)或0.5g(固体），以及0.8g琼脂。灭菌115°C维持25min。待冷却到50°C时 倒平板（乙醇在倒平板前加入）。待平板凝固后接种，每皿在不同位置点种3点，30°C培养4 天。
[0068]氮源利用试验：
[0069]将无氮基础培养液分装三角瓶40ml/只，分别加入硝酸钠、硫酸铵和尿素，各50mg， 以及0.8g琼脂。灭菌115 °C维持25min。待冷却到50 °C时倒平板。待平板凝固后接种，每皿在 不同位置点种3点，30 °C培养4天。
[0070] 实验结果如下表2、表3和表4所示：
[0071]表2糖发酵实验结果
[0072]
[0073] 注：?-表示生长并有气泡，+表示生长无气泡，-表示不生长。
[0074]表3碳源同化实验结果
[0075]
[0076] 注:+生长，-表示不生长。
[0077]表4氮源利用实验结果
[0078]
[0079] 注:+表示生长
[0080]实施例4棉酚降解实验
[0081] 将棉柏原料粉碎，得到棉柏粉。再制备扣囊复膜孢酵母CGMCC No. 12221的固体菌 种；
[0082] 从扣囊复膜孢酵母的斜面保藏菌种中挑取1环(接种环），接入100mL棉柏扩大培养 液中，于30°C温度摇瓶培养(15〇 rpm)50h，得到扣囊复膜孢酵母培养液。
[0083]取扣囊复膜孢酵母液50ml，接入已灭菌的4000g麸皮玉米培养基中（以干料计），拌 合均匀，于30°C温度培养48h，即得扣囊复膜孢酵母固体菌种。
[0084]麸皮玉米培养基的制备:取麸皮3000g，玉米1000g，自来水3200ml，拌合均匀后，于 120 C灭困30min，冷却后可接种。
[0085] 配制混合营养盐:称取KHP〇4 200g、MgS〇4 100g、FeS〇4 10g和ZnS〇4 5g用粉碎机混 合粉碎，全部过100目。
[0086] 取棉柏粉990g、扣囊复膜孢酵母固体菌种8g、混合营养盐2g、和800g水。
[0087] 拌合混匀，在不锈钢盘中平铺均匀，厚度4cm，于30°C温度下发酵48h，50°C温度下 干燥24h后，即得到发酵棉柏。
[0088] 游离棉酚测定方法按GB 13086-91。
[0089]对照未发酵棉柏原料的游离棉酚为833mg/kg，水分11.9%、粗蛋白46.2%。
[0090]测定发酵棉柏的细胞数为1.8 X 109/g，水分12.5%、粗蛋白51.4%、游离棉酚 309mg/kg。游离棉酸降低62.9%。
[0091]实施例5本菌株芥子酶测定 [0092] (1)粗酶液制备
[0093] 从扣囊复膜孢酵母CGMCC No. 12221菌株斜面中挑取1环，接种在100ml 20%菜柏 培养液(20g菜柏粉，加100ml水，煮沸20min，水定容100ml，再加0.05g KH2P〇4，灭菌待用）中， 30°C，150r/min振荡培养48h，离心收集细胞。用0.02mol/ml Tris-HCl (pH6.0)洗涤3次，并 悬浮沉淀定容至l〇ml。在冰浴中超声破碎20min。在4°C下离心lOOOOrpm lOmin，取上清液。 [0094] (2)芥子酶鉴定
[0095] 配制3mg/ml丙烯基硫甙标品（Si gma)溶液。分别取0.5ml粗酶液至两只10ml比色管 中，将其中一支置于沸水浴中加热l〇min(灭酶），冷却至室温。在两只比色管中各加30ul硫 甙标品溶液，37°C保温3h，用蒸馏水定容至5ml。再用3，5-二硝基水杨酸(DNS)定糖法测定两 只比色管溶液中葡萄糖差值，从葡萄糖标准曲线推算硫甙含量为2.95mg/ml。粗酶液与硫甙 标品反应生成了葡萄糖，表明本菌株提取物中含有芥子酶。
[0096] 实施例6本菌株发酵菜柏降解硫甙实验
[0097] 1、固体菌种制备
[0098]从扣囊复膜孢酵母CGMCC No. 12221的斜面保藏菌种中挑取1环，接入100mL菜柏扩 大培养液中，于30°C温度摇瓶培养(150rpm)48h，得到扣囊复膜孢酵母培养液。
[0099]取扣囊复膜孢酵母液50ml，接入已灭菌的4000g麸皮玉米培养基中（以干料计），拌 合均匀，于30°C温度培养48h，即得扣囊复膜孢酵母固体菌种。
[0100] 麸皮玉米培养基的制备:取麸皮3000g，玉米1000g，自来水3200ml，拌合均匀后，于 120 C灭困30min，冷却后可接种。
[0101] 2、菜柏发酵
[0102] 配制混合营养盐:称取KH2P〇4 200g、MgS〇4 90g和ZnS〇4 10g用粉碎机混合粉碎，全 部过100目。
[0103] 取菜柏粉、扣囊复膜孢酵母、混合营养盐和水。拌合混匀，实验分组见下表5。在不 锈钢盘中平铺均匀，厚度3cm，于30°C温度下发酵48h，50°C温度下干燥24h后，即得到发酵菜 柏。
[0104] 表5菜柏发酵实验分组 「01051
[0106] 3、硫甙测定
[0107] 采用微生物酶法测定，粗酶液制备参见实施例5。
[0108] 取发酵样品2g，加入0.02mol/ml Tris-HCl(pH6.0)100ml，振荡（120rpm)30°C浸泡 30min，离心取上清液。
[0109] 分别取lml粗酶液至两支比色管中，将其中一支置于沸水浴中加热lOmin(灭酶）， 冷却至室温。再在两支中各加发酵菜柏上清液lml。置于37°C水浴锅中保温3h，再用蒸馏水 定容至5ml。加入0.5ml DNS试剂。置于沸水浴中显色反应5min。冷却至室温，蒸馏水定容至 10ml。于540nm波长条件下测定吸光度A，在葡萄糖标准曲线中查出葡萄糖含量。根据葡萄糖 差值算出硫甙含量。结果见下表6。
[0110] 表6发酵菜柏样品中硫甙含量测定
[0111]
[0112] 结果表明，该菌株对单一菜柏作为发酵底物时，可以降低其中的硫甙达79.39%。
[0113] 实施例7菌株安全性试验一小鼠经口急性毒性试验
[0114] 1、受试物
[0115] 制备方法:将新鲜土豆削皮后切块，称取100g，加水500ml，煮沸20分钟，过滤后取 上清液，加入蔗糖l〇g，用水定容到500ml，分装250ml三角瓶，每瓶100ml，包扎并蒸汽灭菌 120°C维持30分钟。从扣囊复膜孢酵母斜面菌种中挑取1环，接种到三角瓶中，30°C摇瓶培养 (150rpm)48h，做为动物实验的受试物。
[0116] 2、实验动物动物
[0117]由四川省医学科学院实验动物研究所提供的昆明种小鼠20只，体重为18~20g，雌 雄各半。动物采用群饲，饲料来源于四川省医学科学院实验动物研究所。实验动物房为SPF 级，温度20~25 °C，相对湿度40~70 %。
[0118] 3、剂量和染毒方式:试验前禁食16小时，不限饮水。实验采用的最大耐受剂量法， 设 20ml/kg.b.w(d = 1.01，20X1.01 = 20200mg/kg.b.w)为最大剂量。共 20 只动物，雌雄各 半。一次经口灌胃给予受试物，给药量按20ml/kg.b.w等容量计。染毒后观察动物的一般状 况、中毒症状及死亡情况。观察二周称体重后处死动物并进行大体解剖，记录动物内脏的改 变，根据MTD值进行急性毒性分级。
[0119] 3、实验结果
[0120]染毒后二周内，雌、雄小鼠均未出现明显的中毒症状及死亡，实验结束时处死动物 进行大体解剖，也未见异常改变。见表7。
[0121 ] 表7小鼠急性经口毒性试验结果
[0122]
[0123] 4、结论
[0124] 试验结果表明，本菌株发酵产物对雌、雄小鼠急性经口最大耐受剂量均大于 15000mg/kg. b. w，按急性毒性分级，属无毒级。
【主权项】
1. 扣囊复膜孢酵母新菌株，其特征在于:其保藏号为CGMCC No. 12221。2. 根据权利要求1的扣囊复膜孢酵母新菌株，其特征在于：其16S rDNA序列为SEQ ID No. 1所示。3. 权利要求1或2所述的扣囊复膜孢酵母新菌株的菌种保藏培养方法，其特征在于包括 以下步骤:将所述扣囊复膜孢酵母新菌株接种到配方为蔗糖10~20g: 土豆浸出液1000ml的 培养基中，在28~32°C温度下培养72~96h。4. 根据权利要求3所述的培养方法，其特征在于所述土豆浸出液由以下步骤制得:将土 豆削皮后切成块状，每200g土豆加入1000ml的自来水，煮沸20分钟，纱布过滤，弃土豆渣取 上清液，用自来水定容到l〇〇〇ml。5. 权利要求1或2所述的扣囊复膜孢酵母新菌株在菜柏生物发酵处理中的用途。6. 权利要求1或2所述的扣囊复膜孢酵母新菌株在棉柏生物发酵处理中的用途。
【文档编号】C12R1/645GK106085888SQ201610438783
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月17日
【发明人】邓小晨, 吴谦
【申请人】四川伯禹生物工程有限公司